三聚氰胺单克隆抗体的制备及鉴定

为建立三聚氰胺免疫分析方法,采用戊二醛法合成免疫抗原MEL-BSA和包被抗原MEL-OVA,全抗原经紫外吸收法检测证实偶联成功且偶联比约为16∶1。用MEL-BSA免疫BALB/c小鼠,用常规单克隆制备技术筛选获得1株稳定分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的细胞株6E3。腹水经纯化后,研究了抗体效价、竞争抑制能力及与结构类似物的交叉反应率,其中抗体效价为1∶64 000,检测线性范围为0.1~3.2 mg/L,IC50为1.01 mg/L,与三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺及三聚氰酸二酰胺的交叉反应率均小于0.1%,该方法有望用于三聚氰胺免疫检测试剂的研制开发。     

同时检测恩诺沙星和环丙沙星单克隆抗体的制备

为了产生同时检测恩诺沙星和环丙沙星的抗体,本研究采用戊二醛法制备突出恩诺沙星和环丙沙星共同结构的人工抗原。免疫Balb/c 小鼠的结果显示：使用糖基化载体所制备的免疫抗原,能够大幅提高所产生特异性抗体的滴度。通过细胞融合,筛选出一株对恩诺沙星和环丙沙星IC50 值分别为9.6ng/mL 和10.2ng/mL 的单克隆抗体。     

环丙沙星免疫亲和柱的制备及优化

制备环丙沙星(Cip)抗生素的免疫亲和柱(IAC),研究优化IAC 柱的鉴定和洗脱条件,并测试其最佳性能,最终洗脱液选择4ml 50% 的甲醇,在重复使用5 次后,其柱容量仍能达到开始柱容量的25% 左右,采用高效液相色谱荧光检测器(HPLC-FLD)对IAC 进行回收率测定,以0.05% 的甲酸水溶液- 甲醇体系作为流动相,梯度洗脱HPLC-FLD 方法的线性范围10～1000ng/ml,相关系数大于0.99,测定出IAC 柱对环丙沙星的回收率为74.38%～105.552%。     

孔雀石绿单克隆抗体的制备及鉴定

以合成的孔雀石绿- 牛血清白蛋白(MG-BSA)为免疫原免疫Balb/c 小鼠,利用杂交瘤细胞技术,建立1 株稳定分泌孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞5G6,其分泌的抗体亚类为IgG1,轻链为κ型。间接ELISA 测定腹水效价达1.28 × 105。间接竞争ELISA(ciELISA)显示其对孔雀石绿的50% 抑制浓度(IC50)为1.36ng/ml,除结晶紫(CV)外,与无色孔雀石绿(LMG)没有交叉反应。     

环丙沙星衍生物的制备及其抗体特异性研究

本文研究了环丙沙星(CPLX)羧基衍生物及其抗体的制备,并对该衍生物抗体的特异性进行了测定。将环丙沙星与3-溴丙酸反应,生成环丙沙星的羧基衍生物(CPLX-COOH),通过制备液相进行纯化,用红外光谱(IR)、电喷雾电离质谱(ESI-MS)与核磁共振法(NMR)进行鉴定;将环丙沙星衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)进行偶联,分别制备免疫抗原(CPLX-COOH-BSA)和包被抗原(CPLX-COOH-OVA),并用紫外光谱法进行鉴定。用免疫抗原免疫BALB/c小鼠,制备环丙沙星衍生物多克隆抗体。通过ELISA方阵滴定法,确定包被抗原的最佳包被浓度和抗体最佳稀释度,建立了CPLX-COOH间接竞争ELISA检测方法,其半抑制浓度IC50为228.56 ng/mL,最低检出限(LOD)为25.527 ng/mL,该抗体具有广谱特异性,可与多种氟喹诺酮类药物发生交叉反应,可进行氟喹诺酮类药物残留的多元检测。     

