金种子优质窖泥高产己酸菌的筛选鉴定及其应用性能分析

在浓香型白酒酿造过程中,窖泥作为酿酒微生物的重要载体对曲酒的酒体质量与风格特征具有重要影响。从优质窖泥中筛选高产己酸菌,并制备人工窖泥以提高酒体中己酸乙酯的含量或制备生产己酸乙酯产品等,对曲酒生产具有重要意义。本文通过富集培养、平板涂布、发酵液己酸含量检测、16S rDNA分析等方法,筛选鉴定高产己酸菌株,并考察培养温度、乙醇浓度、pH值等发酵条件,分析己酸菌液配方组分单因素含量影响等。结果表明,筛选得到的高产己酸菌JZZ,其液态发酵己酸平均产量为4.36 mg/mL,温度耐受区间为36~39℃,乙醇耐受浓度为2%~6%,己酸菌液配方组分添加量为硫酸镁0.01%,硫酸铵0.05%,磷酸氢二钾0.3%,乙醇2%,16S r DNA比对结果表明,JZZ菌株为克氏梭状杆菌(Clostridium kluyveri)。     

己酸菌的筛选及发酵特性研究

在浓香型白酒生产中,己酸菌是窖泥中的重要功能菌,影响着白酒的品质。本研究通过对老窖泥进行富集培养,分离筛选出1株高产己酸的己酸菌,经16S rDNA鉴定为速生梭菌(Clostridium celerecrescens),命名为E-6。并研究培养时间、培养温度、乙醇添加量对菌株的生长和发酵特性的影响。结果表明,E-6产己酸的最佳培养温度为34℃,乙醇添加量为2 mL/100 mL,此条件下培养10 d左右己酸产量可达到9.4 g/L。     

窖泥中己酸菌的筛选及其运用

筛选窖泥中己酸菌,为人工窖泥培养提供优质功能菌。采用厌氧法筛选己酸菌,结合生化和16S rRNA性质进行分析。从窖泥中筛选出Clostridium guangxiense strain xsk1和Clostridium kogasensis strain xsk2两株己酸菌,其相比Clostridium kluyveri菌株在遗传学地位上皆有显著差异。将这两株己酸菌在乙醇添加量0%、pH6条件下厌氧培养10 d后分析其代谢产物可知,均可产生己酸、丁酸、乙酸,同时其都能生成少量的己酸乙酯和丁酸乙酯,其中己酸产量分别为4.51 g/L、2.5 g/L。查阅文献可知,Clostridium guangxiense strain xsk1属于高产己酸菌,将其作为己酸菌来源培养不同载体的人工窖泥,发现培养两个月的粉末活性炭载体人工窖泥中,己酸菌数量为1.77×10~8cfu/g,并且该窖泥具有良好的发酵性能。     

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究

浓香型白酒的主体香味物质是己酸乙酯,己酸菌是重要的功能菌种。该研究从优质窖泥中分离获得了高产己酸菌株,命名为JZZ,该菌是革兰氏阳性杆菌,经形态学和16S rDNA序列鉴定,属于克氏梭菌（Clostridium kluyveri）。通过培养条件考察,该己酸菌最适培养条件为接种量5%,装样量90%,培养温度37 ℃,pH值为6.5。在最适培养条件下,菌株JZZ的己酸产量均可达到4.36 mg/mL。     

窖泥中高产丁酸梭菌的筛选、鉴定及其生长耐受性研究

从浓香型白酒窖泥中通过传统微生物分离手段筛选高产丁酸的梭菌,并对分离菌株进行形态学观察、分子生物学鉴定及生长耐受性分析研究。结果表明,通过发酵产物检测获得两株高产丁酸菌株,编号为AB2RH027和AB2RH033,经过菌落观察、革兰氏染色及分子生物学鉴定两株菌均为丁酸梭菌（Clostridium butyricum）。通过耐受性实验,确定菌株AB2RH027最适生长pH值为8,最适生长温度为40 ℃,酒精耐受性为15%vol,发酵24 h丁酸产量为5.29 g/L;菌株AB2RH033最适生长pH值为8,最适生长温度为35 ℃,酒精耐受性为18%vol,发酵24 h丁酸产量为5.23 g/L。该研究筛选得到的两株高产丁酸的菌株在白酒品质提升方面具有一定应用价值。     

一株可调节浓香窖泥pH的克氏梭菌对基酒质量影响

浓香大曲酒在发酵过程中窖泥pH降低，形成窖泥的老化，窖泥产己酸能力减弱，导致基酒中己酸乙酯含量降低，影响基酒质量。为解决此问题，筛选出一株高产己酸的微生物，使用筛选培养基对该菌株进行富集培养，该菌株具备调节窖泥pH功能。采用显微镜镜检技术对该微生物进行形态鉴定，并采用16S rDNA测序进一步鉴定菌株的种属，鉴定该菌株为Clostridium celerecrecns。将Clostridium celerecrecns（克氏梭菌）制成养护液喷洒于窖池中，可有效改善窖池pH下降，保证基酒中己酸乙酯稳定产出，基酒中主体香更加突出，窖池中己酸菌菌数较对照组增加50%～70%，窖池pH升高2.0左右，基酒己酯含量提升0.9g/L，可有效防止窖池老化，提升基酒质量。     

