贻贝多糖对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢的影响

为了探究贻贝多糖对胰岛素抵抗（Insulin resistance,IR）HepG2细胞糖代谢影响的潜在分子机制，以贻贝多糖（Mussel polysaccharides,MP）为研究材料，采用CCK8法检测HepG2细胞的增殖情况，同时筛选不同浓度胰岛素构建细胞胰岛素抵抗模型，检测MP对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响。结果显示：当胰岛素浓度处于10-6 mol/L时，HepG2细胞的葡萄糖含量最高，对葡萄糖的消耗能力最弱，是构建胰岛素抵抗模型的最佳浓度。此外，MP(100～1000μg/mL)对HepG2细胞无毒性，能促进细胞增殖。与IR-HepG2细胞相比，200、400、600μg/mL的MP能明显提升糖原含量，分别为17.20%、22.95%和32.50%。同时，高剂量MP能显著上调PI3K和GLUT2的相对基因表达量，并能降低GSK-3β的表达量。为后续MP降血糖提供实验基础，同时有助于促进MP的开发利用。     

菊粉复配灵芝多糖对HepG2细胞胰岛素抵抗的调节作用

目的:研究菊粉复配灵芝多糖对HepG2细胞胰岛素抵抗的调节作用。方法:采用高糖高脂培养HepG2细胞,建立胰岛素抵抗模型(IR-HepG2细胞模型)后,用菊粉、灵芝多糖及其复配物继续培养细胞24h,测定细胞葡萄糖消耗量、糖原合成量、细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活力。结果:与模型组相比,菊粉和灵芝多糖均可显著提高IR-HepG2细胞的葡萄糖消耗量、糖原合成量、SOD和GSH-Px活力,并呈现剂量依赖性。将菊粉和不同浓度的灵芝多糖复配之后,与单一的菊粉组相比,复配高剂量组的葡萄糖消耗量、糖原含量、SOD和GSH-Px活力均极显著升高(P 0.01)。结论:菊粉复配灵芝多糖可显著促进IR-HepG2细胞葡萄糖的利用,增加糖原合成,提高SOD和GSH-Px酶活力,改善糖代谢紊乱。     

知母水溶性小分子提取物对胰岛素抵抗HepG2细胞体外糖代谢的影响

目的 研究知母水溶性小分子提取物的制备及其对胰岛素抵抗HepG2 (IR-HepG2)细胞糖代谢的作用.方法 采用水提取,膜分离方式制备知母提取物;采用高浓度胰岛素持续作用于HepG2细胞24 h建立胰岛素抵抗模型,加入知母水溶性小分子提取物保温24 h后,测定对照组和加药组细胞内葡萄糖消耗量、肝糖原含量及己糖激酶(hexokinase,HK)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)的活性.结果 知母水溶性小分子提取物明显增加细胞的葡萄糖消耗、提高IR-HepG2细胞HK、PK活性,增加肝糖原含量.结论 知母水溶性小分子提取物可明显改善胰岛素抵抗状态下HepG2细胞对葡萄糖的利用,提高肝HK、PK活性,促进葡萄糖进入肝细胞,增加肝糖原合成,促进糖代谢.     

沙棘多糖对胰岛素抵抗HepG2细胞氧化应激的保护作用与机制

目的：研究沙棘多糖对胰岛素抵抗HepG2细胞氧化应激的保护作用与机制。方法：采用水提醇沉法对沙棘多糖进行提取,并用苯酚硫酸法测定多糖含量。CCK-8法测定不同浓度沙棘多糖对HepG2细胞活力的影响,用含5×10-8mol/L胰岛素的培养基诱导HepG2细胞24 h,建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型。采用试剂盒测定葡萄糖消耗量以及糖原相对含量,并测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,Western Blot法测定氧化应激相关蛋白的表达。结果：沙棘多糖含量为88.46%,在沙棘多糖质量浓度达到800 μg/mL时,细胞活力出现显著下降(P＜0.05),后续安全剂量选择400 μg/mL。经沙棘多糖处理后的葡萄糖消耗量以及糖原相对含量均显著提高(P＜0.05),SOD水平达到(79.31±2.16) U/mg,MDA水平达到(2.15±0.12) nmol/mg。沙棘多糖处理后显著提高Nrf2和HO-1的表达水平(P＜0.05),显著降低Keap1的表达水平(P＜0.05)。结论：沙棘多糖能够改善胰岛素抵抗细胞模型异常糖代谢情况和氧化应激水平,并通过调控Nrf2/Keap1/HO-1通路起到改善胰岛素抵抗的作用。     

