吸附交联法和包埋法固定化混合酶研究

对从自然界分离得到的Microbacterium sp．OU01进行发酵,制得粗酶液（壳聚糖酶和伊肛氨基葡萄糖苷酶混合液）,采用吸附交联法及包埋法对其进行固定,研究其固定化的最优条件和固定化酶的酶学性质。结果表明,游离混合酶液的最佳PH为5．6,最适反应温度为50℃。吸附交联法固定化酶的最佳条件为：戊二醛体积分数5．0％,加酶量15mL（49．51U／mL）,固定化时间6h。该条件下制得的固定化酶的最适pH为4．5,最适反应温度为60℃。包埋法固定化酶的最佳条件为：海藻酸钠质量浓度10g／L,CaCl。质量浓度15g／L,加酶量为1mL（50．35U／mL）／5mL质量浓度10g／L海藻酸钠,固定化时间20min。该条件下制得的固定化酶的最适PH为5．0,最适反应温度为50℃。固定化酶酶解壳聚糖所得产物中含D-氨基葡萄糖,说明粗酶液中的壳聚糖酶和外切-β-D-氨基葡萄糖苷酶被同时固定。通过对游离酶和固定化酶稳定性的研究,表明吸附交联固定化酶更适于工业化应用生产D-氨基葡萄糖。     

离子交换树脂固定果糖转移酶

超声波破碎黑曲霉细胞提取游离果糖转移酶，然后选择D201大孔阴离子交换树脂为裁体，通过先吸附后交联的方法固定果糖转移酶，优化的固定化条件：加酶量为每克湿树脂400U，吸附pH值为5．O～5．5，吸附温度为30℃，吸附时间为8h，交联剂戊二醛(终)质量浓度为0．01～0．05g／dL，交联时间为8h，交联温度为1～4℃．固定化酶活最高回收率为30．2％。     

壳聚糖固定胃蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂将胃蛋白酶固定化．戊二醛质量分数为5％，载体处理温度为30℃，胃蛋白酶与壳聚糖用量比为O．Ol，pH=4．O，固定12h以上，酶活性回收率达65％～70％。固定化酶最适温度为70℃，比游离酶提高了20℃；固定化酶最适pH值为3．O，而游离酶为2．O；固定化酶的表观米氏常数Km=3．32g／L，而游离酶Km=1．5lg／L。固定化酶重复使用3次时的酶活性回收率分别为73．9％，58．4％。42．6％。2个多月重复使用，活力未见明显下降。     

磁性壳聚糖微球固定化漆酶催化肾上腺素

用交联法制备磁性壳聚糖微球，对微球的形貌和结构进行表征和分析，结果表明：微球呈规则的球形，分散比较均匀，粒径在3μm左右。磁性粒子矫顽力为210．6A／m，接近超顺磁性。以戊二醛为交联剂，将漆酶固定在此磁性壳聚糖微球表面，分别研究了该固定化漆酶和游离漆酶催化肾上腺素的性质。结果表明：固定化漆酶催化肾上腺素的最适温度为55℃，比游离酶升高了10℃，最佳pH值为5．2，游离酶为5．0。在60℃下保温300min后，固定化酶的催化活性仍保持为原来的75％以上，而在相同条件下游离酶仅保持为原来的10％。固定化酶连续催化肾上腺素10次以后．催化活性仍保持为原来的85％。     

假单胞菌H3壳聚糖酶的固定化研究

分别采用纳米CaCO3吸附法、聚丙烯酰胺(PAG)包埋交联法和DEAE-22纤维素交联法固定化假单胞菌H3壳聚糖酶,结果表明:以DEAE-22纤维素为载体、戊二醛为交联剂的固定化方法较优,酶活保留率达91.4%;此外,还确定了DEAE-22纤维素交联法的固定化条件为:DEAE-22纤维素载体0.5 g,3.5%戊二醛交联剂20 mL,给酶量为15 mg,固定化温度为4℃,固定化时间为12h;壳聚糖酶在经固定化后,最适温度为50℃,最适pH为4.5,并表现出比游离酶更高的热稳定性,固定化酶的米氏常数Km值为14.29 g/L;将该固定化酶重复使用12次,固定化酶的活力降低到75%,具有较好的操作稳定性.     

