酶法改变甘草苷糖醛基提高其甜度的研究（Ⅰ）：能水解甘草苷糖？…

以酶不改变甘草甘糖醛酸基提高其甜度为目标,研究了９种新菌株能产生水解甘草苷糖醛酸基的β－葡萄糖醛酸苷酸产率。结果,细菌甘Ｅ－１、霉菌甘Ｍ－３和甘Ｍ－６等产β－甘Ｍ－６等产β葡萄糖醛酸苷酸较好,产率分别为５６．７３Ｕ／ｍｌ、４２．５２Ｕ／ｍｌ和３１．２６Ｕ／ｍ,产酶最佳培养时间分别为细菌１８ｈ和霉菌４８ｈ。     

酶法改变甘草苷糖醛酸基提高其甜度的研究(Ⅱ)——能水解甘草苷糖醛酸基酶的提纯与酶性质研究

以酶法改变甘草苷糖醛酸基提高其甜度为目的,对新分离筛选的甘Ｍ－２和甘Ｍ－６霉菌产的β－葡萄糖醛酸苷酶进行了分离提纯和酶学方面的研究。结果表明,两株菌产的β－葡萄糖醛酸苷酶被６０％饱和硫酸铵沉淀较好,经ＤＥＡＥ－ＣｅｌｕｏｓｅＤＥ５２离子交换层析柱梯度洗脱,得到纯酶,提纯倍数分别为１０．６７和６．１５倍,收率分别为３３．０％和２４．２％,其中甘Ｍ－２菌产β－葡萄糖醛酸苷酶只能将甘草苷水解成甘草次酸（ＧＡ）;甘Ｍ－６菌产β－葡萄糖醛酸苷酶水解甘草苷主要变成甜度很高的单葡萄糖醛酸基甘草苷（ＧＡＭＧ）;两种酶在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳都得到电泳单点,其酶蛋白相对分子质量分别为６００００和４２０００;酶反应最适ｐＨ分别为５．０和６．０,最适温度均为４０℃,均在ｐＨ４．０～８．０和２０～７０℃范围内相对稳定。     

酶法改变甘草苷糖醛酸基提高其甜度的研究（II）：能水解甘草苷糖 …

以酶法改变甘草苷糖醛酸基提高其甜度的为目的,对新分离筛选的Ｍ－２和甘Ｍ６－６霉菌产的β－葡萄糖醛酸苷酶进行了分离提纯和酶学方面的研究,结果表明,两株菌产生的β－葡萄糖醛酸苷酶被６０％饱和硫酸铵沉淀较好,经ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｏｓｅＤＥ５２离子交换层析柱梯度洗脱,得到纯酶,提纯倍数分别为１０．６７和６．１５倍,收率分别为３３．０％和２４．２％,其中甘Ｍ－２菌产β葡萄糖醛酸苷酶只能将甘草苷水解成甘草次     

甲壳素固定化β-葡萄糖醛酸苷酶的研究

以甲壳素为载体、戊二醛为交联剂,固定β-葡萄糖醛酸苷酶,对β-葡萄糖醛酸苷酶的固定化条件进行了研究,并通过正交实验确定了酶固定的最佳条件：戊二醛浓度0.7%,交联时间4h,吸附时间为9h,反应温度40℃,此时酶活力回收率可达67.32%。     

内生真菌β-D-葡萄糖醛酸苷酶固定化及其性质研究

以海藻酸钠为载体、戊二醛为交联剂,对内生真菌Chaetomium globosum S108的高选择性β-D-葡萄糖醛酸苷酶的固定化及部分特性进行了研究。结果表明:β-D-葡萄糖醛酸苷酶的最佳固定化条件为海藻酸钠1.5%、戊二醛1.5%、添加酶量3 500 U、Ca Cl2浓度2%,交联时间30 min。β-D-葡萄糖醛酸苷酶固定化后,其最适温度提高5℃,最佳pH值由6.0~6.8拓展为5.2~7.6,热稳定性和pH稳定性明显改善;米氏常数(Km)明显增大,而最大反应初速度(Vmax)明显减小。固定化酶重复操作15次,其相对酶活仍保持71%。     