津酒老窖泥己酸菌的筛选及培养条件的优化

本试验从津酒老窖泥中筛选出两株己酸菌,并对其培养条件进行了优化。结果显示,当pH值为6,酒精浓度为3%vol,培养温度为34℃,蛋白胨含量为4 g/L时,己酸菌生长最为旺盛且产己酸含量最高,为最适培养条件。     

窖泥酯化菌的富集筛选及其生长条件研究

以优质老窖泥为研究对象,厌氧条件下富集酯化菌,并对富集条件进行优化。通过传统培养分离法及顶空固相萃取-气相色谱-质谱（HS-SPME-GC-MS）法从优化富集液中筛选酯化菌,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定,并研究其生长条件。结果表明,窖泥富集液培养20 d并富集2次有利于酯化菌的富集,从优化富集液中共筛选出3株产己酸乙酯和丁酸乙酯的厌氧梭菌。经鉴定,菌株Y1、Y2、Y3分别为拜氏梭菌（Clostridium beijerinckii）、Clostridium guangxiense、Clostridium sartagoforme,其中,菌株Y1的最佳生长温度为30 ℃、最适生长pH值为5;菌株Y2的最佳生长温度为34 ℃、最适生长pH值为7;菌株Y3的最佳生长温度为37 ℃,最适生长pH值为5,且3株菌株的最高耐乙醇体积分数达20%。     

窖泥中产丁酸菌的筛选、鉴定及生长性能研究

通过对川南某酒厂的老窖泥富集培养、分离纯化,经丁酸发酵实验,筛选出1株高产丁酸的梭菌。经16Sr DNA鉴定,该菌为丁酸梭状芽孢杆菌(Clostridium butyricum),命名为丁酸菌YD-4。经对该菌株生长性能条件研究,其最适生长温度为37℃,最适p H值为7.0,最适接种量为2%,菌体浓度达1.64×108个/m L,产丁酸量可达到3.44 g/L。     

己酸发酵条件研究

己酸发酵的水平与菌种的产酸能力、培养条件有较大关系,本文从筛选的菌种js-22-07进行发酵条件的研究,获得最大己酸产量为20.3g/L。通过单因素和正交试验,确定了js-22-07菌株最优发酵培养基和发酵工艺参数。优化发酵培养基:乙醇2.5%,乙酸钠5g/L、酵母膏2g/L。发酵工艺最佳参数为:接种量13%、pH 7.0,发酵温度35℃,发酵时间9-10d。     

己酸菌工业扩大培养条件的优化

从优质老窖泥中分离得到的一个高产复合己酸菌系,可用于人工窖泥培养及窖池维护。优化培养条件以获得最大己酸菌芽孢产量,在单因素实验的基础上,采用正交设计方法,确定工业扩大培养条件。研究表明：该菌繁殖的最适条件是：生长初始pH7.0、接种量10%、培养温度35℃、乙醇2.0%、NaAc1.0%、NH4Cl0.05%、CaCO30.8%,培养周期7d,在此培养条件下芽孢数可达4.01亿个/mL水平。     

一株产丁酸菌的分离、纯化及产酸研究

从稻花香酒厂老窖泥中分离出一株产丁酸菌BTL-B02。BTL-B02菌株在液态培养条件下的最佳产酸接种量为5%,温度为36℃,pH7.0,且有较弱的己酸发酵力。该菌株和己酸菌在接种比为1∶1时能有效的促进己酸的生成,其己酸产量提高50%左右。     

高产酸本土非酿酒酵母菌株的筛选及发酵性能研究

以25株本土非酿酒酵母菌为研究对象,采用酵母浸出粉胨葡萄糖（YPD）10培养基及Triple M改良模拟汁初筛,并进行耐受性（乙醇、SO2、糖及pH）测定及葡萄汁发酵,筛选能够有效增加葡萄酒酸度的优良本土非酿酒酵母菌。结果表明,非酿酒酵母菌株LT1及HU4产酸性能较好,具有较好的乙醇、SO2、糖和pH耐受性,其中菌株LT1能耐受乙醇体积分数12%、糖400 g/L及pH 2.75,菌株HU4能耐受乙醇体积分数6%vol、糖250 g/L及pH 2.75。菌株LT1和HU4在葡萄汁中启酵时间较短,发酵旺盛期CO2质量损失速率均＞0.8 g/（L·h）,乳酸产量分别为0.93 g/L、1.14 g/L,乙酸产量分别为0.38 g/L、0.42 g/L,具备酿造增酸葡萄酒的潜力。     

优良耐酸酿酒酵母的筛选及发酵特性研究

该研究采用酸性选择培养基、氯化三苯基四氮唑（TTC）显色法、杜氏小管发酵法从实验室保藏的87株酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中筛选耐酸性强的优良菌株，并测定其最适生长条件、耐受性及发酵性能。结果表明，最终筛选出一株耐受性强及发酵性能优良的菌株SC-62，其最适生长温度为28 ℃、最适pH为4.0，可耐受乙醇体积分数14%、NaCl 100 g/L、葡萄糖500 g/L，具有发酵力[5.93 g CO2/（100 mL·24 h）]强，酒精产量（7.55%vol）高，延滞期（12 h）短、适应性强等优点。该菌株的成功筛选为后续高效生产酒精提供了良好的菌种来源。     

十里香老窖泥中己酸菌的分离纯化及扩大培养和应用的研究

为了提高十里香窖泥的质量,对老窖泥中的己酸菌进行了分离纯化,并将筛选出的优质菌种进行扩大培养和应用。结果表明:添加了己酸菌的窖池产酒质量明显高于未进行处理的窖池。