无抗性选择标记的植酸酶基因转化DNA的构建

构建了无抗性选择标记植酸酶基因的转化片段DNAphyAⅡ 。两侧设置了高等植物基因组DNA保守序列CAATbox,TATAbox和polyA的DNA片段 (DNAphyAⅡ ,5’ CAATbox TATAbox CaMV3 5S phyAⅡ GUS Nos Tem polyA 3’) ,为提高转化率奠定了分子基础 ,此外DNAphyAⅡ 中植酸酶蛋白编码基因phyAⅡ前后的启动子和终止子序列 ,确保了phyAⅡ会得以正确表达     

植酸酶植物基因工程载体的构建

通过PCR方法从植酸酶基因克隆载体PUC18／phyAI中扩增出Aspergillus.ficuumAS3.324植酸酶（phyA）基因,经酶切连接后克隆到植物中间载体pBI121,获得含AS3.324植酸酶基因的质粒pBI121/phyAⅡ。用冻融法将pBI121/phyAⅡ导入表达载体根 农杆菌LBA4404中。经过抗生素筛选、PCR检测,证明得到了正确表达载体－－LBA4404／pBI121/phyAⅡ,此表达载体可用于植酸酶基因转化烟草的研究。     

酶切方式对工程菌植酸酶性质的影响

将无花果曲霉（A.ficuum)AS3.324的植酸酶基因（phyA)，克隆到pPIC9K中，得到重组载体pPIC9K/phyA Ⅱ，分别用限制性内切酶Dra I和Bpul 102 I线性化，用电穿孔转化方法导入宿主巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris)GS115中，构建了两种植酸酶工程酵母。本文比较了这两种工程菌表达的植酸酶的酶学性质。研究结果表明，两者的酶学性质无显著差异。     

酶切方式对工程菌植酸酶性质的影响

将无花果曲霉 (A .ficuum)AS3 .3 2 4的植酸酶基因 (phyA) ,克隆到pPIC9K中 ,得到重组载体pPIC9K/phyAⅡ ,分别用限制性内切酶DraⅠ和Bpu1 1 0 2Ⅰ线性化 ,用电穿孔转化方法导入宿主巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS1 1 5 中 ,构建了两种植酸酶工程酵母。本文比较了这两种工程菌表达的植酸酶的酶学性质。研究结果表明 ,两者的酶学性质无显著差异     

植酸酶毕赤酵母基因工程菌高密度发酵

高密度发酵是提高发酵产品、产量的一个非常有效的手段。对一株巴斯德毕赤酵母的植酸酶工程菌Gs115 /phyAⅡ ,采用酵母高密度发酵方法 ,葡萄糖的补加采用逐渐增加的方式 ,控制溶氧和还原糖浓度 ,获得细胞密度为 80g/L。甲醇诱导后 ,最高植酸酶活力达到 4 .1× 10 4U/mL。     

植酸酶毕赤酵母基因工程菌高密度发酵

高密度发酵是提高发酵产品、产量的一个非常有效的手段。对一株巴斯德毕赤酵母的植酸酶工程菌Gs115 /phyAⅡ ,采用酵母高密度发酵方法 ,葡萄糖的补加采用逐渐增加的方式 ,控制溶氧和还原糖浓度 ,获得细胞密度为 80g/L。甲醇诱导后 ,最高植酸酶活力达到 4 .1× 10 4U/mL。     

基于植物p53保守序列构建RNAi的DNA片段方法

构建p53基因RNA干涉DNA片段的目的,是将其应用于植物悬浮培养中的细胞周期调节．依据拟南芥p53基因与其他高等植物具有高度保守区域的特点,合成其两个区域的核苷酸片段（Ⅰ和Ⅱ）及其相应的反向片段（Ⅰ＇和Ⅱ＇）,并在Ⅱ和Ⅱ＇端部分别引入内含子两个端部核苷酸序列．在相互连接后进行PCR选择扩增,其产物再与克隆裁体连接并经过蓝白斑筛选获得重组DNA;在电泳和核苷酸测序鉴定后表明,最终得到了Ⅰ-5＇-内含子-Ⅱ＇-Ⅱ-内含子-3＇-Ⅰ＇序列的重组DNA片段该片段两端含多克隆位点,通过插入植物的表达载体进入细胞基因组,在细胞中其转录产物将形成发夹结构,经胞内酶切后可以形成短的双链RNA片段,将具有干涉p53基因表达的功能     

两种鱼类Hoxa-11基因片段克隆及5''端序列分析

为了分析脊椎动物从鳍到肢转变过程中基因的系统进化，采用PCR法克隆了斑马鱼和矛尾鱼的Hoxa-11基因片段，测序并进行序列分析。结果显示同源异型盒所在的外显子Ⅱ区和剪接位点是高度保守的，外显子I区又可分为四个亚区；中度保守区、可变区和两个高度保守区。从鱼到四足动物，Hoxa-11基因的主要变化是可变区的长度梯增且出现富含丙氨酸的区域。此外，在内含子中也发现了两个高度保守的DNA序列，其长度分别为35bp和16bp。     

瑞氏木霉木聚糖酶Ⅰ基因的克隆、序列分析及在酵母中的表达

本实验从构建于大肠杆菌DH5α的瑞氏木霉cDNA文库中用PCR法体外扩增到木聚糖酶I（XynI)的DNA片段，然后连接至穿梭载体pAJ401,转化酵母H158,以刚果红染色法筛选阳性重组子并测序，当将其mRNA5‘端非翻译区的79个碱基删除后，木聚糖酶的表达水平显著提高，有可能此基因的调节区位于5‘端非翻译区内，而且可能被酵母的相关基因表达因子所识别。     

论DNA鉴定的概率和逻辑理论依据

在界定DNA、基因、概率等概念涵义的基础上，阐明DNA鉴定的理论依据是遗传学原理和逻辑推理，同时指出，DNA鉴定结论概率的高低主要是由做鉴定时所采用逻辑推理的种类不同所决定的，从而使人们对DNA鉴定有较全面的认识并懂得如何去评价某一个案DNA鉴定的结论。