刺参多糖的提取、分离纯化及活性研究进展

海参是一种珍贵的海珍品,是“八珍”之一,刺参被誉为“海参之冠”,富含多糖等活性物质,具有极高的食用和药用价值。海参多糖具有抗肿瘤、抗氧化、降血压、抗疲劳等多种活性。海参多糖的提取、分离、纯化和活性成为当前国内外的研究热点。文章总结了刺参多糖的提取方法、分离纯化方法和生物活性,并对刺参多糖的前景进行了展望,旨在为刺参多糖的进一步开发利用提供指导。     

大连刺参多糖的提取纯化及体外抗氧化活性研究

以大连刺参为原料,多糖提取率为指标,通过单因素实验和响应面试验法优化木瓜蛋白酶提取刺参多糖的酶解工艺条件;以蛋白脱除率为指标,通过单因素实验和正交试验法,优化D-葡萄糖酸-δ-内酯(GDL)对刺参多糖的脱蛋白工艺;并检测经过提取纯化后的刺参多糖的体外抗氧化活性。结果表明,刺参多糖的最佳提取工艺为:加酶量1.60%、pH7.30、温度54.0 ℃,在此条件下刺参多糖提取率为5.34%;最佳脱蛋白工艺条件为:反应温度60 ℃、反应时间2 h、GDL溶液(w/w,20%)加入量2.5 mL,蛋白脱除率为95.8%。提取纯化的刺参多糖清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子和ABTS自由基的IC₅₀分别为0.3、4.5、3.9、0.85 mg/mL。刺参多糖浓度为3.0 mg/mL时,ABTS+自由基的清除能力最强,达到90.4%,且与阳性对照V_C的清除能力相差不大。说明刺参多糖具有较好的体外抗氧化活性。     

仿刺参纵肌多糖的纯化及体外抗氧化

目的：以仿刺参纵肌多糖为对象,探讨其纯化方法,并对其抗氧化活性进行研究。方法：仿刺参纵肌经木瓜蛋白酶水解、三氯乙酸去蛋白、Sephacryl S-400凝胶柱层析,得到一种多糖,进行红外光谱、分子质量和硫酸基含量测定,并进行硫酸酯化及体外抗氧化实验。结果：红外光谱初步显示所得纯化多糖具有酸性糖胺聚糖结构,分子质量约为676kD,硫酸基含量为10.98%,取代度为0.285;硫酸酯化后硫酸基含量为17.43%,取代度为0.360;纯化多糖及酯化多糖都具有抗氧化活性。结论：仿刺参纵肌多糖随着硫酸基含量及取代度的提高,抗氧化活性逐渐增强。     

仿刺参卵多糖的分离纯化及体外抗肿瘤活性

目的：探究仿刺参卵多糖的结构及体外抗肿瘤活性。方法：通过酶解醇沉获得仿刺参卵粗多糖（polysaccharides from Apostichopus japonicus spawn,SPS）;通过色谱柱纯化后进行理化性质分析;采用噻唑蓝法研究卵多糖对HeLa、HGC-27细胞的体外增殖抑制作用。结果：获得3 种不同多糖组分SPS-1、SPS-2、SPS-3,对干预的肿瘤细胞均有显著抑制作用。SPS-1抑制作用最强,对HeLa及HGC-27细胞的最高抑制率分别为98.04%、99.4%。结论：从仿刺参卵中分离出3 种多糖组分,均表现出一定的抑制肿瘤细胞增殖活性。     

刺参多糖的提取纯化及其组分的分析

目的研究圈养刺参多糖的组成。方法以大连圈养刺参为研究对象,采用酶解醇沉法提取刺参的粗多糖,并通过DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂进行进一步纯化,并分别采用高效液相色谱法和红外光谱法对多糖的单糖组成及其含量和多糖的结构进行分析。结果提取的刺参粗多糖含量为62.30%,蛋白质含量为14.27%,纯度较好,经纯化后得到的三个组分峰(峰1、峰2和峰3),除甘露糖外,组分峰2和组分峰3中各单糖含量间均存在显著性差异(P0.05),且组分峰3多糖的质量比最高,为36.45%;刺参多糖中的单糖以岩藻糖、氨基半乳糖、葡萄糖醛酸为主,除葡萄糖外,组分峰3中的其他单糖含量均高于组分峰2;组分峰3的结构较复杂。结论本文为海参多糖的开发与利用提供了技术支撑。     

