烘烤期烟叶霉烂病的病原鉴定

摘 要:福建省政和县发现红花大金元烟草在烘烤变黄期发生霉烂。霉变先从叶柄开始发生,逐渐向主脉和叶片扩展,引起烟叶大面积霉烂。为了明确病因和发病条件,进行了病原菌分离培养、病原菌形态特征观察、生长温度试验、致病性测定及病害发生条件观察。研究结果表明病原菌为米根霉（Rhizopus oryzae）,烟叶变黄期烤房温度达36～40℃,相对湿度75%～85%的条件下有利病菌的生长和侵染。首次确认烘烤期烟叶霉烂是由病原菌引起的一种新的侵染性病害,该病害命名为烟叶霉烂病（tobacco leaf mildew rot）。      

烟草赤星病菌的Biolog代谢表型分析

为了解我国烟草赤星病的2种主要致病菌链格孢菌Alternaria alternata和长柄链格孢菌Alternaria longipes的碳氮源代谢表型。采用Biolog表型芯片技术分析了2株链格孢菌（中等致病力的CQ1和GZ11）及2株长柄链格孢菌（强致病力的HuN2和弱致病力的YN4）对PM1、PM2微孔板中190种碳源物质和PM3微孔板中95种氮源物质的代谢情况。结果发现,4株赤星病菌均能代谢PM1-PM3微孔板中24.21%的碳源和86.31%的氮源。不同致病力菌株间的碳氮源代谢能力表现出一定差异,长柄链格孢菌的强致病力菌株HuN2比弱致病力菌株YN4对D-甘露糖、D-木糖、D-甘露醇、b-环糊精、L-缬氨酸、D-天门冬酰胺、腺苷和i-赤藓糖醇等物质的代谢更显著;链格孢菌的中等致病力菌株CQ1比GZ11对L-鼠李糖、海带多糖和二羟基丙酮的代谢更好;弱致病力菌株YN4比强致病力菌株HuN2和中等致病力菌株CQ1、GZ11对水杨苷的代谢更明显。表明烟草赤星病菌的不同种群菌株对碳氮源的代谢情况总体趋势一致,但不同致病力菌株间存在一定差异。     

代谢通量分析优化米根霉R1021发酵生产L(+)-乳酸过程

建立了米根霉R1021的代谢网络,分析了米根霉R1021在分批发酵过程中不同阶段、不同氮源浓度、不同供氧量条件下的代谢通量分布,确定PYR是米根霉代谢网络上的关键节点,此节点的通量分配比影响着乳酸的最终产率.在米根霉发酵中,当NH4NO3质量浓度为2.0g/L,空气体积流量为2L/min时,流向乳酸的代谢流最大.通过对模型进行优化计算得到L(+) 乳酸的最大理论得率YP/S为98.2%.     

宜宾烟区烤烟野火病的致病力分化、生物学特性及抑菌药剂筛选

为了更有效地防治烟草野火病,对采自宜宾市烤烟种植区的具有典型野火病症状的烟叶样品进行了组织分离、培养和形态特征观察。采用针刺结合无针头注射接种法测定分离菌株的致病性,同时采用病菌生长速率法测定了不同致病力的菌株pv-xs-y-2(强)、pv-xt-y-2(中)和pv-gy-y-1(弱)的生物学特性及4种杀菌剂对强致病力菌株pv-xs-y-2的室内抑制效果。结果表明:14个菌株的形态特征均与烟草野火病病菌的形态特征一致,但各菌株间的致病力有明显的差异,平均病情指数为23.33~72.22。聚类分析结果显示,14个菌株在鉴别寄主(K326)上的致病力划分为强(病指为60~72.22)、中(病指为34.44~53.33)和弱(病指为23.33)3种类型,其中以中等致病力类型的菌株为主,占测试菌株的71.43%。在人工培养条件下,病菌的最适生长温度为28℃,pv-xs-y-2、pv-xt-y-2和pv-gy-y-1菌株的OD_(600)值分别为1.285、1.105和0.977;最适生长湿度为100%,pv-xs-y-2、pv-xt-y-2和pv-gy-y-1的OD_(600)值分别为0.694、0.555和0.505;最适pH值为7,说明野火病菌适宜在中性环境中生长。不同药剂对野火病室内毒力的测定结果依次为3%噻霉酮4%春雷霉素72%硫酸链霉素20%噻菌铜,3%噻霉酮的有效中浓度(EC_(50))为9.401μg·mL~(-1)。     

桃采后病原菌种类及侵染规律研究

本试验以大久保、京玉等北方地区桃主栽品种为试材，研究采后病原菌种类、侵染和发病规律。结果表明：引起桃采后贮藏过程中腐烂的病原菌有8种。不同菌种在不同温度条件下的回接试验表明8种病原真菌的致病性有较大差异，其中灰霉菌（Botrytis cinerea）致病力最强；芽枝霉（Cladosporium sp.）最弱；根霉和黑曲霉多在常温中致病，且病程一般很短：灰霉、交链孢霉在桃低温和高温中均致腐。     

