进出口食品中不同血清型沙门氏菌PFGE和 MLST分型比较研究

目的：通过PFGE和MLST两种方法对进出口食品中不同血清型沙门氏菌的分辨力和应用价值进行了比较研究。方法：采用PFGE和MLST两种方法对进出口食品中分离得到的鼠伤寒及肠炎两种血清型共30株沙门氏菌进行分型研究。结果：两种血清型共30株沙门氏菌经PFGE分型可得到23种型别,DI值为0.9563;鼠伤寒和肠炎两种血清型菌分别经PFGE分型,DI值分别为1.000和0.9048。MLST对30株沙门氏菌分型得到4种ST型,DI值为0.5793;鼠伤寒和肠炎两种血清型菌分别经MLST分型,DI值分别为0.2571和0.1333。结论：在分辨力方面,PFGE更适合于同一沙门氏菌血清型的分型,MLST适合于不同沙门氏菌血清型间的分型。MLST在替代、补充血清型分型方面有潜在的优势,PFGE在溯源研究方面似乎更胜一筹。     

腹泻患儿粪便中沙门菌的血清型、药敏分析及脉冲场凝胶电泳分子分型研究

目的 研究2019年北京市朝阳区0-10岁腹泻患儿粪便中分离出的沙门菌的血清型、PFGE分子分型研究及耐药特点。方法 对分离自腹泻患儿病例的47株沙门菌进行血清分型,采用微量肉汤稀释法进行27种抗生素的药敏实验;采用PFGE脉冲场凝胶电泳进行指纹图谱分型研究。结果 47株沙门分为9种血清型,优势血清型两种,分别为肠炎沙门菌23株占48.94%,鼠伤寒沙门菌14株占29.79%。47株沙门菌对磺胺异恶唑耐药率(57.45%)最高,其次为氨苄西林(48.94%)和链霉素(48.94%)。23株肠炎沙门菌可分成8个PFGE指纹图谱,15株鼠伤寒沙门菌可分成14个PFGE指纹图谱。结论 北京市朝阳区0-10岁儿童食源性沙门菌血清主要为肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌,各血清型的耐药性有所不同,PFGE指纹图谱呈多样性。     

广东、广西、福建省和上海市零售鸡肉源沙门氏菌的血清型和基因型

目的:研究399株分离于广东(130株)、广西(105株)、福建省(82株)和上海市(82株)零售鸡肉中沙门氏菌的血清型和基因型,为确保食品安全提供数据支撑。方法:使用沙门氏菌诊断血清,WHO推荐的玻片凝集法鉴定沙门氏菌的血清型;使用美国疾病预防控制中心推荐的脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法检测沙门氏菌的 DNA 酶切图谱,BioNumerics 软件分析电泳结果,确定沙门氏菌的基因型。结果:从399株沙门氏菌中共检出47种血清型,以肠炎沙门氏菌(17.04%)、鼠伤寒沙门氏菌(16.04%)、印第安纳沙门氏菌(14.04%)、汤卜逊沙门氏菌(9.02%)、阿贡纳沙门氏菌(7.52%)和罗森沙门氏菌(3.76%)较常见,检出率较低的血清型有德尔卑沙门氏菌、婴儿沙门氏菌、杜塞尔多夫沙门氏菌、爱丁堡沙门氏菌、贝尔维沙门氏菌、肯塔基沙门氏菌、波尔沙门氏菌等。分离于广东省的菌株以鼠伤寒沙门氏菌(20.00%)最为常见,广西省(18.10%)和福建省(29.27%)均以肠炎沙门氏菌最为常见,上海市以印第安纳沙门氏菌最为流行(26.83%)。使用XbaⅠ酶切、PFGE分型后,源自同一省市、不同样品、同一血清型的沙门氏菌显示出较高的同源性,源自不同省、市、不同样品、血清型相同的菌株分型后显示出基因型多样性。结论:广东、广西、福建省和上海市零售鸡肉中沙门氏菌的血清型具有多样性,PFGE基因型表现为地域间的多样性和同一地区的较高同源性。     