甜玉米芯多糖对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢功能的影响

目的：探讨甜玉米芯多糖（sweet corncob polysaccharide，SCP）组分SCP-80-I对胰岛素抵抗HepG2（insulin resistant HepG2，IR-HepG2）细胞糖代谢功能的影响。方法：确立IR-HepG2细胞模型建立的最佳条件，并由此建立IR-HepG2细胞模型；分别以50、100、200、400 μg/mL剂量的SCP-80-I孵育细胞24 h，评价其对细胞葡萄糖消耗的影响，同时利用噻唑蓝法评价其细胞毒性；检测氧化应激标志物超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）及活性氧（reactive oxygen species，ROS）的水平，测定细胞内糖原积累水平及糖酵解关键限速酶己糖激酶（hexokinase，HK）、丙酮酸激酶（pyruvate kinase，PK）的活力。结果：确立以1×10－6 mol/L胰岛素处理24 h作为诱导IR-HepG2细胞形成的最佳条件，并成功建立IR-HepG2细胞模型；在孵育实验中，SCP-80-I能极显著增加IR-HepG2细胞的葡萄糖摄取量（P＜0.01），细胞活力随SCP-80-I质量浓度的增加呈先上升后下降的趋势；200 μg/mL SCP-80-I处理组与模型对照组相比，胞内MDA含量极显著下降，SOD活力极显著提高，ROS水平极显著下降（P＜0.01）；胞内糖原含量极显著增加（P＜0.01），HK与PK活力极显著增加（P＜0.01）。结论：推测SCP-80-I的降血糖功效与其缓解氧化应激所造成的肝脏细胞损伤，改善胰岛素抵抗肝脏细胞的糖代谢功能有关。     

灵芝肽诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的细胞学观察

目的：研究灵芝肽(Ganoderma lucidum peptides,GLP)在体外对人肝癌HepG2细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法：HepG2细胞用含不同浓度GLP培养基培养12、24、36、48、60h,GLP分为5个浓度梯度,分别为0.25、0.5、1、2、4mg/ml,采用噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察细胞生长抑制作用,用可见光显微镜、荧光显微镜观察细胞形态学变化、激光共聚焦(laser scanning confocal microscopy,LSCM)观察细胞内钙离子浓度的变化。结果：MTT法显示灵芝肽能显著抑制人肝癌HepG2细胞的生长,且存在浓度及时间依赖性。镜下可见细胞出现典型凋亡细胞形态学改变：细胞染色质浓缩,细胞体积缩小、核固缩深染、细胞膜出泡、凋亡小体形成;LSCM观察到胞内钙离子浓度明显增加。结论：0.25～4.0mg/ml的GLP体外可显著抑制人肝癌HepG2细胞增殖,存在量效关系和时效关系,能诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并且提示细胞内钙离子浓度的升高可能是细胞凋亡的机制之一。     

