磷酸甘露糖异构酶基因快速初筛方法的建立

建立磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因环介导等温扩增快速检测方法。设计了两对内引物和两对外引物,优化后的反应条件为:FIP,BIP浓度为0.8μmol/L,F3,B3浓度为0.2μmol/L,镁离子浓度为2.0 mmol/L,甜菜碱浓度为1.6 mmol/L,反应时间为40 min,反应温度为62.0℃。SYBR Green法检测需2 h,电泳法检测共需2.5 h。与实时荧光和普通PCR比较特异性良好,转基因成分检测限达到0.01%。结果表明该检测方法简单且快速。     

新型荧光探针的合成与苦杏仁中氰化物含量的检测

基于氰根离子化学传感器中配位作用型氰根离子传感器的设计机制,以联吡啶钌配合物为信号基团,2-羟基苯基咪唑为铜离子识别基团,设计合成了一种新型联吡啶钌配合物(RuL)。该配合物在HEPES缓冲溶液(20mmol/L,pH7.2)中键合Cu~(2+)后荧光淬灭。以RuL–Cu~(2+)复合物为探针分子,利用氰根离子可与铜离子形成稳定配合物的特点,夺取铜离子后会使联吡啶钌(Ⅱ)配合物溶液的发光增强,从而获得荧光增强型氰根离子荧光传感器。研究发现,该RuL–Cu~(2+)复合物探针分子可以在近纯水溶液中对氰离子进行特异性荧光识别。其检测限为0.18μmol/L,远低于世界卫生组织规定的饮用水中氰化物的最大含量(1.9μmol/L)。而且将该方法应用到苦杏仁样品中氢氰酸含量的检测准确度与国标法基本一致。     

基于2,7-二（4-吡啶基）吖啶的荧光探针灵敏检测烟草农药残留抑芽丹

为实现烟草农药残留抑芽丹的快速定量检测，利用实验室自行设计合成的有机小分子荧光探针2,7-二（4-吡啶基）吖啶与抑芽丹分子间存在荧光作用机制，建立了烟草中抑芽丹的快速检测方法。结果表明：(1)抑芽丹在0.5～100.0μmol/L范围内线性关系良好，检出限为0.1μmol/L(0.11 mg/kg)。(2)该方法荧光响应时间为1 min，测定快速。(3)10倍浓度的其他农药对待测液的荧光强度影响不大，方法选择性好；将其用于烟草中农药残留抑芽丹检测，加标回收率介于91.0%～106.7%之间，相对标准偏差为1.4%～4.8%。该方法适用于烟草中农药残留抑芽丹的快速定量检测。     

基于荧光探针的白酒中邻苯二甲酸二丁酯(DBP)检测方法的研究

以荧光桃红作为荧光探针,设计合成了荧光桃红-十二烷基硫酸钠荧光探针体系(荧光桃红-SDS体系),构建一种塑化剂邻苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate,DBP)含量测定的荧光探针检测方法。荧光桃红荧光探针在该体系中结合邻苯二甲酸二丁酯(DBP)后发生荧光猝灭,且荧光强度的降低与DBP的浓度之间存在线性关系。结果表明,波长为468 nm,10μmol/L荧光桃红-2400μmol/L SDS体系,相互作用时间15 min,电压为800 V,搅拌时间为0 min,PBS缓冲溶液pH7,体系不人为加入乙醇,是荧光探针检测的最优条件。该方法对DBP测定的线性范围为3～30μmol/L,线性方程为:△F=4.845C+71.587,线性相关系数r=0.9983,检出限为0.214μmol/L,相对标准偏差为4.38%(n=6)。本方法成本低、灵敏度高、选择性好、操作简便,适用于白酒中塑化剂DBP的快速检测。     