高糖化力米根霉G1培养条件优化

该研究以糖化力和糖化酶酶活为评价指标,通过单因素和正交试验对米根霉（Rhizopus oryzae）G1一级种的培养条件进行优化。结果表明,米根霉一级种的最佳培养条件为在麸皮汁琼脂培养基的基础上添加蛋白胨3 g/L、葡萄糖30 g/L和CaCl2 2.5 g/L,培养温度为30 ℃。经过优化后的米根霉一级种糖化性能得到提升,制成麸曲后糖化力达到33.97 g/100 g,糖化酶酶活为5 536.64 U/g。     

高产L-乳酸米根霉的原生质体制备与再生条件研究

为建立原生质体融合法选育高产L-乳酸米根霉(Rhizopus oryzae)菌株,对米根霉菌株原生质体制备及再生条件进行研究。考察酶种类、酶质量浓度、时间、温度、pH值、渗透压、预处理等因素对原生质体制得量及再生率的影响,获得原生质体制备及其再生的优良条件：不添加甘氨酸,渗透压稳定剂为0.6mol/L的NaCl缓冲液,按1.5mg/mL组合酶质量浓度,蜗牛酶、纤维素酶和溶壁酶质量浓度配比为1:1:1进行混合,35℃、pH6、酶解2h,可获得原生质体制得量最大为2.74×106个/mL,再生率最高为6.8%。     

Rhizopus oryzae产酸性蛋白酶条件及其酶学性质研究

本文以少孢根霉(Rhizopus oligosporus)为对照研究了豆豉中的一个分离菌株米根霉(Rhizopus oryzae)产生酸性蛋白酶的条件及所产蛋白酶的性质,结果表明这个菌株的产酶条件和蛋白酶的性质与少孢根霉相比有相似性但也存在一些差异:米根霉在水分含量57%~59%、pH2.5~3.0的酸性介质中、28~31℃下培养36h时产酸性蛋白酶能力最强,所分泌的蛋白酶系在pH4.0和pH6.0附近有最强的催化活性,在pH3.0~6.0的范围内有较好的稳定性,催化反应的最适作用温度为50℃,它的温度稳定性很差,在50℃保温30min已完全失活;少孢根霉在水分含量52%~55%、pH2.5~3.0的酸性介质中、31℃下培养48h时产酸性蛋白酶能力最强,在35℃条件下培养36h也能产生较高的酶活力,少孢根霉分泌的蛋白酶系在pH3.0和pH6.0附近有最强的催化活性,在pH4.0～6.0范围内很稳定,催化反应的最适作用温度可达55～60℃,但它的温度稳定性较差,在50℃保温30min,酶活力损失达到90%,保温120min酶几乎完全失活。     

安徽烟草赤星病菌生物学特性及致病力分化研究

研究了安徽地区烟草赤星病菌的生物学特性和致病力分化,结果表明,该菌在10～35℃条件下均能生长,最适生长温度为25～30℃,温度低于7℃或高于40℃菌丝不能生长;分生孢子致死温度是53℃5 min和50℃10 min,幼菌丝致死温度是52℃5min和49℃10 min.病菌在pH 4.0～11.0的范围内均能牛长,呈现双峰曲线,即在pH 6.0～pH 8.0生长较快,尤以pH 6.0和pH 8.0的条件下菌丝生长更快;分生孢子在pH 4.0～11.0之间均可以萌发;在pH 6.0时,产孢量最高.在光照和黑暗交替的条件下,有利于菌丝的生长和孢子产生.致病力测定结果表明,不同菌株之间致病力存在显著差异,根据接种K326烟草后所致病情指数的大小可供试菌株致病力划分为致病力强、中等、弱和不致病4种类型,说明安徽烟草赤星病菌存在明显的致病力分化;在不同烟区间和同一烟区内均存在不同致病力类型的菌株,致病力类型的分布与菌株地区来源有一定的相关.     