苦瓜皂苷对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响

采用高浓度的胰岛素诱导HepG2细胞出现葡萄糖代谢异常,从胰岛素的添加量和作用时间角度探讨建立胰岛素抵抗细胞(HepG2/IR)模型的最佳条件;分别设立阴性对照组、胰岛素抵抗模型组、盐酸吡格列酮阳性对照组以及苦瓜皂苷干预组(100、300、500、700μg/mL),利用葡萄糖测定试剂盒检测各组葡萄糖消耗量,同时MTT法评价苦瓜皂苷对HepG2/IR细胞活性的影响。结果表明,30μg/mL胰岛素诱导处理HepG2细胞36h是产生胰岛素抵抗的最适条件。与HepG2/IR模型组相比,300μg/mL的苦瓜皂苷不仅可以显著改善HepG2/IR细胞的葡萄糖消耗量,还能提高其细胞活性。     

藻蓝色素对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢的影响

为探究藻蓝色素(phycocyanin, PC)体外改善胰岛素抵抗的作用机制,采用胰岛素体外诱导方式,分别设置5个胰岛素浓度梯度(10-9、10-8、10-7、10-6 、10-5μmol/L)以及6个时间梯度(0、12、24、36、48、72h)处理HepG2细胞,以葡萄糖消耗量和细胞存活率为指标,确定建立胰岛素抵抗型HepG2细胞模型的较佳作用浓度及时间。检测PC干预后HepG2细胞葡萄糖消耗量、糖原合成和存活率,利用RT-qPCR和Western blot探讨PC可能的作用机制。实验结果表明:胰岛素抵抗型HepG2细胞模型最佳诱导时间和浓度为36h、10-7μmol/L;不同浓度的PC可以提升胰岛素抵抗型HepG2细胞的葡萄糖消耗量;PC能够上调正常HepG2和胰岛素抵抗型HepG2细胞中IRS1、IRS2、GLUT1、GLUT4基因的转录水平,并且增加细胞中IRS1、AMPK、GSK-3β以及AKT蛋白的磷酸化水平。研究结果表明,PC能够显著提升胰岛素抵抗型HepG2细胞的葡萄糖消耗量,通过激活胰岛素调节相关的IRS1/AKT信号通路,增加AMPK的磷酸化和葡萄糖转运蛋白GLUT1、GLUT4基因表达,加速HepG2细胞对葡萄糖的利用和改善细胞胰岛素抵抗。研究结果显示,PC在预防或改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗方面有潜在作用。     

灵芝多糖提取工艺优化及抗氧化活性的研究

目的研究灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides,GLP)的最优提取工艺,并研究其抗氧化活性。方法通过单因素和响应面法优化提取工艺参数,获得GLP;将GLP进行乙醇分级得到GLP30、GLP60和GLP80 3个组分;采用还原力、DPPH自由基清除试验和羟自由基清除试验评估GLP及3个组分的抗氧化活性。结果灵芝多糖最优提取条件为:温度86°C,液料比50:1(mL/g),时间142min,实际提取得率为1.71%;抗氧化活性试验结果表明:GLP及GLP30、GLP60和GLP80均具有一定的抗氧化活性,均呈现浓度-活性依赖性,其中GLP80还原力最强,GLP清除DPPH自由基和羟自由基的能力最强。结论响应面法有效优化了GLP的提取,灵芝多糖具有较好的抗氧化活性,值得进一步研究及开发利用。     

低共熔溶剂提取灵芝多糖的工艺优化及抗氧化活性研究

采用5种低共熔溶剂(deep eutectic solvents,DESs)提取灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP),以灵芝多糖得率为指标筛选出最适合的低共熔溶剂是DESs-5即氯化胆碱-尿素(choline chloride-Urea,ChCl-Urea),然后利用响应...     

