海藻酸钠-壳聚糖钠固定碱性果胶酶的研究

采用海藻酸钠-壳聚糖固定化碱性果胶酶,通过对固定化酶活力回收率影响条件的讨论,确定碱性果胶酶固定化的最优条件为:海藻酸钠3%,碳酸钙1.5%,游离酶1 500 U/g,乳化时间50 min,乳化剂MOA-3用量0.4 mL/L,转速500 r/min,壳聚糖1.5%。结果表明:固定化酶活力回收率达到69.23%。制备的固定化酶最适pH为9,最适温度为60℃,这种固定化酶比游离酶的耐热性和耐碱性有明显提高,而且固定化操作稳定性较好,重复利用5次后,酶活力仍可保持原来的60%。     

交联壳聚糖固定化β-葡萄糖苷酶的稳定性研究

以戊二醛交联壳聚糖微球为载体通过共价连接反应固定化β-葡萄糖苷酶,研究固定化β-葡萄苷酶的稳定性。结果表明:固定化和游离β-葡萄糖苷酶的最适温度分别为706、5℃,最适pH分别为4.0、4.5。固定化β-葡萄苷酶贮存11周以后仍保持75.0%以上的相对活力,连续使用6批次后其相对活力仍保持在65.0%以上。固定化β-葡萄糖苷酶的高温、pH、贮存、操作稳定性明显高于游离酶。     

海藻酸钠-壳聚糖固定化胃蛋白酶的研究

采用海藻酸钠-壳聚糖包埋交联法对胃蛋白酶进行固定化。以固定化酶的活力回收率为指标,探讨了固定化的条件及固定化胃蛋白酶与游离胃蛋白酶的酶学性质。结果表明:最优固定化条件为,海藻酸钠浓度为3.40%,壳聚糖浓度为3.39%,CaCl2浓度为3.64%,游离酶稀释倍数20倍,交联时间4h,固定化酶回收率74.87%±1.07%;固定化酶的最适温度47℃,最适pH3.5;得到的固定化酶的操作稳定性和热力学稳定性都较好,该固定化酶重复使用5次后,活力仍可以保持62%以上。     

磁性固定化漆酶在苹果汁除酚中的应用研究

以磁性聚苯乙烯微球为载体,戊二醛为交联刑,制备出了磁性固定化漆酶。研究表明：固定化酶的Km值较游离酶小,最适温度与游离酶相同,最适pH较游离酶下降0．4个单位,热稳定性、pH稳定性和贮存稳定性均较游离酶有所提高。Fe^2 、Hg^2 、Cr^3 对固定化酶有抑制作用,Cu^2 对固定化酶有激活作用。抑制刑EDTA、DMSO对磁性固定化酶的抑制作用明显较游离酶小。固定化漆酶在40℃条件下处理2h后,苹果汁中多酚含量减少20％,而酶活力没有变化。     

壳聚糖固定胰蛋白酶的研究

以自制壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂将胰蛋白酶固定化。５％戊二醛在３０℃下处理载体８ｈ，加１０ｍｌ酶液固定１２ｈ以上，活力回收率达６７－７５％，固定化酶的表观米氏常数ｋｍ＝２２．２２ｍｇ／ｍｌ，耐游离酶ｋｍ＝４．１７ｍｇ／ｍｌ；固定化酶最适温度为８０℃，比游离酶提高了３０℃，固定化最适ＰＨ值为７．５，而游离酶麦的贮存稳定性很好，二个多月重复使用，酶活力未明显下降。     

壳聚精固定胰蛋白酶的研究

以自制壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂将胰蛋白酶固定化。5％戊二醛在30℃下处理载体8h,加10ml酶液（0．3mg／ml,pH7．0）固定12h以上,活力回收率达67％－75％。固定化酶的表观米氏常数（酪蛋白）k’m=22．22mg／ml,而游离酶k’m=4.17mg／ml;固定化酶最适温度为80℃,比游离酶提高了30℃;固定化最适pH值为7．5,而游离酶为8．0;固定化酶的贮存稳定性很好,二个多月重复使用,酶活力未见明显下降。     