天津地区鸡源沙门氏菌的基因分型研究

目的 研究并评估几种分子分型方法对亲缘关系相近沙门氏菌的分辨能力。方法 针对2015-2016年从天津市大型市场和超市中分离的106株沙门氏菌及其全基因组测序结果,分析了沙门氏菌的血清型、STs,并通过PFGE、cgMLST以及一种基于59个基因的分型方法对沙门氏菌进行分子分型研究。结果 106株沙门氏菌共分为8种血清型(肠炎沙门氏菌(n=94)、印第安纳沙门氏菌(n=4)、肯塔基沙门氏菌(n=2)、哈达尔沙门氏菌(n=2)、汤普森沙门氏菌(n=1)、鼠伤寒沙门氏菌(n=1)、田纳西沙门氏菌(n=1)和阿哥纳沙门氏菌(n=1))和8个ST型;PFGE分型方法将沙门氏菌分为7个集群,cgMLST分为8个集群,59个基因的分型方法将亲缘关系相近的分离株分为9个集群。结论 血清型分析表明肠炎沙门氏菌为这些沙门氏菌中的优势亚型,并与ST型结果一致;PFGE显示7个集群中包含一个优势集群,多为肠炎亚型;cgMLST具有最高的分辨率,将106株沙门氏菌分为8个集群;建立的基于59个基因的分子分型方法将沙门氏菌分为9个集群,分型结果表明此方法可以满足对亲缘关系相近沙门氏菌的分型研究。     

2011~2018年红河州食品中沙门氏菌血清分型及脉冲场凝胶电泳分型研究

目的 了解红河州2011~2018年食品中沙门氏菌血清型分布及分子分型特征, 初步建立沙门氏菌脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)分型的数据库。方法 使用全自动微生物鉴定系统对收集的49株沙门氏菌进行鉴定, 依据沙门氏菌White-Kauffmann-LeMinor抗原表用沙门氏菌属诊断血清确定血清型, 参照国家食源性疾病分子溯源网络(TraNet)的沙门氏菌PFGE分子分型法进行基因分型, 用Bionumerics(7.6)软件聚类分析。结果 49株沙门氏菌属于B、C、D、E和G群5个群25个血清型; 伦敦沙门氏菌是主要血清型, 占24.5%(12/49); 49株沙门氏菌分成了42个PFGE带型(P001-P042), 其中P038型包含8株菌, 其余各型分别只包含1株菌。结论 红河州食品中沙门氏菌具有不同血清型及PFGE型别, 相同血清型菌株PFGE型别聚集成簇。     

四重荧光定量PCR法鉴定肠炎、鼠伤寒以及伤寒沙门氏菌

目的建立四重荧光定量PCR体系鉴定肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌以及伤寒沙门氏菌。方法针对沙门氏菌属特异性ompC基因、肠炎沙门氏菌sdf基因、鼠伤寒沙门氏菌STM4495和伤寒沙门氏菌STY2021序列设计引物和TaqMan探针,建立多重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究。结果 28株不同血清型的沙门氏菌均扩增出ompC基因,其他13株非沙门氏菌均未出现ompC的非特异性扩增。sdf、STM4495、STY2021的探针和引物分别特异性扩增出肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌以及伤寒沙门氏菌,而25株其他血清型沙门氏菌以及13株非沙门氏菌均未见扩增曲线。敏感性试验显示,该体系的最低检测限分别为48 pg/mL(ompC)、560 pg/mL(sdf)、530 pg/mL(STM4495)、35 pg/mL(STY2021)。结论该方法特异好、灵敏高、能够快速检测沙门氏菌并鉴定肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌以及伤寒沙门氏菌。     

安宁市食品从业人员携带沙门氏菌血清型分布特征及耐药性分析

目的 了解云南省安宁市2016~2018年食品从业人员门氏菌的血清型分布状况与耐药性情况。 方法 选取2016~2018年食品从业人员肛拭标本60533份进行血清学分型鉴定试验和药物敏感性试验。 结果 共检出沙门菌186株, 总检出率为0.307%。沙门菌经生化和血清学鉴定分43个血清型, 其中最常见的血清型依次为鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和伦敦沙门氏菌。在13种抗生素中, 对11种抗生素产生不同程度的耐药性。结论 食品从业人员携带的沙门菌种类多, 血清型呈多样性的趋势, 且耐药形势严峻, 需加强从业人员的健康体检管理。     