胃蛋白酶固定化条件的研究

采用壳聚糖吸附和戊二醛交联的方法，将胃蛋白酶固定于壳聚糖上．探讨了温度、交联剂用量、固定化时间以及pH值等条件对固定化效果的影响，并对固定化酶的理化性质进行了研究．确定了胃蛋白酶固定化的最佳条件：pH值3．5；戊二醛交联时间10h；戊二醛含量5％；对酪蛋白的操作半衰期为50d以上．     

壳聚糖微球固定化脂肪酶催化性质研究

以壳聚糖微球为载体制备固定化脂肪酶制剂并研究其催化性质.首先,制备壳聚糖微球,用2%醋酸溶液溶解壳聚糖,以液体石蜡为分散剂制成壳聚糖微球;然后,通过戊二醛交联制备固定化脂肪酶制剂,并研究其催化性质.结果表明:壳聚糖微球在2%戊二醛浓度下常温下交联9 h,脂肪酶固载率可达60%.与游离脂肪酶相比,壳聚糖微球固定化脂肪酶的最适底物、最适p H值及最适温度分别转变为4-硝基苯基辛酸酯,p H 8.57及50℃.固定化脂肪酶重复实验6次后仍保留有47.7%的催化活性,置于60℃下4 h酶活保留73%,其金属离子K+和Mg2+最适浓度分别为0.15 mol/L,0.10 mol/L.     

CoTAPc-Fe3O4纳米复合固定化漆酶研究

制备了CoTAPc—Fe3O4磁性纳米复合粒子，以戊二醛为交联剂，利用该纳米复合粒子对漆酶进行了固定，研究了戊二醛浓度、固定化温度、pH值、BSA浓度、给酶量等因素对固定化漆酶活力的影响，确定了以此载体固定漆酶的最佳条件：戊二醛浓度为5％，固定化温度为0℃，pH值为7，BSA浓度为2．5mg／mL、给酶量为2mL。固定化漆酶具有较好的操作稳定性和贮存稳定性。     

交联壳聚糖固定α-淀粉酶的研究

选择了具有生物活性的壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂来固定化α-淀粉酶,探索了固定化的最佳条件.结果表明:最佳固载量为每克壳聚糖.50mgα-淀粉酶,交联剂戊二醛浓度为15%,处理温度均为室温,处理时间以5h为宜,固定化pH值以7较好.交联壳聚糖用于固定α-淀粉酶行之有效,且效率较高,其酶活回收率可达82.2%.     

细菌BK2产壳聚糖酶的发酵条件及壳寡糖的制备

优化了菌株BK2发酵产壳聚糖酶的条件：葡萄糖20g／L，壳聚糖0．3g／L，硝酸铵15g／L．接种量1，5％（10^7 cell／mL），发酵起始pH6．0．发酵温度30℃．培养时间48h．BK2发酵液中的壳聚糖酶活力可达到1．29U／mL．用酶液降解壳聚糖，分离提取粗产品，采用薄板层析法进行组分分析．分析结果表明．壳聚糖已被降解成含有不同分子质量的壳寡糖混合物，     

重组人生长激素在毕赤酵母中的表达研究

通过单因素分析和正交实验法优化高密度发酵培养基和诱导条件,根据优化结果指导发酵罐发酵．得到改良BSM培养基的最佳配比为甘油30g／L、酵母粉14g／L、K2SO4 13g／L、MgSO4·7H2O11g／L、CaSO4 0．3g／L、PTM14．4mL、0．1mol／L磷酸盐缓冲液（pH=6．5）;得到摇瓶培养最佳诱导条件为种龄24h,诱导时间30h,甲醇浓度2％,pH6．3～6．9．瑞士Bioengineering公司L1523型发酵罐发酵结果显示,细胞光密度（OD600）达到294,rHGH表达量最高达到0．54g／L．     

海藻酸钠固定化胰蛋白酶的研究

研究了以海藻酸钠为载体固定化胰蛋白酶的条件,并考察了固定化酶的最适pH、最适温度、储存时间及反复利用稳定性。结果表明:最适固定化条件为CaC12质量分数为3.0%,海藻酸钠质量分数为3.0%,酶液量与海藻酸钠体积比为1∶2,固定化时间为3.0 h;固定化胰蛋白酶最适pH为9.0,最适温度为60℃,较游离酶分别提高1.0和10℃;4℃下保存30 d,活性保留96%以上;连续反应6次,活性保留52%。     

玉米麸皮中阿魏酰低聚糖的制备

以玉米麸皮为原料,利用纤维素酶辅助木聚糖酶制备阿魏酰低聚糖,通过正交试验对制备条件进行了优化,得到最佳制备条件：反应温度60℃,pH值5．0,反应时间36h,纤维素酶质量浓度8g／L,木聚糖酶质量浓度6g／L,底物质量浓度165g／L,在此条件下,产物中阿魏酰低聚糖的浓度达到2．127mmol／L．     

