3种β-兴奋剂化学发光酶免疫试剂盒分析检测方法的评价

选取3种市售β-兴奋剂化学发光酶免疫分析检测试剂盒,从线性关系、灵敏度、选择性、检出限、准确度、重复性及变异性等方面进行实验,并经农业部1025号公告—18—2008中高效液相色谱—串联质谱法验证比较,初步建立了一套化学发光酶免疫分析检测试剂盒质量评价方法。结果表明:沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺3种试剂盒在测定范围内线性关系良好,灵敏度分别为0.7、1.8、1.0 ng/mL,检出限分别为0.2、0.1、0.2 ng/mL,猪肝、猪肉和牛肉的回收率在81.9%~115.2%之间,重复性变异系数为3.3%~9.7%,批间变异系数为9.9%~16.5%,交叉反应率均符合产品说明书要求,可以用于猪肝、猪肉、牛肉样品中沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺的残留检测。     

盐酸克伦特罗时间分辨荧光免疫检测方法的建立

采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速、高灵敏度的盐酸克伦特罗(CLB)全自动检测方法。以CLB-OVA包被96微孔板作为固相抗原,与游离CLB竞争限量的以Eu3+标记的抗CLB单克隆抗体,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测CLB。该方法的灵敏度为0.03ng/mL,批内和批间变异系数分别为2.0%和8.9%,平均回收率为105.8%,与沙丁胺醇、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0.96%和0.77%,结果表明,用TRFIA法检测CLB,灵敏度高、特异性强、稳定性好,具有良好的应用前景。     

竞争化学发光酶免疫测定技术检测盐酸克伦特罗

目的建立一种检测盐酸克伦特罗(clenbuterol,CLB)的竞争化学发光酶免疫测定法(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)。方法基于CLB的竞争酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),通过优化反应温度、反应时间和缓冲体系p H建立了CLB的CLEIA测定法。用CLB小鼠中毒模型评价CLEIA检测法对实际样本的检测效果,并将CLEIA与LC-MS法的相关性进行了比较。结果 CLEIA法测定CLB的检测范围为0.0433~42.5363μg/L,检测限为0.0178μg/L,变异系数小于10%,回收率为95%~110%,对莱克多巴胺和沙丁胺醇仅有极低的交叉反应性。所建立的CLEIA法与LC-MS法在检测实际样本时具有较高的相关性。结论本研究建立的CLEIA法操作简便,检测限、灵敏度、准确度、特异性均符合检测要求,可用于实际样品的检测。     

己烯雌酚残留检测ELISA试剂盒的研制及应用

在实验室前期制备的己烯雌酚多克隆抗体基础上建立间接竞争ELISA检测方法,研制出己烯雌酚残留ELISA快速检测试剂盒,并对其性能参数进行测定。结果表明,所选用的抗体对己烯雌酚亲和力高,除了与双烯雌酚、己烷雌酚的交叉反应率分别为6.83%和2.56%外,与其他结构类似物或功能类似物交叉反应率均小于0.01%;己烯雌酚残留检测的标准曲线为y=-28.71x+59.37,R2为0.9895,线性范围为0.08~8.17ng/mL,检测限IC10为0.05ng/mL,灵敏度IC50为1.09ng/mL,样品的加标回收率为80.04%~107.91%,平均批内和批间变异系数分别为6.41%和8.83%;与HPLC测定方法比对具有较高的相符性,相关系数R2为0.9882;该试剂盒在4℃下至少可保存6个月,可用于批量猪肉、鸡肉、鱼肉、饲料等样品中己烯雌酚残留的检测。     

液相色谱串联质谱法快速测定猪肉中克伦特罗残留量

建立快速测定猪肉中克伦特罗残留量的液相色谱串联质谱分析方法。猪肉样品在碱化的条件下用乙酸乙酯提取,提取后用甲酸溶液进行反萃取,萃取液经正已烷脱脂后直接进行液相色谱串联质谱(liquid chromatography with tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分析。采用Acquity BEH C_(18)色谱柱分离,用0.1%甲酸溶液-甲醇作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI~+)模式电离,多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式检测,同位素稀释内标法定量。克伦特罗在0.05~10.0μg/L范围内建立的曲线相关系数大于0.999;方法检测限为0.10μg/kg,定量限为0.25μg/kg。克伦特罗在猪肉中的添加量为0.25、0.50、0.75μg/kg时,平均回收率在95.9%~101.5%之间,批内相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)在3.3%~4.6%之间,批间RSD在4.1%~5.1%之间。该方法能满足猪肉中克伦特罗残留量快速分析的要求。     