氧化条件下没食子酸对猪肉肌原纤维蛋白结构及凝胶特性的影响

构建肌原纤维蛋白Fenton氧化体系(10μmol/L Fe Cl_3,100μmol/L V_C和1 mmol/L H_2O_2),以没食子酸(10、50、100、150μmol/g蛋白)作为抗氧化剂添加到氧化体系中,通过测定蛋白质表面疏水性、色氨酸荧光强度、凝胶强度、保水性、白度、流变特性及微观结构,研究在氧化条件下,没食子酸的抗氧化效果及其对蛋白质结构和凝胶特性的影响。结果表明,随着没食子酸浓度的增加,蛋白质的表面疏水性逐渐增加,凝胶强度和保水性呈下降趋势,凝胶白度略有上升,其微观结构受到破坏;色氨酸荧光强度随没食子酸浓度的增加而增加,但在150μmol/g时略有降低;且较高浓度下(50、100、150μmol/g),蛋白失去典型的流变特征。总的来说,低浓度没食子酸在起到抗氧化作用的同时,对肌原纤维蛋白结构及凝胶特性的影响较小,而较高浓度的没食子酸破坏了蛋白的凝胶结构。     

等温扩增方法检测耐高温α-淀粉酶基因

建立耐高温α-淀粉酶Amy797E基因环介导等温扩增快速检测方法。LAMP引物,优化反应条件,FIP,BIP浓度为0.8μmol/L,F3,B3浓度为0.2μmol/L,镁离子浓度为2 mmol/L,甜菜碱浓度为1.4 mmol/L,反应时间为40 min,反应温度为62℃,SYBR Green法检测需2 h,电泳法检测共需2.5 h。与实时荧光和普通PCR比较特异性良好,转基因成分检测限达到0.01%。     

棉针织物的铁配合物低温催化漂白

以4,4′-二甲基-2,2′-联吡啶(L)及其氮氧化物(LNO)为配体,分别与铁盐反应,合成铁配合物FeL及FeLNO;采用红外光谱仪、核磁共振波谱仪和元素分析仪,对所合成的两个铁配合物结构进行分析,并将两个配合物应用于双氧水低温浸渍漂白棉针织物中。探讨了稳定剂浓度、双氧水浓度、pH值、温度、配合物浓度和漂白时间对漂白效果的影响。配合物FeLNO的优化漂白工艺为:稳定剂PBTCA 1 g/L,pH值为10.5,温度为65℃,时间为105 min,30%H2O2质量浓度为10 g/L,配合物浓度为12.5μmol/L,精练剂ZJ-CH60 1 g/L,浴比为1∶20。配合物FeL漂白优化工艺条件为:稳定剂PBTCA 1.5 g/L,pH值为11,温度为80℃,时间为90 min,30%H2O2质量浓度为10 g/L,配合物浓度为17.5μmol/L,精练剂ZJ-CH60 1 g/L,浴比为1∶20。从漂白效果来看,配合物FeLNO要优于配合物FeL。配合物FeLNO工艺漂白的织物白度达到73.5%,同样条件下未加入配合物漂白的织物白度仅为61.47%,说明配合物具有较好的低温催化漂白作用。     

基于DNA保护的银纳米簇荧光探针检测啶虫脒

目的设计合成DNA-AgNCs荧光探针用于检测啶虫脒。方法以啶虫脒的适配体DNA为保护剂,硼氢化钠为还原剂还原AgN03,合成发射波长为421nm的DNA-AgNCs。啶虫脒溶液与该纳米簇混合时,荧光强度降低,根据该现象检测啶虫脒。结果在37℃的条件下,啶虫脒于DNA-AgNCs体系中(在pH=7.0的磷酸缓冲溶液中)反应60 min后荧光猝灭,啶虫脒的浓度在5～200μmol/L范围内呈现出良好的线性关系,检出限为2.8μmol/L(S/N=3)。结论该检测方法较简单,易操作,快速、准确、灵敏,适用于测定啶虫脒。     

白酒中邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯荧光探针测定方法的构建

目的 构建一种塑化剂邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)含量测定的荧光探针检测方法。方法 基于芘分子满足激基缔合物的要求,本文选择以芘为荧光探针,设计合成了芘-聚氧乙烯蓖麻油体系(芘-EL体系)。结果 芘荧光探针在该体系中结合DEHP后収生荧光猝灭,且荧光强度的降低与DEHP的浓度之间存在线性兲系。荧光探针检测的最优条件为波长为374 nm, 400μmol/L芘-EL体系,相互作用时间30min。该方法对DEHP测定的线性范围为5～30μmol/L,线性方程为△F=-23.153+24.179C,线性相兲系数r=0.9929,检出限为0.063μmol/L,相对标准偏差为4.43%(n=6)。结论 本方法具有可视化、成本低、高灵敏度、高选择性、操作简便等优点,适用于白酒中DEHP的测定。     

