乙醇胁迫提高植物乳杆菌p-8的共轭亚油酸(CLA)转化率和相关酶转录水平

该文研究了在MRS培养基中添加0.05 mg/mL LA（Linoleic acid,LA）和不同浓度的乙醇时植物乳杆菌p-8的CLA（Conjugated linoleic acid,CLA）转化率和CLA合成相关酶转录水平的差异情况。结果显示,发酵液中的三种CLA异构体转化率都是在添加0.50%乙醇时最高,其中转化cis9,trans11-CLA（t9,t11-CLA）异构体最高,为2.49%,比不添加乙醇增加2.37倍。添加不同浓度乙醇的发酵液中trans10,cis12-CLA（t10,c12-CLA）转化率都是最低的。菌体中产生的CLA非常少,但规律与发酵液的基本一致。添加0.50%乙醇菌体中t9,t11-CLA转化率最高,其转化率仅为0.05%,比不添加乙醇增加了5倍。当乙醇浓度高于0.50%时,各种不同CLA异构体的转化率却都减少。结果表明CLA是在胞液内产生后再被运转到胞外的,一定浓度范围内的乙醇胁迫通过提高CLA合成相关的酶基因转录水平,进而促进了CLA的转化,可见CLA合成相关酶基因转录水平是造成CLA转化率差异的主要原因。结果为阐明植物乳杆菌p-8产CLA的分子机制和寻找有效提高CLA生成的调控手段奠定了基础。     

产共轭亚油酸植物乳杆菌的筛选、鉴定与诱变

从传统泡菜中筛选得到1 株乳酸菌lp15 能够合成共轭亚油酸(CLA),经16S rRNA 全序列分析法和API 系统鉴定法鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。利用人工诱变方法,以lp15 为出发菌株,采用紫外线、硫酸二乙酯(DES)依次诱变处理,经进一步液体发酵复筛获得多株突变菌株,CLA合成能力较出发菌株提高了29.3%～52.2%。其中lp15-2-1 突变菌株为CLA 生成能力最高菌株,MRS 培养液中添加0.2mg/mL LA 培养48h,CLA 产量达30.13μg/mL。经气相色谱(GC)检测分析,产物中cis9, trans11- 共轭亚油酸(c9, t11-CLA)占76.5%,trans10, cis12-共轭亚油酸(t10,c12-CLA)占23.5%。     

一株植物乳杆菌转化生成共轭亚油酸的特性研究

报道了一株植物乳杆菌(L.plantarumLT2-6)发酵转化亚油酸(LA)生成共轭亚油酸(CLA)的特性研究。微氧环境有利于CLA的生成;温度为37℃、初始pH为7.0、底物LA浓度为0.075%时,菌体生长及CLA生成量较高。时间曲线结果表明,接种后8h,CLA开始生成;发酵24h时,CLA生成量达到最高(0.29g/L),LA转化率为387%。生成的CLA产物主要为cis9,trans11/trans9,cis11-CLA。     

植物乳杆菌发酵脱脂牛乳生成共轭亚油酸过程的研究

为提高发酵牛乳共轭亚油酸(CLA)含量,以植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum LT2-6)发酵添加亚油酸的脱脂牛乳,并对其生成CLA的过程进行了研究。结果表明,接种后6h CLA开始生成,24h CLA生成量达到最高,再延长发酵时间后CLA生成量缓慢下降。接种3～12h,牛乳滴定酸度快速增加,12h后滴定酸度增加缓慢。发酵18h时CLA的生成速率最大;24h时,牛乳pH降到4.0,CLA生成基本停止。牛乳发酵过程中,pH下降是影响植物乳杆菌LT2-6转化LA生成CLA的主要因素。脱脂牛乳中加入LA,经植物乳杆菌LT2-6发酵、脂肪酸萃取和甲酯化,并用气相色谱检测,结果显示:生成的CLA主要为cis9、trans11/trans9和cis11-CLA。     

共轭亚油酸的生理功能综述

共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)是一类含有共轭双键十八碳二烯酸异构体混合物的统称,以异构体c9, t11-CLA和t10, c12-CLA的研究最为集中,广泛应用于保健品、功能食品及食品添加剂等领域。本文综述了CLA的生理功能及抗病机制的国内外研究进展,通过全面了解共轭亚油酸的生理功能及抗病机制,有助于更科学、更准确地进行研究,对相关保健产品的开发具有一定的意义。     