聚乙烯醇-海藻酸钠固定化磷脂酶A1的研究

以聚乙烯醇、海藻酸钠为载体,以固定化磷脂酶活力和回收率为依据,确定最佳固定化工艺为:以10%聚乙烯醇和2%海藻酸钠为载体,酶的加入量为10 mg/100 g,在4%硼酸和2%氯化钙的交联剂中处理30 min,载体粒径为4 mm,得到的固定化磷脂酶的活力为140.48 U/g,其热稳定性和pH稳定性较游离酶得到提高,并且具有较好的操作稳定性、贮藏稳定性及动力学特性。     

壳聚糖固定化超氧化物歧化酶的研究

目的:研究壳聚糖固定化超氧化物歧化酶的酶学性质。方法:分别以不同方法对超氧化物歧化酶进行固定并比较其活力,对固定化方法进行相应的优化,对固定化超氧化物歧化酶进行酶学性质测定。结果:以壳聚糖为载体,戊二醛交联法制备固定化超氧化物歧化酶,优化条件下制备的固定化酶,所得固定化酶活力为330U/g,酶活回收率为58.33%,热稳定性和酸稳定性较游离酶有很大的提高,且具有良好的贮存稳定性,固定化酶可实现反复使用,提高了利用率。结论:壳聚糖-戊二醛交联法可用于制备性能较优的固定化超氧化物歧化酶。     

响应面法优化脂肪酶的固定化条件及其水解橄榄油的特性研究

采用Sepharose CL-4B和7种大孔树脂为载体固定Palatase 20000L脂肪酶,对载体进行筛选,以酶活力为指标,采用响应面法优化固定化条件,并考察所制得固定化酶的稳定性和水解橄榄油的酶学性质。结果表明：以大孔树脂HPD-600为载体制得的固定化酶具有较高的活性和良好的稳定性。其最优的固定化条件为：pH3.9,酶与载体比例为9.1mg/g,吸附时间1.8h。在最优条件下制得固定化酶在最适合条件下测得的酶活力达到1440U/g,酶活回收率大于50%。固定化酶最适作用温度为50℃,最适作用pH值为8.0。固定化酶的Km值为0.130g/mL,高于游离酶的Km(0.069g/mL)。固定化酶的热稳定性有一定程度的提高,其重复操作5次后相对酶活力仍保持在58%以上。     

沙蒿胶磁性微球固定化脂肪酶及部分理化性质的研究

以沙蒿多糖-壳聚糖复合磁性微球为载体,采用物理吸附法固定化脂肪酶,对固定化过程中对酶活力有影响的各种因素做了研究,同时对固定化酶的部分理化性质、最适pH、最适温度、酶的热稳定性以及表现米氏常数与游离酶做了比较.固定化酶的Km小于游离酶的Km,其最适pH和最适温度分别为8.0和50℃,而且固定化脂肪酶具有良好的热稳定性、可应用性和重复使用性.     

壳聚糖固定化海藻糖合酶

利用壳聚糖作为载体,将大肠杆菌BL21异源表达且纯化后的海藻糖合酶(TreS),采用吸附法制备成固定化酶。固定化单因素实验结果表明,最适海藻糖合酶与壳聚糖的加入量为32.0 mg/g,最适吸附时间为2.5 h。固定化酶最适反应温度为40 ℃,最适反应pH为6.0,酶活回收率为40.17%,重复使用9次后,固定化酶酶活残留率为64.64%,重复使用性良好。在4~60 ℃范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于87%,与游离酶相比温度稳定性没有明显变化。在pH3.5~8.5范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于60%,酸碱稳定性优于游离酶。反应进程试验结果表明,2 h时海藻糖得率达最大,为61.4%。     