啤酒酵母RNA提取条件的优化及其磁性固定化

通过浓盐法对啤酒酵母RNA进行提取,以磁性壳聚糖微球为载体,戊二醛交联法对RNA进行磁性固定化。通过比较反应体系中的无机磷和总磷的质量分数,对RNA的提取条件和固定化条件进行优化。结果表明,RNA提取温度对提取率的影响最为显著;在提取时间4h、提取温度100℃、氯化钠质量分数为10%和酵母质量分数为8%的最优条件下,RNA提取率达到6.13%。戊二醛交联法磁性固定化RNA的最佳条件为:反应时间4h,温度40℃;RNA最佳添加量为30mL(质量浓度2mg/mL)。     

胰蛋白酶水解鲜猪皮的条件选择

为克服酸碱法水解猪皮胶原对氨基酸的破坏,拟利用胰蛋白酶水解猪皮胶原来获得更多的氨基酸.研究发现,随着胰蛋白酶含量增加,水解度增加,当pH 7～8时,胰蛋白酶对猪皮水解的水解度达到最大值;水解反应的开始反应速度较大,30分钟后反应速度降低.胰蛋白酶水解猪皮的最佳条件为:pH 7.5,水解温度48℃,酶与猪皮比40mg/g,底物浓度25%,水解时间2h.在此条件下,猪皮的水解度可达16%.     

Fe3O4磁性纳米粒子固定化胰蛋白酶

以Fe3O4@mSiO2@nSiO2介孔材料为载体,γ-氨丙基三乙氧基硅烷接枝,戊二醛交联,研究胰蛋白酶的固定化及其在蛋白酶解中的应用。对蛋白酶固定化条件的优化研究表明,φ（戊二醛）=1.875%、给酶量为0.3 mg/mL、反应时间为4 h时酶的固定化效率可达50.5%,且保持77.3%相同含量酶的活性。对牛血清蛋白的酶解实验表明,在微波辅助作用下,磁性微球材料固定化酶可快速高效地酶解牛血清蛋白,酶解液在λ=280 nm处有较明显的吸收信号变化,HPLC分析表明酶解液中多肽片段吸收值变化明显,同时有新的多肽片段生成。     

食用菌菌糠对重金属离子的吸附性

利用廉价生物吸附剂去除污水中Pb2＋和Zn2＋的技术,研究了食用菌菌糠的吸附特性,调查污水pH、重金属初始浓度、吸附剂用量、吸附时间和温度对其吸附性能的影响.结果表明,在食用菌菌糠吸附剂用量分别为16g/L和12g/L,pH值分别为5和6,初始重金属质量浓度为20mg/L,吸附时间为3h,25℃条件下,达到了最大吸附量,对Pb2＋和Zn2＋的去除率分别达到92.79%和88.96%,处理后的Pb2＋和Zn2＋质量浓度分别为1.442mg/L和2.208mg/L,接近污水综合排放标准（GB8978—1996）中的排放质量浓度1mg/L和2mg/L.食用菌菌糠对Pb2＋和Zn2＋的吸附等温线符合Fleundlich模式.     

二水合硫酸钙晶须制备研究

盐酸溶解碳酸钙并加入适量的表面活性剂。再加入稀硫酸在常温下生成二水合硫酸钙晶须,反应后滤液为盐酸溶液,再次加入碳酸钙后可循环使用。考察反应系统中表面活性剂浓度、Ca2＋浓度、硫酸等对晶须形貌的影响。结果表明,最佳工艺条件为Ca2＋浓度0．3mol／L,十二烷基磷酸酯钾质量浓度5．0g／L,壬基酚聚环氧乙烯醚质量浓度2．5g／L,硫酸浓度0．28mol/L。晶须长2-200μm,长径比30-100。     

正交设计碱提小米多糖

研究了小米多糖的碱提工艺,考察了碱液浓度、提取温度、液固比、提取时间4个因素对小米多糖收率的影响,并用正交设计进行了4因素3水平优化,得到最优组合。结果表明,影响多糖收率的强弱顺序依次是：液固比〉提取温度〉碱浓度〉提取时间;碱提小米多糖的最佳条件组合为碱浓度0.8mol/L、提取温度80.0℃、液料比20.0∶1、提取时间1.0h,多糖收率为47.27mg/g。     

低品位磷矿制取磷酸试验研究

随着世界磷矿资源日渐枯竭,低品位磷矿的开发利用显得非常迫切.本研究采用硝酸分解低品位磷矿,以磷矿中P2O5的浸取率为指标,考察了硝酸的质量分数、酸比、反应温度、反应时间的影响,从而确定了硝酸分解低品位磷矿的最佳工艺条件为：硝酸质量分数29%、酸比8、反应温度60℃、反应时间45 min;在此最佳条件下,对磷矿P2O5的浸取率为98.1%;而且通过扫描电镜观察了不同反应时间下磷矿颗粒表面的形貌特征的变化.实验结果为两步法分解低品位磷矿制取磷酸并联产硫酸钙晶须的研究和可行性论证提供了基础数据.