含油酸培养基培养对重组解脂耶氏酵母全细胞催化合成反10,顺12-共轭亚油酸的影响

亚油酸异构酶(PAI)在解脂耶氏酵母细胞内成功表达,以添加外源c9,c12-亚油酸(c9,c12-LA)为底物,全细胞催化合成反10,顺12-共轭亚油酸(trans10,cis12-conjugated linoleic acid,t10,c12-CLA)。解脂耶氏酵母在分别含0.0(对照组)、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 g/L油酸的培养基中生长,收集菌体转移至磷酸盐缓液中进行全细胞催化,比较各组菌体的t10,c12-CLA产率,含5.0 g/L油酸组产物产率最高,达到1.34 g/g,是不含油酸组的1.4倍左右。通过PAI酶活分析及Western blot检测PAI表达量,结果表明,培养基中油酸含量越高,重组解脂耶氏酵母的PAI表达量越低;对比不含油酸组和含5.0 g/L油酸组全细胞催化不同时间的t10,c12-CLA产量,含5.0 g/L油酸组t10,c12-CLA产量最高点的时间比不含油酸组提前约20 h;透射电子显微镜观察2组的菌体状态,含5.0 g/L油酸组细胞壁和细胞膜间隙扩大,该变化可能增加了全细胞催化过程中底物和产物进出细胞的速率,从而提高t10,c12-CLA的转化效率。     

优化乳杆菌高产共轭亚油酸的研究进展

共轭亚油酸(CLA)是亚油酸(LA)的一组位置和空间异构体的总称,其中具有生理活性的异构体是c9,t11-CLA和t10,c12-CLA,它们具有丰富的营养价值和医药价值。在乳球菌属和链球菌属等乳酸菌、丙酸杆菌、瘤胃细菌以及其它菌属中,分离纯化得到的亚油酸异构酶,可催化LA异构化为CLA,利用酶法合成CLA可以有效弥补传统化学合成法的缺陷。本文概述了近年来国内外利用紫外、微波、等离子体诱变、离子注入等物理或化学方法诱变、改造亚油酸异构酶,优化产酶条件和酶学特性,还阐述利用定点突变、基因敲除等基因工程方法,对生产菌株进行改造和培养条件优化,提高CLA产量的相关研究,为进一步筛选出高产共轭亚油酸菌株和CLA的产业化应用提供理论依据。     

瘤胃中干酪乳杆菌的亚油酸异构酶基因的克隆与表达

以从黄牛瘤胃中分离到的一株具有将亚油酸转化为c9,t11-共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Fx为出发菌株,提取其基因组DNA,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增得到1 700 bp大小的亚油酸异构酶(linoleic acid isomerase,LAI)基因片段,将该基因片段纯化后进行TA克隆,得到重组质粒p UCm-T-LAI,将重组质粒p UCm-T-LAI和表达质粒p ET-Dsb A同时进行双酶切,连接得到重组表达载体p ET-Dsb A-LAI,经PCR鉴定和酶切后,将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21中,得到具有LAI活性的重组菌株,能将亚油酸转化为c9,t11-CLA,表明从Lactobacillus casei Fx成功克隆LAI,该研究将有助于深入了解不同瘤胃细菌特异性合成不同CLA异构体的LAI基因差异。     

乳酸菌洗涤菌体合成共轭亚油酸的研究

为了解瑞士乳杆菌L7(Lactobacillus helveticusL7)洗涤菌体生物合成共轭亚油酸(CLA)的能力,通过单因素和正交优化研究,确定了瑞士乳杆菌L7洗涤菌体合成c9,t11-CLA的最适条件:0.05mol/LPBS缓冲液(pH5.8)、1.00mg/mL亚油酸、23℃反应12h。在最适转化条件下,c9,t11-CLA产量达到0.54mg/mL。结果表明,洗涤菌体合成CLA的产量和分批发酵相近,可以继续进行瑞士乳杆菌L7固定化细胞发酵生产CLA的研究。     