大肠杆菌中β-葡萄糖醛酸酶活性的测定

目的:测定大肠杆菌β-葡萄糖醛酸酶在不同培养基配方及不同培养时间的酶活。方法:利用对硝基酚-β-D-葡萄糖醛酸苷作为酶反应底物,在波长为405nm下比色,检测酶反应所释放的对硝基酚的量,以测定液体培养基中β-葡萄糖醛酸酶活性。研究结果表明,培养基配方2酶活性较高,对pH缓冲能力强,适合于产β-葡萄糖醛酸酶。     

树脂法提取甘草中甘草苷的研究

主要研究了树脂法提取甘草中的甘草苷。结果表明：国产多孔树脂Ｄ１０１和日本产ＨＰ２０树脂在水溶液中，对甘草苷的最大吸附量分别为２３８．７ｍｇ／ｇ和２７８．９ｍｇ／ｇ；吸附后的Ｄ１０１树脂和ＨＰ２０树脂洗脱甘草苷的最佳乙醇浓度分别为５０％和６０％。甘草经粉碎、水浸、过滤、减压蒸馏、浓Ｈ２ＳＯ４沉淀等步骤，甘草苷粗品得率为９％以上，粗品再经Ｄ１０１树脂和ＨＰ２０树脂处理，得甘草苷纯品，得率分别为６０％和８６％。     

海藻酸钠固定化β-葡萄糖醛酸苷酶的研究

本文研究了以海藻酸钠为载体,采用交联-包埋方式固定β-葡萄糖醛酸苷酶的固定化工艺。分别考察海藻酸钠浓度、戊二醛体积分数、氯化钙浓度、交联时间和固化时间对固定化酶相对酶活力的影响,并以正交试验确定β-葡萄糖醛酸苷酶最佳的固定化条件:海藻酸钠质量浓度35g/L、给酶量1600U/g载体、戊二醛体积分数0.2%、氯化钙质量浓度20g/L、交联时间2h、固化时间2h。研究表明此时固定化酶的回收率较高,可达到71.66%,本文使用的固定化工艺简单易行,具有广阔的工业前景。     

毕赤酵母高效表达重组β-葡萄糖醛酸苷酶的诱导方法研究

将甘草酸生物转化合成GAMG已成为国内外医药和食品行业研究的热点。该文在前期构建毕赤酵母(pichia pastoris)工程菌GS115-GUS的基础上,对重组毕赤酵母工程菌发酵条件进行了研究。通过单因素及正交试验建立工程菌最佳表达β-葡萄糖醛酸苷酶的诱导产酶方法:重组毕赤酵母GS115-GUS菌株在液体YPD培养基中活化24 h后,接种到BMGY中富集菌体,OD600达到6.0时,按照1∶1(V/V)的接种比率接入到pH为6.0的BMMY培养基中,加入1.5%诱导剂甲醇诱导产酶,且每隔24 h添加一次。该诱导产酶条件简单、易行、科学、合理,毕赤酵母高效表达GAMG的酶活高达1.97×103 U/mL,研究结果达到预期目标,为进一步研究重组酵母工程菌产β-葡萄糖醛酸苷酶的发酵水平、β-葡萄糖醛酸苷酶生物催化甘草酸制备GAMG以及工业化生产奠定基础。     

茶皂素β-D-葡萄糖醛酸酶水解物的结构分析

茶皂素有较强的溶血性,但经β-D-葡萄糖醛酸苷酶水解后溶血性降低。 该研究利用正丁醇和乙酸乙酯分别对茶皂素及其 β-D-葡萄糖醛酸苷酶酶解产物进行萃取纯化,采用超高效液相-质谱鉴定酶解前后茶皂素各组分含量的变化,从而分析其结构变化。结果表明,酶解后乙酸乙酯提取物中糖苷型茶皂素从75.06%降为5.24%,苷元型组分从6.76%增至67.05%。正丁醇提取物中糖苷型茶皂素从51.61%降为34.98%,从而推断可能是β-D-葡萄糖醛酸苷酶酶解后,茶皂素亲水性的糖基与疏水性的配基分离,两亲性下降,从而使其溶血性降低。     