响应面法优化双酶提取仿刺参卵粗多糖工艺及其抗氧化性研究

以仿刺参卵为原料提取多糖,在单因素实验的基础上,通过响应面分析优化双酶提取仿刺参卵多糖工艺,并对其体外抗氧化活性进行初步研究。结果表明:仿刺参卵多糖的最佳提取条件为复合蛋白酶与木瓜蛋白酶配比1∶2、加酶量2.78%、酶解温度60℃、酶解时间6 h,在此条件下卵多糖的预测得率为8.84‰,实际得率为8.76‰;仿刺参卵多糖的自由基清除活性呈明显的剂量依赖关系,对DPPH自由基的IC_(50)为1.71 mg/m L,是一种良好的天然抗氧化剂。     

京城海参名店锡华粤明堂海鲜食府

我国是世界上最早食用海参的国家，海参以粘多糖丰富，不含胆固醇及高蛋白、抗癌活性物质硒多糖和海参素著称，其中，刺参营养价值最高，被称为海参之王。     

超高压对刺参泡发及其品质的影响

本文以干制刺参为原料研究了超高压处理过程中,不同压力、温度及保压时间对刺参的持水力和质构的影响,并比较水发刺参和超高压处理刺参主要功能成分（胶原蛋白和海参多糖）的变化。结果表明,压力对刺参持水力的影响呈先增大后减小的趋势,压力为300MPa处理时持水力最大;随着温度的升高,持水力不断增大,但是当温度升高的一定程度时,持水力基本保持不变：另外,随着保压时间的延长,持水力先增大后减小,保压时间为10min处理刺参持水力达到最大。采用300MPa,60℃,10min处理刺参,硬度、黏附性、咀嚼性最大,此时刺参的质构最好,口感最佳。超高压处理对刺参的功能成分影响不大,但与鲜刺参相比,多糖含量和胶原蛋白的含量差异较小;与水发刺参相比,多糖和胶原蛋白含量均明显提高,说明超高压处理能够减少有效成分的损失。     

刺参多糖中糖醛酸、氨基糖和中性单糖的同步测定方法研究

建立柱前1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生高效液相色谱法(HPLC)测定刺参多糖中糖醛酸、氨基糖和中性单糖的方法。刺参多糖用2mol/L三氟乙酸水解、PMP衍生化后,用反相HPLC检测,实现了糖醛酸,氨基糖和中性单糖的良好分离和测定。测定结果表明,刺参多糖含有甘露糖、半乳糖、岩藻糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖和葡萄糖醛酸6种单糖。该方法简便快捷,灵敏度高,重现性良好。     

暗色等刺参(Isostichopus fuscus)营养成分分析

目的测定暗色等刺参的主要营养成分,评价其营养价值。方法分别采用凯氏定氮法、高温灼烧法、亚甲基蓝比色法测定海参中的粗蛋白、灰分、海参多糖含量,采用氨基酸自动分析仪测定氨基酸组成,采用电感耦合等离子体质谱法测定常量、微量无机元素。结果暗色等刺参的海参多糖含量为8.04%,蛋白质含量高达83.35%,且氨基酸组成丰富,其中甘氨酸、谷氨酸、丙氨酸含量相对较高。暗色等刺参富含人体所需的多种矿物质元素,常量元素中Ca、Mg含量较高,微量元素中Fe、Zn的含量较高。结论暗色等刺参富含蛋白质、海参多糖以及人体所需的无机元素,具有较高的食用价值和开发利用前景。     

鸸鹋蛋壳粉对应激小鼠性功能和幼龄小鼠精子活性的影响

目的:观察国产鸸鹋蛋壳粉对应激小鼠性功能及幼龄小鼠精子活性的影响.方法:以重复电刺激复制应激小鼠性行为障碍模型,观察雄性小鼠的交配能力.给正常幼龄雄性小鼠连续服药21d后检测其精子密度和精子活动率.结果:鸸鹋蛋壳粉对电刺激应激诱发的雄性小鼠性功能障碍有促进恢复作用,能增加交配次数,缩短交配潜伏时间,并能提高未成年雄性小鼠的精子活动率.结论:国产鸸鹋蛋壳粉具有增强雄性小鼠性功能,提高小鼠精子活性的作用.     