亲和层析法纯化重组大肠杆菌表达的亚油酸异构酶

亚油酸异构酶能够催化亚油酸(LA)生成不同类型共轭亚油酸(CLA),共轭亚油酸是一类由不同位置和几何异构体组成的有两个共轭双键的十八碳二烯酸,具有多种生理活性,且广泛存在于多种食物中。目前报道的丙酸杆菌虽能够生产t10,c12-CLA,但含量较低。为提高CLA的产量,以痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶基因为研究对象,利用PCR扩增亚油酸异构酶基因到大肠杆菌中表达,采用亲和层析的方法分离纯化重组大肠杆菌发酵液中的亚油酸异构酶。优化的亲和层析条件:上样量10 m L,流速0.25 m L/min。酶被纯化了13.22倍,比活力达12.30 U/(mg蛋白),回收率为94.84%。经SDS-PAGE检测,该蛋白分子质量为55 ku。采用气相色谱检测该蛋白催化LA生成t10,c12-CLA,酶活为(34.775±0.07)U/m L,该酶为亚油酸异构酶。     

植物乳杆菌ZS2058生物转化产物共轭亚油酸的分析方法的研究

研究了紫外分光光度法、GC、Ag~+-HPLC和GC-MS四种分析方法对植物乳杆菌ZS2058生物转化亚油酸(LA)产生的共轭亚油酸(CLA)检测时的异同点。结果表明,这4种分析方法在对CLA进行检测时各有特色,应用范围也有不同。紫外分光光度法检测成本最低,操作最快速,但检测结果为转化产物中各种CLA异构体的总和,而GC、Ag~+-HPLC和GC-MS能将产物中的各类CLA异构体分开,可对复杂的生物转化产物进行分析。其中,GC的最大优点在于可以检测到转化底物LA,Ag~+-HPLC可将转化产物中c9,t11-CLA和t8,c10- CLA很好的分离,而GC-MS可以将各种异构体与其它副产物明确区分开来。总之,在检测生物转化法产生的CLA时,根据不同的实验需求来选择不同的检测方法,并需将这几种方法灵活的结合起来应用。     

Effects of Linoleic Acid on Conjugated Linoleic Acid Production by Planktonic Rumen Bacteria from Grain-fed Cows

Ruminal conjugated linoleic acid (CLA) production from linoleic acid (LA) was characterized in vitro. Rumen bacteria from grain‐fed cows were more active in BH than those from hay‐fed cows. Particleassociated bacteria produced more hydrogenated products leaving less CLA than the planktonic bacteria (P < 0.05). CLA production by planktonic bacteria did not always correlate to LA given; longer incubations generally decreased CLA concentration and increased c9, t11/t10, c12 ratio, especially at higher LA concentrations. The preincubated cells to LA produced more CLA than the unexposed ones and the increase was more evident with c9, t11 CLA (P < 0.05). This study provides insight into how cattle diet and LA feedings affect ruminal CLA production.     

瘤胃细菌生物合成共轭亚油酸的累积特性

为了解瘤胃细菌生物合成共轭亚油酸(CLA)的特性,通过毛细管电泳(CE)分析,发现瘤胃细菌生物合成CLA的主要异构体有c9,t11-CLA、t10,c12-CLA和t9,t11-CLA 3种。在厌氧和有氧条件下,瘤胃细菌均能合成CLA,且氧气有利于CLA的累积,随反应时间的延长,CLA的量呈现先增加后减少的变化趋势。结果表明瘤胃细菌参与了反刍动物体内CLA异构体的生物合成与代谢,瘤胃细菌生物合成CLA异构体的特异性还有待更深入的研究。     

保加利亚乳杆菌诱导产亚油酸异构酶条件研究

亚油酸异构酶可由保加利亚乳杆菌经诱导产生,可以将亚油酸(LA)转化为共轭亚油酸(CLA)。本实验对诱导保加利亚乳杆菌产亚油酸异构酶的条件进行研究,利用紫外和气质联用仪(GC-MS)检测所生成的CLA。结果表明：在培养基中添加1.5‰(V/V) LA 时所产酶的共轭亚油酸转化率最高;温度为36℃,培养36h 为较适的培养条件;单独添加0.1%(m/V)的乳糖或0.1%(m/V)的氯化钠有利于诱导产酶;在培养基中直接添加LA 的效果优于培养3至12h 后再进行添加。诱导所产酶可将LA 转化为CLA,且含有9c,11t-CLA 异构体。     