包埋-交联磷脂酶A1聚集体的制备及酶学性质

为得到可重复使用且活力较高的固定化磷脂酶A1,采用包埋-交联酶聚集体的方法对磷脂酶A1进行固定,对固定化条件和部分酶学特性进行优化和研究,确定最佳条件为:酶液质量浓度0.06g/mL、沉淀剂饱和度80%、沉淀pH6、沉淀时间35min、戊二醛体积分数0.4%、交联时间6.5h、海藻酸钠质量分数2%、Ca2+浓度0.25mol/L。得到包埋-交联磷脂酶聚集体A1的酶活回收率为80.2%。固定化酶热稳定性增强,重复使用7次相对酶活力保留在6 5%以上。     

菠萝皮渣羧甲基纤维素/海藻酸钠复合水凝胶珠固定化菠萝蛋白酶的制备及稳定性研究

本实验以菠萝皮渣羧甲基纤维素、海藻酸钠为原料,制备了菠萝皮渣羧甲基纤维素/海藻酸钠复合水凝胶珠,用于固定化菠萝蛋白酶。采用单因素法分析菠萝皮渣羧甲基纤维素与海藻酸钠的质量比、氯化钙的浓度、菠萝蛋白酶浓度、戊二醛体积分数和交联时间对固定化酶活性的影响。结果表明,固定化酶的优化制备工艺为:菠萝皮渣羧甲基纤维素与海藻酸钠的质量比为2:3,氯化钙的浓度为1.0%,菠萝蛋白酶浓度为2.0 mg/mL,戊二醛体积分数为1.0%,交联时间为60 min。制备的固定化酶比游离酶具有更好的热稳定性,在80℃环境下放置2.0 h后,固定化酶的相对酶活性为35.1%,而游离菠萝蛋白酶在此条件下几乎失活;在pH为11条件下放置24 h后,游离酶的相对酶活性为43.2%,而固定化酶相对酶活性为85.1%,说明固定化酶比游离酶更耐受碱性环境。另外,固定化酶重复使用7次后,相对酶活性为60.5%,说明制备的固定化酶具有较好的重复使用性能。     

氨基化硅胶作载体固定化α-淀粉酶的研究

采用5 种硅胶作为载体,戊二醛作偶联剂,制备了固定化α- 淀粉酶。对制备固定化α- 淀粉酶的硅胶目数、偶联剂浓度、温度、pH 值的影响因素进行了研究和优化。并对固定化酶和游离酶的酶学性质进行了比较。结果表明：固定化酶的最适温度为75℃,比游离酶提高了10℃,固定化酶的热稳定性优于游离酶。与游离酶相比,其对酸碱的适应性、贮存稳定性、操作稳定性也都有较明显改善。固定化酶的Km 值略低于游离酶,前者为2.13mg/ml,后者为1.02mg/ml。     

壳聚糖固定化树莓超氧化物歧化酶的研究

研究壳聚糖固定化超氧化物歧化酶的酶学性质。分别以不同方法对超氧化物歧化酶进行固定并比较其活力,对固定化方法进行相应的优化,对固定化超氧化物歧化酶进行酶学性质测定。结果表明,以壳聚糖为载体,戊二醛交联法制备固定化超氧化物歧化酶,优化条件下制备的固定化酶,所得壳聚糖酶粉活力为192U/g,酶活回收率为34%,热稳定性和酸碱稳定性较游离酶有很大的提高,且具有良好的贮存稳定性,固定化酶粉可实现反复使用,提高了利用率。壳聚糖-戊二醛交联法可用于制备性能较优的固定化超氧化物歧化酶。     

海藻酸钠-阿拉伯胶固定化糖化酶及其性质的研究

以海藻酸钠（SA）与阿拉伯胶（GA）为载体固定化糖化酶,以酶活回收率为评价指标,在单因素试验基础上,通过响应面法优化固定化条件,得到固定化糖化酶最佳工艺条件为SA-GA质量比2.7∶1,氯化钙质量浓度6.2 g/100 mL,固化时间0.8 h,此条件下固定化糖化酶酶活回收率为67.91%。通过对固定化酶酶学性质的研究得出：经固定化的糖化酶最适反应pH值与最适作用温度均与游离酶相同,pH值为4.6,温度45 ℃,热稳定性及操作稳定性均优于游离酶。     