环丙沙星时间分辨荧光免疫分析方法的建立与应用

建立基于时间分辨荧光免疫分析技术的环丙沙星(CPF)间接竞争检测方法。将环丙沙星-卵清白蛋白(CPF-OVA)包被于固相微孔板,CPF标准品或样品中CPF与CPF包被原(CPF-OVA)共同竞争限量的CPF抗体,用铕标羊抗兔IgG示踪,建立环丙沙星时间分辨荧光免疫分析方法(CPF-TRFIA);考察包被质量浓度、抗体稀释液、反应时间等对方法灵敏度的影响。结果表明：在优化条件下,该方法的检测限为0.5μg/L,半抑制质量浓度(IC50)为4.32μg/L,线性范围(IC20～IC80)为1.14～28.85μg/L;该方法对蜂蜜中CPF平均回收率为80.66%～100.30%,对牛奶中CPF的平均回收率为76.30%～95.22%,两者的平均批内和批间变异系数分别为7.42%和10.92%。CPF-TRFIA间接竞争法测定环丙沙星具有灵敏度高、特异性好、性能稳定的优点,适于高通量筛查。     

利巴韦林单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

首先合成出利巴韦林半抗原,通过免疫动物得到抗利巴韦林单克隆抗体,制备利巴韦林残留酶联免疫检测试剂盒,用于检测鸡肉、猪肉中利巴韦林残留量。结果表明：该试剂盒对鸡肉、猪肉的检测限分别为4.88 μg/kg、4.42 μg/kg,半抑制浓度（IC50）为7.9 μg/L,回收率为80%～105%,试剂盒的标准曲线线性范围为0～81 μg/L,批内、批间的相对标准标准偏差（RSD）均＜10%。4 ℃下能够保存12个月,稳定性较好。     

环丙沙星人工抗原的合成及鉴定

通过化学方法制备了环丙沙星的免疫抗原和包被抗原;分别采用碳二亚胺(EDC)法和氯甲酸乙丁酯法把环丙沙星与BSA进行了偶联制备了人工免疫抗原CIP-BSA,EDC法制备了包被抗原CIP-OVA,经PAGE、紫外分光光度法测定了人工合成抗原的偶联比,EDC法和氟甲酸乙丁酯法制得的CIP-BSA两分子结合比率分别为4:1和11:1,CIP-OVA中两分子结合比率为12:1.这为环丙沙星单克隆抗体的制备奠定了基础.     

阿维菌素特异性半抗原合成及多克隆抗体的制备

合成具有阿维菌素特征结构的半抗原,采用活化酯法与载体蛋白BSA偶联制备人工抗原.通过免疫新西兰大白兔成功制备阿维菌素多克隆抗体,抗体效价达1∶20 000,用此抗体建立的阿维菌素间接竞争酶联免疫标准曲线IC50为1.92 ng/mL,IC15为0.13 ng/mL.     

三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定

目的制备高度特异的三聚氰胺单克隆抗体,经酶联免疫吸附试验鉴定并制备胶体金试剂盒。方法以牛血清白蛋白交联的三聚氰胺为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗三聚氰胺单克隆抗体,经纯化制备腹水,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对抗体进行效价测定、亚类测定、交叉鉴定和蛋白质免疫印迹试验(westernblot)特异性鉴定后制备胶体金试剂盒。结果筛选出1株抗三聚氰胺单抗,制备的三聚氰胺胶体金试剂盒敏感值能达到30μg/L。结论获得了高度特异的且能稳定分泌三聚氰胺抗体的细胞株。     

异丙威单克隆抗体的制备及鉴定

异丙威是我国农业生产中常见的杀虫剂,在果蔬、粮食和烟草等中都有广泛应用,然而这类农药也具有较强生物毒性。为了制备异丙威单克隆抗体,以实现对农药异丙威药物的快速检测。本文以2-异丙基苯酚等为原料,合成异丙威半抗原及人工抗原,并通过免疫小鼠、细胞融合、克隆、筛选获得单克隆抗体细胞株,经腹水诱导法及辛酸-硫酸铵沉淀法制得异丙威单克隆抗体,通过间接竞争ELISA法对抗体的特异性进行鉴定。结果表明,制备的异丙威单克隆抗体检测范围为1.88~82.80 ng/m L,抗体的IC50为11.70ng/m L,最低检测限为0.54 ng/m L,抗体与克百威、西维因、涕灭威、灭多威、2-异丙基苯酚5种异丙威结构类似物均无明显交叉反应,具有高特异性,能够满足农产品中异丙威残留检测的要求。异丙威单克隆抗体的制备为异丙威快速检测产品的开发奠定了基础。     