超临界法制备玉米共轭亚油酸的工艺研究

以玉米胚芽油为原料,采用超临界法制备玉米共轭亚油酸(CLA)。通过正交试验方法确定最佳工艺条件为温度80℃、油:碱为1:0.5、时间4h、油:溶剂为1:2、压力15MPa,此时异构化效果理想,经气相色谱检测CLA转化率97.65%,产品中c9,t11-CLA与t10,c12-CLA含量分别为27.72%和30.88%。     

生物合成共轭亚油酸菌种的筛选与鉴定

从传统泡菜和生牛乳中筛选出一株乳酸菌ZS2058能生物合成共轭亚油酸,经API系统鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum).该菌株在MRS培养基中将质量分数11.6%的亚油酸(1.024mg/mL)转化为共轭亚油酸,经气相色谱分析证实c9,t11 18∶2占75.9%,t10,c12 18∶2占24.1%.     

Conjugated linoleic acid conversion by six Lactobacillus plantarum strains cultured in MRS broth supplemented with sunflower oil and soymilk

Six strains of Lactobacillus plantarum, isolated from traditional dairy products of minority nationalities, were evaluated for their ability to produce conjugated linoleic acid (CLA) from free linoleic acid in vitro. All the 6 strains were found to be capable of converting linoleic acid to CLA when using sunflower oil as substrate or during soymilk fermentation. The inhibitory effect of linoleic acid on the growth of the L. plantarum was also discussed. The production of CLA was increased with adding high concentration of substrate in sunflower oil and IMAU60042 produced the highest CLA both in sunflower oil and soymilk. The CLA was composted by 2 isomers: cis9, trans11-CLA and tran10, cis12-CLA, and cis9, tran s11-CLA covered the most part of the total CLA formed except for L. plantarum P8. The production of CLA was decreased during the storage of fermented soymilk. The CLA contents decreased significantly in the first week, also more quickly in 2 wk. Especially, tran10, cis12-CLA decreased more rapidly than cis9, tran11-CLA. No dramatic change was observed among other 8 fatty acids in soymilk. The proportion of unsaturated fatty acids varied after fermentation with different L. plantrum strains, but all decreased the during storage. The research on the ability of converting CLA of L. plantrum strains could be basis for the future research and development of fermented soymilk products. PRACTICAL APPLICATION: Desirable probiotic traits, such as acid and bile tolerance, aggregation activity, and antibacterial activity, have been proved for the 6 Lactobacillus plantarum strains. The 6 L. plantarum strains might be used in the fermentation of soymilk to produce multifunctional probiotic soymilk products, especially the rich CLA contents.     

共轭亚油酸对小鼠肥胖的抑制作用

采用小鼠营养性肥胖模型法,以昆明小鼠为实验动物,设置基础饲料对照组、肥胖模型对照组、共轭亚油酸（conjugated linoleic acid,CLA）高、中、低剂量组,分别连续灌胃6 周,考察小鼠体质量、体内脂肪质量、血脂水平、肝脏脂肪酸合成酶（fatty acid synthase,FAS）含量及脏器的变化,研究CLA对小鼠肥胖的抑制作用。结果表明：CLA各剂量组小鼠的Lee’s指数、脂肪系数和血清甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（totalcholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）水平均显著或极显著低于肥胖模型对照组（P＜0.05或P＜0.01）,高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）水平均极显著高于肥胖模型对照组（P＜0.01）,各剂量的CLA对小鼠除肝脏以外的其他脏器无显著影响（P＞0.05）,高剂量（0.15 mL/10 g）CLA可使喂食营养饲料小鼠的各项肥胖指标均处于喂食基础饲料小鼠的水平,表明CLA能有效抑制小鼠肥胖,同时对小鼠生长无毒副作用;CLA可极显著降低小鼠肝脏FAS含量（P＜0.01）,降低脂肪酸的合成,从而抑制小鼠肥胖。