胶体金免疫层析法定量检测猪肉中克伦特罗

建立了基于T/C比值的胶体金免疫层析法快速定量检测猪肉中克伦特罗残留的新方法。胶体金免疫层析试纸条的定量检测线性范围为0.1～1.5 ng/g,检测猪肉中克伦特罗残留的最低检测灵敏度为0.19 ng/g。比较了5种猪肉组织样本中克伦特罗的简便提取方法,其中采用0.02 mol/L,含2.8%NaCl的HCl溶液抽提猪肉样品2次的提取方案,克伦特罗的平均回收率达到76.7%,变异系数为7.4%。实际样本加标回收实验显示,加标量为0.5、1.0、2.0及3.0 ng/g时,胶体金试纸条检测回收率分别为(60.4±12.8)%,(70.24±4.2)%,(75.9±4.9)%,(71.1±5.0)%。与传统ELISA方法比对,结果显示2种方法具有较好的相关性(R2=0.9136)。以上实验结果证实,基于T/C比值法的胶体金免疫层析试纸条可用于猪肉组织样品中克伦特罗的快速及定量检测。     

出口肉及制品中盐酸克伦特罗的ELISA检测方法的建立

介绍了酶联免疫吸附法测定出口肉及制品中的盐酸克伦特罗的方法。利用盐酸克伦特罗试剂盒对出口肉及制品中残留的盐酸克伦特罗用酶标仪进行测定分析,结果显示,盐酸克伦特罗的交叉反应为100%,猪肉罐头和牛肉中的检测限(LOD)为0.026(μg/kg)和0.028(μg/kg),样品的平均回收率在83.6%～91.3%之间,相对标准偏差为3.5%～5.6%,经HPLC确证假阳性率≤2.0%。表明酶联免疫分析定量法可快速、准确实现对食品中盐酸克伦特罗残留量的快速筛选。     

直接竞争酶联免疫分析方法检测猪肉中的沙丁胺醇

建立了一种用于检测沙丁胺醇的直接竞争酶联免疫分析(ELISA)方法,方法灵敏度(IC50)为0.80μg/L,检测限(IC15)为0.06μg/L,检测的线性范围0.06～20.00μg/L。与克伦特罗的交叉反应率为100%,与特布他林的交叉反应率为10.5%,与其他结构类似物并无明显的交叉反应,因此可以采用本实验建立的直接竞争酶联免疫方法同时测定食品中的沙丁胺醇和克伦特罗。本实验的样品处理方法简便,猪肉样品中的检测限为0.6μg/kg,添加三个浓度的样品,其添加回收率均在85%～100%之间,RSD值小于5.51%。     

酶联免疫法检测猪肉中呋喃唑酮代谢物残留

通过检测猪肉中呋喃唑酮代谢物的残留以评价试剂盒的性能,采用酶联免疫法对猪肉中的呋喃唑酮代谢物残留量进行测定。结果表明:该方法的线性检测范围为0.025～2.025μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本添加回收率为78.2%～100.3%,变异系数为4.7%～10.3%,与呋喃唑酮的交叉反应率为16.3%,与其他药物的交叉反应率均小于1%,且对实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法基本一致。该法灵敏准确、重复性好、特异性高,适用于猪肉中呋喃唑酮代谢物残留的检测。     

三聚氰胺ELISA检测试剂盒评价研究

选取一种市售三聚氰胺ELISA检测试剂盒,从灵敏度、特异性、准确度、可重复性、检出限、耐变性、批间变异等方面进行了技术评价,结果表明该试剂盒在测试范围内线性回归良好,相关系数R2为0.9864,与三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺、头孢曲松钠、土霉素的交叉反应率均低于0.1%,液态奶和乳粉的基体交叉反应率分别为89.09%和110.86%,液态奶和乳粉的平均回收率分别为102.4%和72.2%,液态奶和乳粉的检测限分别为7.93、20.77μg/L,可以满足国家相关限量标准检测要求。耐变性的变异系数为18%,液态奶和乳粉的批间变异系数分别在11.71%~16.13%和9.13%~13.26%。该试剂盒有较好的准确性、特异性与重复性,耐变性与批间变异均在可接受范围内,可用于液态奶、乳粉样品中的三聚氰胺残留检测。