温州市食品中沙门菌污染状况及特征分析

目的了解温州市食品中沙门菌的污染状况,分析分离的沙门菌血清型分布、耐药性及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型特征。方法依据GB 4789.4—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》进行菌株分离鉴定及血清学分型,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,PFGE法进行分子分型。结果 6类食品2 039份样品中,37份样品检出沙门菌,检出率为1.8%,其中生禽肉和生畜肉检出率较高,分别为6.9%(20/290)和3.4%(10/290)。37株沙门菌分属16种血清型,居前三位分别为鼠伤寒沙门菌、德尔卑沙门菌和肠炎沙门菌。81.1%(30/37)的菌株对17种抗生素产生不同程度的耐药,呈现24种耐药谱,多重耐药率为56.8%(21/37)。PFGE图谱分为31种PFGE带型,呈多态性。结论沙门菌在温州市食品中存在一定的污染率,耐药情况形式严峻,PFGE图谱的聚集性与沙门菌的血清型有一定的联系,与耐药谱之间的关联性并不明确。     

2015—2020年宜宾市肉类食品沙门菌血清型及分子分型研究

目的 研究宜宾市肉类食品中沙门菌分离株的血清型和分子分型特征,分析沙门菌污染的危险因素。方法 收集2015—2020年宜宾市辖区(县)肉类食品沙门菌分离株29株,进行血清型鉴定和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型分析,并就地域、物种来源和售卖方式对沙门菌血清群检出构成比的影响进行多因素Logistic回归分析。结果 29株沙门菌分离株共检出14种血清型(分属4个群),主要优势血清型为鼠伤寒沙门菌、吉韦沙门菌和肠炎沙门菌。聚类分析显示PFGE分子分型为18种带型。肠炎沙门菌带型相似度100%,来自同一传染链;吉韦沙门菌有2种带型,鼠伤寒沙门菌有4种带型,相似度较差;多因素Logistic分析显示,影响D群沙门菌检出的主要危险因素为地域分布(OR=1.053,P<0.05);影响E群沙门菌检出的主要危险因素为物种来源(OR=3.887,P<0.05)和地域分布(OR=1.227,P<0.05)。结论 监管部门应从家禽养殖地地域来源和肉类物种来源两个方面加强宜宾市肉类食品安全监督。     

沙门氏菌血清型快速PCR鉴定方法的建立

通过传统玻片凝集试验对78株沙门氏菌进行血清型检测,结果将这些沙门氏菌分成以鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌为主的21种血清型,其中沙门氏菌SJTUF10023证实为自凝菌,无法鉴定血清型。利用MLST可以较精确地预测、区分不同血清型菌株,聚类的各个分支与血清型基本呈对应关系(96.2%,75/78),其中有3株沙门氏菌(1株阿贡纳、1株阿伯丁和1株斯坦利)聚类结果与血清型不一致。根据O抗原(rfb基因簇)、H1抗原(fli C基因)和H_2抗原(flj B基因)分别设计引物进行PCR反应,并与测序相结合,对78株沙门氏菌进行血清型测定,结果仅1株伤寒沙门氏菌的H_2抗原出现假阳性结果,准确度达98.7%(77/78),且编号为SJTUF10023的自凝菌被鉴定为鼠伤寒沙门氏菌,说明该方法能够准确、快速检测沙门氏菌血清型,有望在沙门氏菌血清型鉴定中成为替代传统血清分型的方法。     

沙门氏菌噬菌体在动物和食品中的生物防控研究进展

随着沙门氏菌耐药性持续发展、耐药菌不断出现以及食物中毒事件频发,噬菌体已成为一种新型防控耐药性沙门氏菌的生物杀菌剂.噬菌体的作用机制与抗生素完全不同,在控制耐药性沙门氏菌感染与污染方面具有良好的应用前景,尤其在治疗超级耐药沙门氏菌方面有着极大的优势,但是由于沙门氏菌血清型众多,需要开展针对不同血清型的沙门氏菌特异性噬菌...     