抗大田软海绵酸单抗独特型抗体的制备及鉴定

目的:研制大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单抗的独特型抗体并鉴定其模拟抗原特性,为建立无毒检测提供借鉴.方法:利用小鼠腹水法大量制备抗OA单抗,经辛酸饱和硫酸铵法纯化后用胃蛋白酶酶切制备F(ab')<,2>片段,免疫日本大耳白兔,取其血清,琼脂扩散法检测血清抗体与抗OA单抗反应活性,ELISA方法鉴定血清...     

抗牛免疫球蛋白G单克隆抗体的制备及鉴定

采用杂交瘤技术从90株融合株中筛选得到分泌抗牛免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）单克隆抗体的2F6、5E3、9C6、9H8四个细胞株。其抗体亚型均为IgG1型,腹水单克隆抗体的效价可达5.12×106;5E3、9H8识别牛IgG重链Fc片段,2F6识别牛IgG轻链Fab片段,9C6识别牛IgG重链Fab片段;9C6与牛IgG1和牛IgG2反应,与山羊IgG、绵羊IgG、兔IgG、牛IgM、牛乳酪蛋白、牛乳β-乳球蛋白、牛乳铁蛋白、牛血清白蛋白、鸡卵清白蛋白、鱼明胶的交叉反应率均小于1%;9C6亲合力常数达牛乳8.92×108?L/mol。     

磺胺嘧啶单克隆抗体的制备与鉴定

采用重氮法同时制备结合比分别为9.0、8.0、3.7 的3 种磺胺嘧啶免疫抗原,并将其免疫BALB/c 小鼠,其中结合比为8.0 的一组免疫效果最佳。获得一株稳定分泌抗磺胺嘧啶单克隆抗体的杂交瘤细胞(1F6),体内诱生法制备腹水。间接ELISA 测定腹水效价为1:1.28 × 106,建立间接竞争ELISA 标准曲线,其检测下限为10.4ng/mL,线性范围为14.8～421.5ng/mL,IC50 值为79.1ng/mL,与磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶交叉反应率分别为 0.3%、0.99%、4.5%,与磺胺甲噁唑、磺胺喹恶啉、对氨基苯甲酸、磺胺、对氨基苯磺酸未见有交叉反应。经鉴定,单克隆抗体免疫球蛋白为鼠IgG 的2b 亚类。     

抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用

为实现呋喃唑酮（furazolidone,FZD）的快速定量检测,本研究制备了抗FZD全抗原的单克隆抗体,建立了抗FZD的单克隆抗体酶联免疫检测方法。结果表明,FZD单克隆抗体在质量浓度为10～500 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为0.06 μg/mL,最低检测限为6.92 ng/mL,对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物均不存在交叉反应。该方法重现性较好,平均误差为6.54%,回收率为76.84%～88.31%。     

抗莱克多巴胺单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性鉴定

莱克多巴胺(RAC)经化学修饰引入功能基团羧基,合成半抗原RAC- 戊二酸酐半醛化合物(RAC-SA),用混合酸酐法(MA)将RAC-SA 偶联于牛血清白蛋白(BSA),合成人工抗原BSA-RAC,用红外(IR)、紫外(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对其进行鉴定;用BSA-RAC免疫Balb/C 小鼠,细胞融合技术建立抗RAC的单克隆抗体(RAC mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备RAC mAb,并鉴定其免疫学特性。结果表明,BSA-RAC 偶联成功,偶联率为24.5:1;筛选出3F10、3H12、4D8 共3 株杂交瘤细胞,其中最好的4D8 株间接ELISA 效价细胞培养上清为1:1.28 × 103,腹水为1:6.4 × 105,同种型为IgG1/κ,亲和常数(Ka)为1.65 × 1010L/mol,对RAC 的半数抑制浓度(IC50)为5.7ng/ml,与多巴酚丁胺的交叉反应率(CR)为22.3%,与其他化合物无CR。