烘烤期烟叶霉烂病病原菌的分离、鉴定及生物学特性

为明确云南省烘烤期烟叶霉烂病的病原,采用分子和形态学鉴定方法,依据柯赫氏法则,对病原菌进行分离和鉴定并将其命名为Rhi-1,并初步研究了该病原菌的生物学特性。结果表明,引起该病害的病原菌为米根霉（Rhizopus oryzae）。菌株Rhi-1的气生菌丝旺盛,质地疏松,孢子囊和孢囊孢子直径分别为53~123 μm和2.1~9.0 μm,两者均呈球形或椭圆形。孢囊孢子萌发的最高温度为44.6℃,水相介质中孢囊孢子热处理10 min的致死温度为54℃,菌丝体热处理30 min的致死温度为70℃,最适pH为7.0,最佳培养基为PSA。此结果为研究霉烂病发生机制提供了依据。     

低压离子交换色谱法测定水体中的磷酸盐和砷酸盐

选用低压阴离子交换色谱柱(LPAECcolumn),以1.4 mmol·L-1 Na2CO3和0.2 mmol·L-1 NaHCO3的混合溶液为洗脱液,将低压离子色谱与锑钼蓝离子缔合物分光光度法联用,建立了水体中磷酸盐、砷酸盐同时测定的新方法.在最优的实验条件下,磷酸盐(以P计)和砷酸盐(以As计)分别在5～200 μg·L-1和5 ～ 150 μg·L-1呈良好线性,检出限分别为1.54 μg·L-1和3.26 μg·L-1,相对标准偏差分别为2.14％和3.32％.采用此法对环境水样进行了分析,加标回收率分别为97.89％～ 102.5％和100.52％ ～ 106.79％.     

CV-AAS法快速测定皮革中痕量镉

研究了测定皮革中痕量镉冷原子化的反应体系,对载气流速、NaBH4浓度、增敏剂加入量和介质酸度的影响,以及基体和共存离子的干扰进行了研究。在试验选定的最佳条件下,用于皮革中痕量镉的测定,回收率为96.2%～103.8%,方法检测限为0.015μg·L-1,相对标准偏差小于3.5%。     

果香风味导向的库德毕赤酵母FJZ的分离鉴定及生物学特性研究

通过嗅闻试验从清香型白酒新鲜酒醅中筛选到一株产生浓郁苹果清香风味的菌株,通过HS-SPME-GC-MS分析发现该菌株在小米固体培养基中能产生大量的乙酸乙酯,占风味物质的37.71%。通过菌落菌体观察、生理生化及分子生物学试验,确定该菌株属于毕赤酵母属的库德毕赤酵母,命名为库德毕赤酵母FJZ。对菌株FJZ的生物学特性研究表明,该菌株对环境具有一定的耐受性,可在pH 1.5~10.5、乙醇体积分数0%~14%、葡萄糖质量分数10%~60%、温度28~42℃条件下生长,最适生长的葡萄糖质量分数为20%、乙醇体积分数为6%。     

表面活性剂十二烷基硫酸钠协助超声波提取甘薯叶总黄酮

目的 探究表面活性剂十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)协助超声波提取甘薯叶总黄酮的最佳工艺条件。方法 以甘薯叶总黄酮提取量为考察指标, 采用Box-Behnken法进行试验设计, 对SDS质量浓度、乙醇体积分数、料液比、超声时间进行响应面优化。结果 各因素对甘薯叶总黄酮提取量的影响程度为C(料液比)>A (SDS质量浓度)>B(乙醇体积分数)>D(超声时间), 甘薯叶总黄酮最佳提取工艺参数为SDS质量浓度1.0%、乙醇体积分数81%、料液比1:50 (g:mL)、超声时间49 min, 在此条件下, 总黄酮提取量为 132.08 mg/g, 与回归模型预测值134.63 mg/g相差1.89%, 表明该模型与实际情况拟合良好。结论 利用表面活性剂十二烷基硫酸钠协同超声提取甘薯叶总黄酮的工艺方法稳定可行, 可为甘薯叶总黄酮的进一步开发利用提供参考依据。     

氟离子选择电极法测定皮革及皮革制品中氟化物含量

探讨了采用氟离子选择电极法测定皮革及其制品中氟化物含量过程中不同总离子强度调节缓冲液(TISAB)及不同的TISAB中柠檬酸钠浓度和pH值对消除Fe3+和Al3+干扰的能力。结果表明:柠檬酸钠作为TISAB中的络合剂对消除皮革及其制品样液中Fe3+和Al3+的干扰消除能力最强。且当TISAB中柠檬酸钠浓度达68g·L-1时,对其样液中低于25mg·L-1的Al3+干扰消除最好;实际样液测定时TISAB消除Al3+干扰的最合适的pH为5.0。选取优化的TISABⅢ作为氟离子选择电极法所用的总离子强度调节缓冲液,进行皮革及其制品中氟化物含量测定,是一种简便、快捷、定量准确方法。     

微波消解-伏安极谱法测定皮革中铜含量的研究

运用快速安全的微波消解法处理皮革样品,然后采用阳极溶出伏安极谱法对皮革样品中的铜含量进行了测定。在草酸铵-氯化锥盐酸缓冲溶液（pH为1．65）中加入样品溶液,富集时间为60s,氮气脱氧时间为300s,测定的线性范围为：2～100μg/L,检测限为0．1μg/L,测得皮革铜中含量为4．086mg／kg,相对标准偏差（n=8）为8．30％,回收率在94．3％～111．9％,说明伏安极谱法测定铜含量的方法操作简便、准确可行。     