桦褐孔菌纯化多糖体外降血糖活性研究

采用水提醇沉法得到桦褐孔菌发酵粗多糖,将粗多糖过DEAE-52纤维素柱分离纯化得到两种多糖(EIOP1、EIOP2),本文以α-葡萄糖苷酶抑制活性、正常HepG2细胞及胰岛素抵抗HepG2细胞的单位细胞葡萄糖消耗量为主要指标,探究桦褐孔菌两种纯化多糖不同浓度(10、20、40、80、160和320 μg/mL)的降血糖活性,其中α-葡萄糖苷酶抑制活性以阿卡波糖作为阳性对照,葡萄糖消耗实验以二甲双胍作为阳性对照。结果表明,EIOP1、EIOP2的α-葡萄糖苷酶抑制活性均高于阳性对照组阿卡波糖与粗多糖,IC₅₀值分别为39.18、29.87 μg/mL。EIOP1在浓度为80 μg/mL时,对HepG2细胞的葡萄糖消耗量极显著高于对照组,促进效果最好,比对照组提高了30.62%(P<0.01);EIOP2在浓度在40 μg/mL时,葡萄糖消耗量极显著高于对照组,比对照提高了75.99%(P<0.01);对胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗实验发现EIOP1在浓度为40 μg/mL时,促进效果最好,比胰岛素抵抗组提高了30.00%,EIOP2在浓度为80 μg/mL时,促进效果最好,比胰岛素抵抗组提高了90.49%,高于Met组(P<0.01)。因此,桦褐孔菌纯化多糖对正常HepG2细胞和胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗均具有促进作用,对α-葡萄糖苷酶的抑制活性显著高于粗多糖。     

油橄榄叶不同提取部位对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响

目的:评价油橄榄叶不同提取部位的降糖活性。方法:采用高浓度胰岛素(5.8×10-3mg/mL)诱导培养HepG2细胞24h,建立胰岛素抵抗细胞模型。建模后,培养液中加入各提取部位共同孵育,采用葡萄糖试剂盒法检测24h后培养液中的葡萄糖含量,探讨其对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响,并用MTT法检测细胞的增殖水平。结果:油橄榄叶不同提取部位均能增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量,部位B、E对模型细胞的增殖起促进作用,部位A、C、D、F对模型细胞的增殖具有抑制作用;结论:经MTT校正后,部位D改善胰岛素抵抗效果最显著。     

食用菌提取物对胰岛素抵抗细胞体外糖代谢的影响

以高胰岛素诱导的HepG2细胞和地塞米松诱导的3T3-L1脂肪细胞两种胰岛素抵抗细胞模型,分别对9种食用菌(桑黄、灵芝、香菇、杏鲍菇、鸡腿菇、灰树花、猴头、姬松茸和蛹虫草)醇提物、桑黄和灵芝的4种有机溶剂(正丁醇、乙酸乙酯、氯仿和石油醚)萃取物的体外降糖活性进行了研究。HepG2模型研究结果表明,9种食用菌醇提物中灵芝和桑黄醇提物促进细胞葡萄糖消耗效果最好,并且两者高浓度组的葡萄糖消耗量均好于阳性对照组;桑黄3种有机溶剂萃取相(正丁醇相、乙酸乙酯相和石油醚相)和灵芝4种有机溶剂萃取相促进细胞葡萄糖消耗效果较好,均好于阳性对照组。3T3-L1细胞模型结果表明,9种食用菌醇提物中灵芝和桑黄醇提物的促进葡萄糖消耗效果最好,均好于阳性对照组;灵芝及桑黄4种有机溶剂萃取相中,乙酸乙酯萃取相的葡萄糖消耗效果较好。     

菊粉复配灵芝多糖对2型糖尿病大鼠的降血糖作用

为探究菊粉复配灵芝多糖降血糖作用,采用高糖高脂联合链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠建立2型糖尿病模型,记录菊粉复配灵芝多糖干预期间大鼠每周体重(BW)和血糖(FBG)变化,5周后检测其血清中胰岛素(FINS)、糖化血清蛋白(GSP)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)及肝糖原、肌糖原等指标,并进行肝脏的HE染色观察。结果表明,和模型组相比,菊粉复配灵芝多糖高剂量组(5 g/kg·bw菊粉+0.4 g/kg·bw灵芝多糖)大鼠的FBG、FINS、GSP、ALT和AST等指标极显著降低(P<0.01),糖原含量极显著增加(P<0.01),且和单一菊粉组相比存在显著差异(P<0.05);HE染色观察发现菊粉复配灵芝多糖可有效缓解2型糖尿病大鼠的肝脏损伤。综上所述,菊粉复配灵芝多糖对2型糖尿病大鼠有明显的降血糖作用,该作用机制可能与改善机体胰岛素抵抗、修复肝脏损伤和促进糖原合成有关。     