Properties of Rhodotorula gracilis D-amino acid oxidase immobilized on magnetic beads through his-tag

D-amino acid oxidase catalyzes one of the key steps in the production of semisynthetic cephalosporins. We expressed and purified recombinant Rhodotorula gracilis D-amino acid oxidase with C-terminal his-tags. This engineered enzyme was immobilized onto Ni(2+)-chelated nitrilotriacetic acid magnetic beads through the interaction between his-tag and Ni(2+). The kinetic constants, storage properties, and the reusability of the immobilized d-amino acid oxidase were determined. The effects of temperature, pH, and hydrogen peroxide on the activity of immobilized d-amino acid oxidase were also studied. The highest activity recovery was 75%. Thermal stability was improved after immobilization; the relative activity of the immobilized enzyme was 56% whereas the free enzyme was completely inactivated after incubation at 50 degrees C for 1 h. In the presence of 10 mM hydrogen peroxide, the immobilized enzyme did not show a rapid loss of activity during the first 2 h of incubation, which was observed in the case of the free enzyme; the residual activity of the immobilized enzyme after 9 h was 72% compared with 22% of the free form. The long-term storage stability was improved; the residual activity of the immobilized enzyme was 74% compared with 20% of the free enzyme when stored at room temperature for 10 d. The immobilized form retained 37% of its initial activity after 20 consecutive reaction cycles.     

磁性聚乙烯醇微球固定化β-淀粉酶的研究

磁性聚乙烯醇微球为载体,采用戊二醛交联法固定化β-淀粉酶,并对固定化酶的理化性质等进行了研究。结果表明,磁性固定化β-淀粉酶的总活力、蛋白载量、比活、活性回收率分别为7207.62 U/g,157.21 mg/g,45.85 U/mg和52.38%;固定化β-淀粉酶的反应最适温度和最适pH分别为70℃和5.O;Fe~(2+)和Cu~(2+)对β-淀粉酶有较强的抑制作用,而Zn~(2+)对其有很强的激活作用,Mg~(2+)则不影响β-淀粉酶的活性;β-淀粉酶被固定化后其热稳定性(在水介质中)、操作稳定性、pH稳定性均比自由酶的明显提高。固定化β-淀粉酶在4℃,pH 4.5的缓冲液中保存31 d,其活力仍保持最初活力的98.3%,这比其自由酶的提高26%。     

ZIF-8原位自封装固定化脂肪酶的研究

该研究使用沸石-咪唑框架-8(zeolitic imidazolate framework-8,ZIF-8)多孔结构材料原位自封装皱褶假丝酵母源脂肪酶(Candida rugosa lipase,CRL)制备固定化脂肪酶(CRL@ZIF-8),利用红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)、X-射线衍射(X-ray diffraction,XRD)和扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)等技术研究金属离子来源、反应时间、金属离子浓度和有机连接体的浓度等因素对固定化酶催化活性和形貌特征的影响。确定固定化脂肪酶的最适合成条件:2-甲基咪唑浓度为1.0 mol/L,醋酸锌浓度为0.5 mol/L,反应时间为30 min。在该条件下制备的固定化脂肪酶CRL@ZIF-8酶活力可达到9.8 U/g,其温度稳定性有显著的提高。     

Eudragit L-100固定球毛壳霉菌木聚糖酶酶学性质的研究

采用可逆溶解性聚合物EudragitL-100对球毛壳菌木聚糖酶进行了吸附固定化。在1.0%EudragitL-100浓度时获得10.6IU/mg载体的固定化酶活和88.47%的酶活回收。酶固定化后最适温度不变,最适pH向碱性方向移动了一个pH单位。固定化酶热稳定性和操作稳定性显著提高,循环利用6次仍保留65%初始酶活。木聚糖水解产物测定表明,在同酶用量的条件下固定化后总还原糖产量明显高于游离酶,二者水解产物均以低聚糖为主,酶固定化后水解产物木二糖含量显著高于游离酶,成为主要的产物。木聚糖酶固定化后各方面特性明显优于游离酶,在低聚糖生产中有实际应用价值。