2015~2019云南省伤寒、副伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳分子分型及耐药研究

目的 了解云南省伤寒、副伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分子分型及耐药状况,为它们的防控提供科学依据。方法 参照中国细菌性传染病分子分型实验室监测网络PulsenetChina的沙门菌PFGE分子分型方法进行分子分型。分析耐药板最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值,根据美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standard Institute,CLSI)的相应标准得出敏感、中介、耐药(S、I、R)结果。结果 36株伤寒、副伤寒沙门菌呈22种PFGE带型,有5组优势带型,组之间菌株有明显的时间、地域同源性。对萘啶酸(NAL)耐药率最高,为55.55%,对庆大霉素(GEN)最敏感,敏感率100%。此外有16.68%菌株对3类以上抗菌素耐药。结论 云南省伤寒、副伤寒沙门菌分子分型结果提示5-8月存在甲型副伤寒局部爆发,应加强甲型副伤寒疾病的监测。云南省伤寒及副伤寒对萘啶酸(NAL)耐药率最高,对庆大霉素(GEN)最敏感, 菌株存在多重耐药性。     

北京市顺义区腹泻病例分离沙门氏菌耐药特征分析

目的 对北京市顺义区腹泻病例分离的沙门氏菌进行耐药特征分析。方法 2个收集2013—2018年北京市顺义区腹泻病例粪便标本,对标本进行沙门氏菌分离培养、生化鉴定和血清分型,使用微量肉汤法对分离的沙门氏菌菌株进行26种抗菌药物的敏感性检测,开展耐药率、非敏感率、多重耐药率和耐药谱分析。结果 腹泻病例沙门氏菌检出率为5.44%(113/2 076),包含26种血清型,其中肠炎沙门氏菌构成比为32.46%(37/114),鼠伤寒沙门氏菌构成比为27.19%(31/114)。沙门氏菌多重耐药率为44.74%(51/114),分布62种耐药谱;肠炎沙门氏菌多重耐药率为67.57%(25/37),分布29种耐药谱。鼠伤寒沙门氏菌多重耐药率为45.16%(14/31),分布20种耐药谱。结论 北京市顺义区分离自腹泻病例的沙门氏菌耐药状况较为严重,耐药谱分布呈现多样性。应持续开展沙门氏菌病原学监测,为沙门菌感染的科学防控和治疗提供依据。     

实时荧光PCR法检测食品中亚利桑那沙门氏菌

沙门氏菌（Salmonella）是食品检测过程中最常见的致病菌之一,亚利桑那沙门氏菌（Salmonella arizonae）又是沙门氏菌中比 较难鉴定的亚种。该实验通过实时荧光聚合酶链式反应（PCR）方法快速准确的检测亚利桑那沙门氏菌和其他沙门氏菌。根据GenBank 公布的亚利桑那沙门氏菌和其他沙门氏菌gud D基因序列, 分别设计引物和Taqman探针。 使用10株不同血清型的沙门氏菌标准菌 株、88株沙门氏菌分离株和29株食品中常见食源性致病菌进行实时荧光PCR特异性实验。结果显示,该实验所设计的引物探针特异 性非常好。 实时荧光PCR灵敏性试验结果表明,检测灵敏度可达到1～10 CFU/mL的添加浓度。 经模拟污染样品验证,所建立的实时 荧光PCR方法与传统方法的检测结果相一致,具有检测周期短、操作简便的优势。     

Fate of Salmonella Tennessee in peanut butter at 4 and 22 degrees C

ABSTRACT:  This study was undertaken to determine survival characteristics of inocula of a 3-strain mixture of Salmonella Tennessee in 5 commercial brands of peanut butter (A, B, C, D, and E). Inoculated peanut butter was stored at 4 (refrigerator temperature) and 22 °C (room temperature) for up to 14 d. After 1, 3, 5, 7, and 14 d, surviving cells, including injured cells, were enumerated on appropriate selective agar, including use of the agar overlay method. Populations in samples inoculated with 10^6–7 CFU/g and stored for 14 d at 4 and 22 °C decreased by 0.15 to 0.65 and 0.34 to 1.29 log CFU/g, respectively, depending on the formulation. Peanut butter A showed a significantly lower number of S . Tennessee cells when stored at 22 °C for 14 d, compared to 4 °C ( P < 0.05). However, there was no significant difference between the levels of S. Tennessee at 4 and 22 °C in products B, C, D, and E ( P > 0.05).     