新型脂肪胺荧光标记试剂的合成及小分子 脂肪胺的衍生检测

目的合成一种新的以荧光素为荧光团,N-羟基琥珀酰亚胺活性酯为反应基团的脂肪胺荧光标记试剂,并建立以新试剂标记短链脂肪胺并用高效液相色谱-荧光检测法进行分离的方法。方法在p H 8.5的Na2B4O7-H3BO3缓冲溶液中,25℃下,衍生试剂浓度为50μmol/L,衍生反应进行10 min,衍生物峰面积即可达到最大且稳定。结果在优化的条件下,建立的检测方法的线性范围为0.01~2μmol/L,线性回归系数0.999,检测限达到0.1~1μg/L。结论衍生后的产物利用高效液相色谱-荧光检测法,可以使得6种小分子脂肪胺得到有效分离,方法具有衍生速度快,灵敏度高等优点。     

同步荧光法分析红葡萄酒中微量白藜芦醇含量的研究

建立了一种应用同步荧光检测红葡萄酒中白藜芦醇的新方法,系统研究了检测条件对白藜芦醇荧光强度的影响。该方法的回归方程为Int(荧光强度)=19.70×Conc(浓度μg/mL)+13.98,相关系数r2=0.9987。白藜芦醇产生的荧光强度与浓度在0mol/L～1.96×10-5mol/L的范围内具有良好的线性关系,检测限为8.14×10-10mol/L。     

食源性致病菌通用型多重荧光PCR快速检测体系的建立

以两种食源性致病菌(沙门氏菌、单增李斯特菌)为模板,对通用型多重荧光PCR快速检测体系进行了研究。建立的通用型多重荧光PCR反应体系为:25μL反应液中,Tris-HCl为50mmol/L、pH值为8.8、KCl15mmol/L、(NH4)2SO4为8mmol/L、Mg2+为3mmol/L、dNTP为1.0mmol/L、引物和探针的终浓度分别为1μmol/L和0.5μmol/L、加入0.5μLDMSO,2.5U/份的Taq酶与等量的Taq酶抗体。     

同步荧光法测定红葡萄酒中白藜芦醇含量

建立了一种应用同步荧光检测红葡萄酒中白藜芦醇的新方法,系统研究了检测条件对白藜芦醇荧光强度的影响。该方法的回归方程为Int(荧光强度)=19.70×Conc(浓度μg/mL)+13.98,相关系数r=0.9987。白藜芦醇产生的荧光强度与浓度在0～1.96×10-5mol/L的范围内具有良好的线性关系,检测限为8.14×10-10mol/L。     

基于微流控芯片的茶多酚电化学检测方法研究

为解决茶多酚传统检测方法中存在操作复杂、自动化程度低、试剂消耗量大等问题,提出一种基于微流控芯片的茶多酚电化学检测方法。以3D打印微流控芯片为检测通道,丝网印刷碳电极为电化学传感器,建立了微流控检测平台,以没食子酸为检测标准品,采用循环伏安法,研究了缓冲液种类、缓冲液pH、扫描速度、进料流量4个因素对氧化峰电流的影响,并运用该方法对普洱茶样品中的茶多酚进行了测定。结果表明:在最优实验条件下,该方法在没食子酸浓度为5～1 250μmol/L范围内具有线性响应,检出限为6.9×10~(-7)mol/L,样品回收率在97.6%～104.6%,本检测结果与标准福林酚法的结果一致,检测时间为40 s,试剂用量70μL。该方法具有试剂样品用量少、测试时间短等特点,可用于茶多酚含量的快速检测。     

棉织物的金属配合物低温催化漂白

采用CoS3和CuS3配合物作催化剂,应用于棉织物双氧水低温浸渍漂白,研究了配合物浓度、双氧水浓度、pH值、温度和时间对漂白效果的影响。通过单因素试验,得到的优化工艺为:30%H2O210g/L,CoS3 2μmol/L(CuS3 10μmol/L),Na2SiO31g/L,JFC 1g/L,70℃处理60min,浴比1∶20。     