青钱柳活性成分对IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量及α-葡萄糖苷酶活性的影响

研究青钱柳多糖（CPP）和青钱柳黄酮（CPF）对胰岛素抵抗的人源肝癌细胞（IR-HepG2）葡萄糖消耗量及α-葡萄糖苷酶活性影响。用高浓度胰岛素诱导培养HepG2细胞,建立IR-HepG2细胞模型,将IR-HepG2细胞分为模型组、CPP高、中、低剂量组、CPF高、中、低剂量组和二甲双胍组,各组以相应药物孵育24 h,采用葡萄糖试剂盒测定细胞葡萄糖消耗量（ΔGC）,MTT法测定单位细胞葡萄糖消耗量（ΔGC/OD）;以阿卡波糖为阳性对照,比较不同浓度梯度的CPP与CPF对α-葡萄糖苷酶活性影响。与模型组比较,阴性对照组、二甲双胍组、CPP组与CPF组细胞?驻GC与ΔGC/OD显著性升高;不同浓度的CPP与CPF对α-葡萄糖苷酶均有抑制作用。提示青钱柳活性提取物降血糖功效与其提高细胞葡萄糖摄取量,抑制α-葡萄糖苷酶活性有关。     

荔枝核提取物及其阳离子树脂分离物体外降血糖作用

研究荔枝核乙醇提取物(LSE)和其阳离子树脂分离物(FCE)体外降血糖作用。采用高糖和高胰岛素所致的两种HepG2细胞模型,在模型培养中添加不同浓度的LSE与FCE,以葡萄糖试剂盒测定,MTT法等进行对HepG2细胞葡萄糖消耗作用的研究。结果表明:在高糖环境下,LSE和FCE均能促进HepG2细胞的葡萄糖消耗,而FCE的促进作用显著高于相近浓度的LSE,提示离子交换树脂分离物贡献了荔枝核提取物的降糖作用;此外,FCE还可与低剂量胰岛素协同增加细胞的葡萄糖消耗。在胰岛素抵抗模型中,FCE能显著降低胰岛素抵抗,增加细胞的葡萄糖消耗。荔枝核提取物和其阳离子树脂分离物具有体外降血糖作用。     

蓝莓花色苷提取物干预人肝癌细胞对葡萄糖消耗的作用研究

探究蓝莓花色苷提取物对胰岛素抵抗的人肝癌细胞HepG2细胞对葡萄糖消耗的干预作用。利用MTT实验筛选得到3个品种蓝莓花色苷提取物的最适作用浓度;筛选胰岛素和葡萄糖诱导HepG2细胞产生胰岛素抵抗的最佳浓度;以MTT矫正细胞数量,用葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基中葡萄糖的变化来研究蓝莓花色苷提取物的对细胞胰岛素抵抗的干预作用。北陆花色苷提取物在低于200μg/m L的浓度时,灿烂和园蓝花色苷提取物在低于100μg/m L的浓度时,对HepG2细胞活力无明显影响;以诱导剂胰岛素的浓度为1×10-8mol/L,孵育24h作为诱导条件,其模型效果较佳、对细胞活力改变小且稳定性好;3个品种的蓝莓花色苷提取物在7.8125～31.25μg/m L浓度时,可不同程度促进正常HepG2细胞和胰岛素抵抗的HepG2细胞对葡萄糖的消耗量,且与剂量成正比关系,在31.25μg/m L达到促进最大值,与模型组比较均有极显著差异,糖消耗量分别增加了60%、65%和88%。三个品种的蓝莓花色苷提取物均能较好的预防和改善胰岛素抵抗HepG2细胞对葡萄糖的利用。     