人参蛋白对小鼠的耐缺氧及抗氧化作用

目的:研究人参蛋白对小鼠耐缺氧及抗氧化能力的影响。方法:通过常压耐缺氧、亚硝酸钠中毒、急性脑缺血性缺氧三项指标评价人参蛋白对小鼠的耐缺氧作用;通过测定肝脏和血清中丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的变化,研究人参蛋白对小鼠体内抗氧化能力的影响。结果:与对照组比较人参蛋白组小鼠常压耐缺氧存活时间、亚硝酸钠中毒存活时间、急性脑缺血性缺氧张口喘气时间均延长;同时人参蛋白能降低肝脏和血清中丙二醛(MDA)的含量,并能提高肝脏和血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结论:人参蛋白对小鼠耐缺氧能力具有显著增强作用,对D-半乳糖造模小鼠有一定的抗氧化作用。     

富铁锌苜蓿芽对小鼠血液和脏器铁锌积累的研究

研究富铁锌苜蓿芽对小鼠生长发育,毒性及血液和脏器铁锌含量及吸收率。通过用试验培育出的苜蓿芽和用无机盐硫酸亚铁和硫酸锌作为对照饲喂昆明种小白鼠,考察各个剂量组对小鼠生长发育,死亡率及铁锌富集规律的影响。结果表明:苜蓿芽组比无机盐组更能促进小鼠的生长发育,随剂量的增加,小白鼠生长逐渐减慢。苜蓿芽组比无机盐组对小鼠毒害作用小,铁和锌元素吸收率高,但随着剂量的增加,吸收率降低。     

灵芝肽对实验性糖尿病小鼠的治疗作用

采用四氧嘧啶诱导小鼠造成糖尿病模型;比较了连续口服灵芝肽对造型后的糖尿病小鼠及正常小鼠血糖的影响,初步研究了灵芝肽与茶多糖合用对糖尿病小鼠的影响。造型后糖尿病小鼠血糖明显升高（p<0.01）,而造型后给予灵芝肽及灵芝肽与茶多糖的混合品均可显著降低小鼠血糖（p<0.01）,且对糖尿病小鼠的体重降低有一定的抑制作用。     

藤茶多糖的抗氧化作用研究

目的: 探讨藤茶多糖的体内外抗氧化作用。 方法: (1)测定藤茶多糖(Ampelopsis Grossedentata polysaccharide,AGP)的还原能力;(2)测定AGP在化学模拟体系、体外血清的抗活性氧能力;(3)测定AGP对小鼠肝匀浆、小鼠肝线粒体MDA生成的影响;(4)用分光光度法测定H2O2诱导小鼠红细胞溶血和Fe2+-VC诱导的肝线粒体肿胀程度来研究AGP的抗氧化效果;(5)小鼠随机分成对照与AGP组,腹腔注射AGP 150mg/kg•bw•d 12d后,测定小鼠血清抗活性氧能力及肝组织MDA含量。 结果: AGP具有一定的还原能力,一定浓度范围内具有显著的体外抗活性氧能力并能抑制小鼠肝组织及肝线粒体MDA的生成,可减少红细胞诱导溶血和肝线粒体肿胀程度,对小鼠体内肝组织MDA生成的抑制作用显著。 结论: AGP一定浓度范围内具有抗氧化作用。     

鼠李糖乳杆菌R9639对小鼠免疫功能的影响及机制研究

目的 研究鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)R9639对小鼠免疫功能的调控作用。方法 分别灌胃给予小鼠2.5、5.0、15.0 mg/kg的鼠李糖乳杆菌R9639 30 d后,测定小鼠脏器/体重比;抗体生成细胞实验、血清溶血素测定实验评价其对小鼠体液免疫功能的影响;脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应实验评价其对小鼠细胞免疫功能的影响;小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验评价其对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响;NK细胞活性测定实验评价其对小鼠NK细胞活性的影响。结果 鼠李糖乳杆菌R9639对小鼠胸腺/体重比值、脾脏/体重比值均无显著影响;与对照组相比,5.0、15.0 mg/kg的鼠李糖乳杆菌R9639组HC₅₀明显升高(P<0.05)、迟发型变态反应显著增强(P<0.05)、小鼠的碳廓清能力显著提高(P<0.05);15.0 mg/kg的鼠李糖乳杆菌R9639组小鼠NK细胞活性显著增强(P<0.05)。结论 鼠李糖乳杆菌R9639可通过增强体液免疫、细胞免疫、单核-巨噬细胞功能及NK细胞活性来增强小鼠的免疫功能。     