色氨酸荧光猝灭法测定海带中碘离子

研究碘离子对色氨酸的荧光猝灭效应,旨在建立色氨酸荧光猝灭法测定海带中碘离子。在p H=6.0的磷酸缓冲液中,加入不同浓度的碘离子,测定色氨酸溶液的荧光光谱及强度的变化。试验表明,色氨酸具有释放荧光的特性,最佳激发和发射波长分别为223 nm和352 nm。碘离子对色氨酸的荧光具有猝灭作用。色氨酸浓度为10μmol/L时,碘离子对色氨酸的荧光猝灭呈线性关系,根据猝灭程度可计算出碘离子的浓度,该方法的检测限为1.64μmol/L。根据该方法检测了两种海带样品中的碘离子,其浓度为637μg/g干重(Laminaria japonica Aresch)和621μg/g干重(Saccharina japonica)。     

双核希夫碱金属锰仿酶配合物的合成及其应用

以水杨醛、浓硫酸、碳酸钠与1,3-二氨基-2-丙醇为原料,采用2步法合成工艺制得双水杨醛磺酸钠缩二氨基-2-丙醇配体,再将配体与金属盐乙酸锰进行配位得到双核希夫碱金属锰配合物,红外光谱和能量色散X-射线能谱表征了配合物。将配合物应用于棉织物的低温漂白,探讨了配合物浓度、p H和乙酰胺用量对漂白效果的影响。结果表明,在配合物浓度为8μmol/L、p H为10.5~11.0、乙酰胺用量为8~9 g/L的条件下,处理后的棉织物白度达77.7%,毛细管效应达8.7 cm/30 min。     

双氧水低温漂白催化剂的合成及应用

以水杨醛与乙二胺为原料,采用两步法合成工艺,经缩聚反应得到双水杨醛缩乙二胺配体;再将配体与四水合二氯化锰进行配位,得到希夫碱金属锰配合物。将希夫碱金属锰配合物用于棉织物的低温漂白,探讨了反应温度、配合物浓度及pH值对漂白效果的影响。结果表明,在漂白温度为60℃、pH值为9.5、希夫碱金属锰配合物的浓度为40μmol/L的条件下,处理后的棉织物白度达81.5%,强力保留率为95.4%。     

鉴别绵羊肉中狐狸源性成分的环介导等温扩增检测方法的建立

目的建立一种能够快速区分出绵羊肉中掺入的狐狸源性成分的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。方法针对狐狸线粒体Cox I基因分别设计两条外引物和两条内引物,优化LAMP反应条件后并进行特异性和灵敏性试验,对绵羊肉中狐狸源性成分进行检测。结果在0.2μmol/L外引物(F3和B3)、1.6μmol/L内引物(FIP和BIP)、0.5 mol/L甜菜碱、0.4 mmol/L d NTP、4 mmol/L Mg SO_4等参数的优化条件下,可检测出掺假率为1.0%的羊肉制品,即最低检测浓度为2×10~(-4)ng/μl。结论本文所建立的LAMP法特异性强、灵敏度高,能有效地对绵羊肉中狐狸源性成分进行检测,可作为羊肉掺假的一种快速检测方法。     

聚L-天冬氨酸/多壁碳纳米管修饰电极法快速测定麦麸中的酚酸

研究了电聚合法结合吸附法制备聚L-天冬氨酸/多壁碳纳米管修饰电极及其对酚酸类物质的电化学催化作用及机理,建立了一种快速测定小麦麸皮中酚酸的新方法。在p H 3.0的磷酸氢二钠-柠檬酸溶液组成的电解质溶液中,该纳米修饰电极对没食子酸氧化有显著的电催化作用,没食子酸在电极上的氧化动力学过程为吸附控制过程;没食子酸在该纳米修饰电极上的氧化电流与其浓度在2×10-6~5.6×10-5mol/L范围具有良好的线性关系,最低检测限为7.6×10-7mol/L。利用该法测定了小麦麸皮中酚酸含量,其结果为(1 130.8±4.50)μg/g,与Folin-Ciocalteu比色法的测定结果(1 180.7±8.18)μg/g一致,且具有简便、快速、灵敏的优点,所需化学试剂较少。