甘薯过氧化物酶的特性和抑制作用研究

研究甘薯过氧化物酶最适温度、最适pH值、Km及Vmax,同时探讨了不同激活剂和抑制剂对甘薯过氧化物酶的作用.结果表明:甘薯过氧化物酶最适温度为60℃,最适PH值为6.5,Km=0.00315293mol/L,Vmax=857372U/(min·g).抑制作用强弱依次为VC ＞L-cys＞NaHSO3＞柠檬酸＞EDTA,说明各抑制剂均具有一定的抑制作用.     

紫甘薯花青素体外抑制α-糖苷酶活性研究

为了研究紫甘薯花青素体外对α-糖苷酶活性的影响,采用HPLC和LC-MSn对紫A19(ZA1)和京薯(JS6)中花青素的含量和组分进行对比分析。结果表明：两种紫甘薯花青素含量分别为52.44mg/g和39.46mg/g,其组分基本一致,不同的是ZA1另含牵牛花色素类色素,而JS6另含天竺葵色素类色素;这两种紫甘薯花青素对α-糖苷酶活性都有抑制效果,但ZA1的抑制效果最佳,当加入质量浓度为0.1mg/mL 600μL(即抑制剂ZA1占总反应体积的18%)、抑制时间15min、抑制温度40℃时对α-糖苷酶活性抑制率可达50%以上,用Lineweaver-Burk双倒数作图考察其抑制类型,根据曲线可判定为竞争性抑制,抑制常数Ki=5.43×10-2mmol/L,vmax=1.71μmol/(L ·min)。     

露湿漆斑菌胆红素氧化酶的分离纯化及其性质

露湿漆斑菌产生的胆红素氧化酶粗酶液通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow 和Sephadex G-100 纯化,得到纯化152.54 倍胆红素氧化酶,得率19.14%;用PAGE 检测为单一条带,活性电泳证实该单一蛋白质组分为胆红素氧化酶, SDS-PAGE 证明该酶的相对分子质量为64 000.该酶最适反应温度为55 ℃,以胆红素为底物时最适pH值为7.5,而以ABTS为底物时最适pH值为4,该酶在pH 3～8之间都能够检测到酶活.以胆红素为底物,胆红素氧化酶的Km值和Vmax分别为552.06 μmol/L和38.91 μmol/(L·min);而以ABTSA为底物,胆红素氧化酶的Km值和Vmax分别为631.84 μmol/L和12.79 μmol/(L·min).     

丝瓜过氧化物酶的特性和抑制作用研究

研究丝瓜过氧化物酶最适温度、最适pH值、Km、Vmax及最适底物,同时通过正交试验探讨不同抑制剂组合对丝瓜过氧化物酶的抑制作用.结果表明,丝瓜过氧化物酶最适温度为45℃,最适pH值为5.0,以邻苯三酚为最适底物,Km=0.001516 mol/L,Vmax.=440.7U/(min·g).正交试验结果表明,最佳抑制剂组合为6mmol/L柠檬酸+6mmol/L EDTA+6mmol/L半胱氨酸+6mmol/L VC.在此条件下抑制率为58.89％.     

雪莲果过氧化物酶的特性和抑制研究

以新鲜雪莲果为材料,对雪莲果过氧化物酶(POD)的特性进行了研究,并探讨了不同抑制剂及激活剂对酶活性的影响。结果表明:雪莲果过氧化物酶最适反应pH值为6.0,最适反应温度为35℃,最佳反应底物(愈创木酚)浓度为0.008mmol/L,最大反应速度Vmax=135U/(min.g),米氏常数Km=0.004182mol/L。在0~200mmol/L范围内,抑制剂对POD的抑制作用为NaHSO3>L-cys>柠檬酸>VC>EDTA。在0~10mmol/L范围内,激活剂对POD激活作用为CuSO4>FeCl3。     

热稳定酸性β - 葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶学性质

耐酸性黑曲霉菌株Aspergillus niger L.的菌丝体破碎液依次经过乙醇沉淀、离子交换层析和凝胶过滤等步骤处理,获得电泳纯的β-葡萄糖苷酶,SDS-PAGE显示其分子质量为125.7kD。β-葡萄糖苷酶水解对硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷的最适pH值为3.0～4.0,最适温度为70℃,表观米氏常数(Km)值为2.35mmol/L,表观kcat/Km值为2.99×104L/(mol ·s);水解京尼平苷、水杨苷的表观kcat/Km值分别是1.26×104、1.37×104L/(mol ·s);水解活性受Mn2+的显著激活和Fe2+、Zn2+、Cu2+等离子的微弱抑制。该酶活性在pH2.0～8.3保持稳定;酶在65℃时保温60min,残余酶活达到了85%,是一种热稳定酸性β-葡萄糖苷酶。     

龙眼果肉中多酚氧化酶和过氧化物酶性质研究

测定了10个不同品种龙眼果肉中的多酚氧化酶活性.结果表明:华路广眼的多酚氧化酶活力最强,为25440U/(g·min),而罗伞木最弱,为9120U/(g·min).以石硖为试材,对其多酚氧化酶的性质进行研究时发现:龙眼多酚氧化酶酶促褐变反应动力学符合米氏方程所描述的单底物酶促反应动力学,相应的动力学参数Km=0.64mol/L,Vmax=0.12U/min;且底物过量时,多酚氧化酶活性随其加入量的增大而迅速增大,但底物逐渐饱和时其活性增加减缓直至饱和值.在灭酶条件研究中发现:多酚氧化酶粗酶液在100℃水浴中处理1min即完全失活;而果浆中的多酚氧化酶在100℃水浴中处理5min才能完全失活.实验还测得石硖中过氧化物酶活力为4440 U/(g·min),且其果浆中过氧化物酶在100℃水浴中处理7min完全失活.     

酵母蔗糖酶酶学性质的研究

本实验对啤酒酵母中蔗糖酶的酶学性质进行了初步的研究.结果表明:啤酒酵母蔗糖酶的最适pH为5.0,最适温度为35℃,Km和Vmax分别为0.057mol/L和4.79 mg/(mL.min).     

不同乳酸菌产谷氨酸脱羧酶特性研究

通过对发酵乳杆菌、植物乳杆菌、短乳杆菌所产谷氨酸脱羧酶(GAD)的酶学性质进行比较,分析酶反应温度、pH值、磷酸吡哆醛(PLP)浓度、酶浓度与酶活性的关系,并对高活性乳酸菌GAD酶的米氏常数进行测定。结果表明,3株乳酸菌GAD酶的最适温度为40℃,最适pH值为4.5,在PLP添加量为0.1mol/L时,对酶的促进作用达到最高,发酵乳杆菌Km值为0.05215mmol/L,最大反应速度Vmax=2.08μmol/min;短乳杆菌Km值为0.0243mmol/L,最大反应速度Vmax=1.01μmol/min。     

磷脂酶A_1(Lecitase Ultra)水解磷脂酰胆碱的动力学方程和热力学研究

研究了磷脂酶A1(Lecitase Ultra)在水相体系中水解磷脂酰胆碱(PC)的动力学和热力学性质。依据Arrhenius经验方程式,计算出了催化水解反应的活化能为5.96 k J/mol;并进行了Lecitase Ultra水解PC的Briggs-Haldane稳态法酶催化模型动力学模拟,利用底物抑制原理进行了模型修正;采用Lineweaver-Burk作图法,计算出反应的动力学参数Km,Vmax和kI分别为4.02×10~(-2)mol/L、10.05 mol/(L·min)和1.33×10~2mol/L。研究结果为探讨Lecitase Ultra催化机理及其变性机理提供了参考。