柠檬皮多酚成分分析及其对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢的影响

目的:探究柠檬皮多酚（Limon Peel Polyphenols,LPP）的组成成分,并研究其对胰岛素抵抗（Insulin Resistance,IR）的HepG2细胞糖代谢的影响。方法:采用高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱法（HPLC-QTOF-MS）分析LPP组成,利用HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型,用LPP作用于IR-HepG2细胞,通过测定细胞葡萄糖消耗量初步探究LPP对糖代谢的影响,再通过测定糖原含量和己糖激酶（Hexokinase,HK）、丙酮酸激酶（Pyruvate Kinase,PK）、磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶（Phosphoenol Pyruvate Carboxykinase,PEPCK）、葡萄糖六磷酸酶（Glucose-6-Phosphatase,G6Pase）的活性,探究LPP调节细胞糖代谢的作用途径。结果:经过HPLC-QTOF-MS分析出12种物质,主要为黄酮及其苷类成分;在糖代谢研究方面,与模型组相比浓度为0.1~2 mg/mL柠檬皮多酚可显著提高细胞葡萄糖消耗量（P<0.05）,且当浓度为0.5 mg/mL时其提高IR-HepG2细胞糖原含量和HK、PK活性,降低PEPCK和G6Pase活性的能力最接近于二甲双胍阳性对照。结论:柠檬皮多酚可以缓解IR-HepG2细胞的胰岛素抵抗状态,并能通过促进糖原合成、提高糖酵解关键酶活性、降低糖异生酶活力的方式调节糖代谢水平,为后续的体内研究提供了数据支持,并为未来开发功能性产品提供了理论依据。     

南方红豆杉多糖的含量测定及体外降血糖活性研究

采用水提醇沉法提取南方红豆杉多糖,硫酸-苯酚法测定多糖含量;采用HepG2细胞和α-葡萄糖苷酶作为体外受体模型,研究南方红豆杉多糖的降血糖效果.结果表明:南方红豆杉药材中多糖的含量为1.75％,无水葡萄糖在1.507～13.563 μg/mL内呈良好线性关系,平均回收率97.54％,RSD为1.60％;以二甲双胍和阿卡波糖作为阳性药,南方红豆杉粗多糖对胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗具有促进作用,对α-葡萄糖苷酶具有较好的抑制活性,粗多糖抑制活性(IC50 38.61 mg/L)明显高于阳性对照药(IC50 1081.41mg/L),且呈现剂量依赖性.     

不同破壁方法对灵芝孢子粗多糖抗氧化活性的影响

采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除法、羟自由基清除法、2,2’-联氮基双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐自由基（2,2’-azinobis(3-ehtylbenzothiazolin-6-sulfnicacid)diammonium salt,ABTS＋·）清除法和铁氰化钾法以及酵母细胞氧化损伤保护模型,分别对未破壁灵芝孢子（unbroken Ganoderma lucidum spore,UGS）、机械法破壁灵芝孢子（mechanically broken Ganoderma lucidum spore,MGS）、生物法与机械法复合破壁的灵芝孢子（biologically and mechanically broken Ganoderma lucidum spore,BGS）提取粗多糖进行体外抗氧化活性评价。结果表明,3 种处理方法的灵芝孢子粗多糖表现出不同的抗氧化活性,且抗氧化活性与多糖质量浓度呈一定效量关系,多糖质量浓度越高,抗氧化活性越强。BGS所得粗多糖对DPPH自由基、羟自由基、ABTS＋?的清除能力以及还原力在3 种处理方法中均为最强。多糖质量浓度为5.0 mg/mL时,对3 种自由基的清除率分别为84.6%、91.0%、99.9%,还原力为1.09;BGS所得粗多糖对紫外损伤酵母细胞保护能力也相对较强。表明BGS粗多糖具有较高的抗氧化活性。