褥疮康对体表溃疡模型小鼠创面愈合的影响

目的 研究褥疮康对体表溃疡模型小鼠创面愈合的影响及抗炎作用.方法 制备创伤感染体表溃疡模型小鼠,按创面面积随机分为模型对照组、龙珠软膏6 g/kg组、褥疮康0.5,2,6 g/kg组,共5组,每组10只;另取10只正常小鼠作为正常对照组.将各组药物均匀涂敷于创面,厚度1 mm;模型对照组涂敷乙基纤维素;正常对照组不做处理.隔日给药1次,共5次.于术后1,5,10d测量创口面积;末次给药1h后,测量小鼠的耳廓肿胀度.结果 治疗10d后,褥疮康0.5 g/kg组、2g/kg组,小鼠创面面积显著减小;褥疮康2 g/kg组小鼠耳廓肿胀度显著低于模型组,肿胀抑制率达43.86％.结论 褥疮康具有明显的生肌抗炎作用.     

植物乳杆菌K25发酵乳降低小鼠血清胆固醇的作用研究

评价添加西藏灵菇源植物乳杆菌K25的发酵乳对饲喂高脂饲料小鼠降胆固醇的作用。结果表明:含植物乳杆菌K25的发酵乳能显著降低高脂模型小鼠血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以及动脉粥样硬化指数(AI)的水平;对血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)有显著地升高作用;对血清甘油三酯(TG)水平无显著影响;饲喂含植物乳杆菌K25发酵乳的小鼠,其粪便中乳酸杆菌数水平比对照组明显增加,而大肠杆菌数无显著差异。因此,植物乳杆菌K25发酵乳具有降低血清胆固醇功效,并能增加肠道内乳酸杆菌的数量。     

翡翠贻贝提取物对小鼠抗疲劳作用的研究

为探讨翡翠贻贝提取物对小鼠的抗疲劳作用。采用不同浓度翡翠贻贝提取物（EME）溶液作为饮用水喂养实验小鼠，然后测定小鼠负重游泳时间、血尿素氮（BUN）和肝糖原等指标。结果显示，20g/L的EME即可明显延长小鼠负重游泳时间，降低小鼠血清尿素氮，提高小鼠肝糖原水平，表明翡翠贻贝提取物对小鼠有抗疲劳作用。     

The effects of oestrogen receptors alpha and beta on testicular cell number and steroidogenesis in mice

Oestrogen plays an important role in testicular function. This study used mice null for oestrogen receptor alpha (ER alpha) or beta (ER beta) to investigate which receptor mediates the effects of oestrogen within the testis. Groups of ER alpha knockout mice (alpha ERKO) and ER beta knockout mice (beta ERKO) and wild-type littermates (n=5-8) were killed at 11 weeks post partum. One testis was fixed in Bouin's fluid for stereology and the other frozen for testosterone measurement. Trunk blood was collected for testosterone RIA. The optical disector combined with the fractionator methodology was used to estimate Leydig, Sertoli and germ cell numbers. At all times, the knockout animals were compared with their wild-type littermates. The physical disector quantified cells stained immunohistochemically for the apoptotic marker active caspase-3 and Hoechst staining was used to identify nuclear fragmentation. The mean Leydig cell volume was measured using the point sampled intercept method. The Leydig cell number per testis was significantly increased in beta ERKO mice but not in alpha ERKO mice. Plasma and testicular testosterone concentrations were increased in alpha ERKO mice but no changes were observed in beta ERKO mice. Hypertrophic Leydig cell changes were observed in alpha ERKO mice, and a decreased mean cell volume was seen in beta ERKO mice. No difference in Sertoli cell number per testis was observed in any of the groups. The spermatogonial cell number per testis was increased in beta ERKO mice. Immunohistochemistry identified increased numbers of active caspase-3-labelled germ cells per testis in alpha ERKO mice but not beta ERKO mice. Hoechst staining supported these findings. There was significant germ cell loss in alpha ERKO mice. This study suggests that ER beta may be involved in regulation of Leydig cell proliferation and testosterone production in the adult mouse testis.