柱前在线衍生-高效液相色谱法测定保健食品纳豆胶囊中的牛磺酸

建立了检测保健食品中牛磺酸的柱前在线衍生-高效液相色谱方法。样品经过去离子水提取,与邻苯二甲醛在线衍生,以A相：0.02 mmol/L的乙酸钠（pH 7.2,0.018%三乙胺,0.3%的四氢呋喃）;B相：100 mmol/L的乙酸钠（pH 7.2）20%,乙腈40%,甲醇40%为流动相,梯度洗脱,采用Thermo HypersilODSC18色谱柱（4.6mm×150mm,5μm）分离,紫外线检测。方法检出限为0.51 mg/L;标准曲线的线性范围为0-1000.0mg/L,相关系数R2=0.9992,具有良好的线性关系,加标回收率为103.9%-105.0%,相对标准偏差为0.9%-2.9%。该方法的灵敏度高、准确性好、前处理操作简单,适用于保健食品纳豆胶囊中牛磺酸含量的检测。     

HPLC–ICP-MS speciation of selenium in enriched onion leaves – a potential dietary source of Se-methylselenocysteine

In this work chromatographic separation was coupled with mass spectrometry detection to study the speciation of selenium in selenium enriched onion leaves. The plants of onion (Allium cepa L.) were grown hydroponically for one week in standard medium containing inorganic selenium. The leaves and bulbs were separated from roots, the two types of material (leaves and bulbs) were dried and homogenized. The sodium hydroxide (0.1 mol l⁻¹) extracts were analyzed by size exclusion chromatography (with spectrophotometric and mass spectrometric detection) showing the incorporation of selenium to the high molecular weight fraction, which was more pronounced in the leaves relative to the bulbs. This incorporation was better with Se(IV) enrichment (33% in leaves and 26% in bulbs) than with Se(VI) (3% and 5%, respectively). After extraction of the low molecular weight compounds (chloroform–methanol–water or 0.4 M perchloric acid–ethanol) and elimination of inorganic selenium (Dowex 1X8), selenium speciation was carried out by ion-pairing high performance chromatography [5 mmol l⁻¹ citric acid, 5 mmol l⁻¹ hexanesulfonic acid, pH 4.5: methanol (95:5)]. The primary organic selenium species found in leaves extracts was Se-methylselenocysteine, which has been reported as one of the most active chemopreventive selenium species as found in cell and animal experiments. The percentage contribution of selenium in this species was 4.0% and 1.9%, respectively, of the total selenium in leaves enriched with Se(IV) and Se(VI). It may be possible to use selenium enriched leaves as a dietary source of Se-methylselenocysteine. The important advantage of this source is the simple and fast enrichment process.     

偶氮类显色剂的合成及其在口蘑微量铜测定中的应用

本文合成了偶氮类试剂3,5-二甲酸-4'-羟基偶氮苯,并研究了其与铜(Ⅱ)的显色反应。应用分光光度计测定了3,5-二甲酸-4'-羟基偶氮苯的用量、四硼酸钠缓冲溶液用量对生成配合物的影响,建立了一种测定口蘑中微量铜的新方法。结果表明:铜(Ⅱ)的质量浓度在0~2.5 μg·mL-1内遵从比尔定律,其回归方程为Y=0.1696x+0.0237,R2=0.9921,摩尔吸光系数为4.3×104 L·mol-1·cm-1,铜(Ⅱ)与3,5-二甲酸-4'-羟基偶氮苯形成1:1的配合物。加标回收率为97.0%~101.3%,RSD为0.93%~1.50%。本实验采用新的紫外分光光度法检测铜离子,操作简单、选择性好,用于口蘑中铜的测定,结果为(5.95±0.49)mg/100 g,与ICP光谱仪测得量为(5.89±0.09)mg·100 g-1几乎一致。     

皮革中多菌灵等三种防霉剂的检测方法研究

应用固相萃取及高效液相色谱技术,建立了同时测定皮革中多菌灵、百菌清和甲基托布津含量的方法。皮革样品经乙腈超声提取后,由弗罗里硅土固相萃取小柱净化,以Agilent Eclipse Plus C18(4.6×250 mm,5μm)色谱柱为分析柱,乙酸铵水溶液一甲醇为流动相,线性梯度淋洗,紫外二极管矩阵检测器检测,波长为240或270nm。结果表明,多菌灵、百菌清和甲基托布津在0.5~15.0 mg·L-1范围内有良好的线性关系,方法的定量下限(S/N=10)分别为0.06、0.8、0.5 mg·kg-1,加标回收率为90.2%~97.7%,变异系数(CV)不大于7.9%。