云南省肠炎沙门菌及德尔卑沙门菌脉冲场凝胶电泳分子分型及耐药性研究

目的 了解云南省沙门菌患者中分离最多的肠炎沙门菌及食品中分离最多的德尔卑沙门菌脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis, PFGE)分子分型及耐药状况。方法 参照中国细菌性传染病分子分型实验室监测网络Pulse Net China的沙门菌PFGE分子分型方法进行分子分型。分析耐药板最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)值, 根据美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standard Institute, CLSI)的相应标准获得S、I、R结果。结果 56株肠炎沙门菌呈11种PFGE带型, 有4种优势带型, 对氨苄舒的耐药率最高, 为57.14%, 对亚胺培南最敏感。27株德尔卑沙门菌呈25种PFGE带型, 对复合磺胺的耐药率最高, 为64.29%, 对亚胺培南最敏感。结论 肠炎沙门菌分子分型有明显的优势带型, 本地区肠炎沙门菌对氨苄舒的耐药率最高。德尔卑沙门菌分子分型呈多样分布, 复方磺胺是本地区德尔脾沙门菌最耐药抗生素。2种沙门菌都对亚胺培南最敏感。     

沙门氏菌传统血清凝集分型和分子血清分型试剂盒方法比较

目的 验证沙门氏菌血清分型试剂盒的适用性, 考核本实验室传统沙门氏菌血清分型技术, 扩充沙门氏菌的分型方法, 寻找更有效、更快捷的沙门氏菌分型方法。方法 保存的样品菌株库中随意挑选33株沙门氏菌和6株标准菌株, 首先确证为沙门氏菌, 然后分别采用传统的玻片血清凝集方法和分子血清分型试剂盒对其进行分型, 最后采用16S rRNA系统发育树对试验菌株进行聚类分析。结果 2种分型手段的匹配率高达94.9%, 其中YP 281 Salmonella havana和YP 639 Salmonella liverpool没有匹配到, 这2株菌在试剂盒数据库中不存在, 但本实验利用传统血清分型手段可以对这2株菌进行准确分型, 其中YP 281是本实验室对GB 4789.4-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》表B.1外成功分型的沙门氏菌。结论 本实验室传统血清凝集分型技术合格。沙门分子血清分型试剂盒具有较好的适用性, 能更快速、更方便对沙门氏菌进行分型。     

Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) for the Rapid and Sensitive Detection of Salmonella Typhimurium from Pork

ABSTRACT: Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) is a novel molecular detection method that is more rapid and simpler than PCR. Products can be detected by turbidity using one temperature without the need for expensive PCR equipment. Our objective was to sensitively detect Salmonella Typhimurium from pork products within 1 d using the LAMP assay. Pork chop and pork sausage samples (25 g) were inoculated with high (10⁸ to 10⁶ CFU) and low (10⁵ to 10⁰ CFU) inocula of S. Typhimurium. Serial dilutions in phosphate buffered saline were plated on XLT4 agar either immediately or after selective preenrichment in tetrathionate broth (225 mL) for 10-h at 37 °C. Nucleic acid was extracted using the TRIzol^® method from 1-mL samples. The LAMP assay using 6 specific invA gene primers and Bst DNA polymerase reaction mix was carried out at 62 °C for 90 min in a waterbath. Turbid products were detected visually and by agarose gel electrophoresis. Improved Salmonella detection at 10² CFU/25 g for both pork chop and sausage was obtained after 10-h enrichment and 10⁶ CFU/25 g without enrichment for both products. This assay can detect Salmonella from pork within 1 d, significantly faster than traditional methods that take >5 d. This method shows tremendous potential for routine diagnostics and monitoring of Salmonella by the pork industry. Practical Application: The novel loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay is a rapid, specific, and sensitive method that has potential application for routine diagnostics of Salmonella from pork products. The isothermal method does not require expensive equipment such as a PCR thermocylcer but only a simple waterbath for amplification within 90 min. Detection is even simpler by visual eye or turbidimeters that are less expensive than fluorescent spectrophotometers or real-time PCR machines. All these advantages make it a practical approach for routine use by processing industries to rapidly detect Salmonella in their environment and to implement appropriate control strategies. To improve detection sensitivities, preenrichment followed by selective enrichment may be necessary. Even so, the entire assay can be completed at the most within two 8-h working shifts.