泰国发酵食品Tuanua中蛋白酶菌株的分离及初步鉴定

研究从泰国发酵食品Tuanua中分离蛋白酶菌株，在所分离的6个株菌株中，有3株在蔗糖废蜜培养基试管培养中即超过1000单位／ml，比1990年Margarita分离到的枯草杆菌BIOTECH113的235单位／ml和1993年Moon分离到的坚强芽抱杆菌NRS的234单位／ml高5倍多。该3株菌初步鉴定为芽孢杆菌属第一群的B亚群。其中一株用蔗糖废蜜培养基在3L搅拌通气发酵罐中发酵，于7h内产生250单位／ml的蛋白酶活性。通过补充大豆饼粉和蔗糖废蜜，培养到35h细胞数量和蛋白酶活力分别达到1010／ml和13770单位／ml。比我国蛋白酶生产用菌株枯草芽胞杆菌AS1．398和地衣芽胞杆菌2709的高近一倍。最佳发酵温度33．8℃,产酶活力随通气和搅拌速度的减小而减小，随通气和搅拌速度的增加而增加。所产蛋白酶的最佳作用pH为8．5。且在此pH8．5的条件下是稳定的，在0．05M、pH9．5的甘氨酸溶液中，20h活力仍然保持70％。最佳催化温度65℃，但只有在45℃以下时才稳定。     

不同微生物菌株产脂肪酶发酵条件优化

从石油污染土壤中分离、筛选出4株产脂肪酶高的微生物菌株,采用正交试验对4株菌产脂肪酶发酵条件进行了初步优化。结果表明,碳源种类和油含量对各种菌株产酶的影响效果较大;其中D4菌株产酶活最高,达到51.667U/mL;而A6菌株产酶活最低,为23.334U/mL。为进一步工业化生产脂肪酶奠定理论基础。     

里氏木霉液体发酵法生产纤维素酶

通过比较几株霉菌产纤维素酶活力，发现里氏木霉ＲｕｔＣ－３０活力最高；采用Ａｖｉｃｅｌ与麸皮复合碳源，以及使用ＫＨ２ＰＯ４－Ｋ２ＨＰＯ４缓冲系统控制发酵液ｐＨ，２８℃摇瓶发酵６ｄ，最高酶活达到ＣＭＣａｓｅ１００－１２５Ｕ／ｍｌ，ＦＰＡ９－１２Ｕ／ｍｌ。采用２．５升发酵罐培养，通过控制ｐＨ和溶氧，纤维素酶活力为ＣＭＣａｓｅ１３３．４Ｕ／ｍｌ，ＦＰＡ１１．６７Ｕ／ｍｌ。用硫铵盐析法提取制得纤维素酶干粉，其活力为ＣＭＣａｓｅ３０７４．９Ｕ／ｇ，ＦＰＡ１６６．７Ｕ／ｇ。     

不同营养元素对紫色红曲霉液态发酵产酯化酶的影响初探

以紫色红曲霉（Monascus purpureus）FBKL3.0018为研究对象,发酵产酯化酶的酶活力为考察指标,初步探究了维生素、氨基 酸及其他营养元素等对紫色红曲霉FBKL3.0018产酯化酶的影响。 结果表明,在发酵培养基中分别添加0.20%维生素B2、0.3% L-谷氨酸、 0.7% D-半乳糖对菌株产酯化酶的能力较好,其中添加0.7% D-半乳糖对产酯化酶起显著促进作用,酯化酶酶活最大值为919.12 U/mL, 而蔗糖对酯化酶酶产量影响最小,但对红曲霉生物量产量起积极作用,最大生物量为68.94 mg/mL。 结果显示,酯化酶酶活与相应的 生物量积累量不呈正相关。     

Solubilization of wheat gluten with sodium hydroxide

The solubility of wheat gluten may be increased greatly by treatment with 0.25 M sodium hydroxide. At temperatures of 40°C and above, the solubility of the protein exceeds 100 mg/ml in a reaction time of 6 hr or less. The products from the reaction of 60°C and 80°C were darker than the original gluten and had an unpleasant odour of H₂S on dissolution in water. They also contained traces of lysinoalanine. The 40°C reaction product was about the same colour as gluten, and its solutions in water did not smell of H₂S. Reaction of gluten at 20°C also caused a large increase in solubility, but after 24 hr the solubility was only 77 mg/ml. This product was also of the same colour as gluten, and did not smell of H₂S in solution. Neither the 20°C nor the 40°C products contained detectable traces of lysinoalanine. For reasons of flavour, colour, lysinoalanine content and economy of time, the optimum reaction conditions are 6 hr at 40°C.     

Enzyme activities of lactic acid bacteria from a pearl millet fermented gruel (ben-saalga) of functional interest in nutrition

Lactic acid bacteria responsible for the fermentation of a pearl-millet based fermented gruel, ben-saalga, were investigated for enzyme activity in relation with the nutritional characteristics of gruels used as complementary foods for young children. Thirty pre-selected LAB from a set of 155 isolates were characterized principally for their ability to produce amylase, phytase and alpha-galactosidase. Two Lactobacillus plantarum strains (4.4 and 6.1) and three Lactobacillus fermentum strains (11.11.2, 3.7, 7.4) able to produce one or more of these enzymes were selected. Only weak amylase activity was found in the two Lactobacillus plantarum strains. alpha-amylase activity was associated with cells and was lower than 0.05 Ceralpha Units/ml. Phytase activity was detected in all five strains and was linked to the cell. The highest phytase activity was found in Lb. plantarum 4.4 and 6.1 (348.7 +/- 17.4U/ml and 276.3 +/- 51.4U/ml, respectively) and Lb. fermentum 7.4. (276.3 +/- 13.2U/ml). All strains displayed a cell-linked alpha-galactosidase activity. In a medium containing 2% glucose, the highest cellular activity was found in Lb. fermentum 3.7 (1441.1 +/- 133.7U/ml) and Lb. plantarum 4.4 (1223.1 +/- 148.3U/ml) after 6h of fermentation in the presence of stachyose, and in Lb. plantarum 4.4 (763.3 +/- 23.5U/ml) and Lb. fermentum 7.4 (346.7 +/- 14.8U/ml) after 24h of fermentation with raffinose. These results are consistent with previous observations showing that phytates and alpha-galactooligosaccharides decreased during the natural lactic acid fermentation of pearl millet slurries, and that partial starch hydrolysis can be performed by endogenous microflora provided a pre-gelatinisation step is included in the process.     

白酒糟纤维素降解菌的分离筛选及发酵条件优化

该试验将松针腐殖土样品在酒糟富集培养基中富集,采用刚果红染色和滤纸崩解初筛,3,5-二硝基水杨酸（DNS）法复筛筛选高酶活的纤维素降解菌,对其进行分子生物学鉴定,并对其产酶条件进行优化,结果表明,筛选得到一株高酶活的纤维素降解菌M5,经ITS rDNA序列分析鉴定为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）。其在发酵温度20 ℃、初始pH值为3、酒糟为碳源、牛肉膏为氮源,发酵5 d时羧甲基纤维素（CMC）酶活为9.17 U/mL,滤纸酶活为3.50 U/mL;菌株M5所产的纤维素酶的最适反应温度为55 ℃。     

白酒发酵高糖化性能霉菌的筛选及鉴定

以不同香型大曲为筛选源分离出霉菌96株,在透明圈法初筛、糖化力测定法复筛的基础上,以清香大曲和糖化酶为对照,模拟白酒酒精发酵过程,将酿酒酵母与霉菌纯种曲混合发酵,以出酒率作为评判指标,从中筛选出1株优质霉菌Rh-07。其纯种曲糖化力、发酵结束后培养基中酒精浓度、出酒率分别为2657.00 U/g、15.40 mL/100 g、42.73%;且以Rh-07纯种曲为糖化剂,其发酵速度基本与对照大曲一致。采用传统微生物学和现代分子生物学的方法对Rh-07进行了鉴定,初步确定为Rhizopus oryzae。同时发现,霉菌糖化酶活力大小与其在酒精发酵中的作用不成严格的正相关关系;在评价霉菌在白酒酒精发酵过程中作用时,不能单纯以糖化酶作为评价指标,应以原料与霉菌作用后的整个物系对酒精发酵作用作为评价指标。     

浓香型白酒产糖化酶菌株筛选及产酶条件研究

利用透明圈法从浓香型白酒曲房空气中筛选得到1株产糖化酶能力较强的菌株（J8M．53）,液体培养96h后,糖化酶活性可以达到887u／mL。研究发酵条件对该菌株产糖化酶能力影响,结果表明：虽然该菌株产糖化酶的最适初始pH值、培养温度和最佳碳源分别为5℃、30℃和可溶性淀粉,但在pH值为4,培养温度为40℃时酶活依然保持在较高的水平,且菌株对其他各碳源都有一定的利用。该菌株属于好氧菌或者兼性厌氧菌,对氧的需求量较大。另外,该菌株对酒精有一定的依赖性,并具有较强的耐酒精能力,当培养液中酒精浓度6％vol时,菌株的糖化酶活性最高,酒精浓度为12％vol时的糖化酶活性是最大值的74％。