芦丁-α-鼠李糖苷酶分离提纯及其酶性质

报道了微生物sp．R9g产芦丁-α-鼠李糖苷酶的分离提纯及其酶性质鉴定。该酶能水解芦丁的一个-α-鼠李糖基，从而制备异槲皮甙。该酶蛋白的分子量约为72kDa，且酶反应的最佳温度是40℃，最适pH值是5。     

芦丁-α-鼠李糖苷酶基因的克隆

根据芦丁 α 鼠李糖苷酶N端氨基酸序列设计简并引物,从Absidiasp.R9g的总RNA出发,通过逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)扩增出芦丁 α 鼠李糖苷酶基因片段。将RT PCR获得的1条1.6kb的目的条带与pMD18 T载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞。酶切鉴定结果表明目的片段克隆成功。     

两种菌产两种不同天然苷类α-鼠李糖苷酶的研究

采用TLC法和分光光度计法研究了Absidia sp．G3g产人参皂苷-α-鼠李糖苷酶（RhaG）和Absidia sp．R9g产芦丁-α-鼠李糖苷酶（RhaR）的酶反应特性。实验结果表明,RhaG只水解人参皂苷Re的C-6位末端上的一个α-鼠李糖基,而RhaR能水解芦丁、橙皮苷、柚皮苷的α-鼠李糖基。两种酶反应条件中相同之处是酶反应最适底物质量浓度为1.0g／mL、最佳反应pH5．0,不同之处是RhaG反应的最佳反应温度是50℃,而RhaR则为40℃。     

两种菌产两种不同天然苷类α-鼠李糖苷酶的研究

采用TLC法和分光光度计法研究了Absidia sp.G3g产人参皂苷-α-鼠李糖苷酶(RhaG)和Ab-sidia sp.R9g产芦丁-α-鼠李糖苷酶(RhaR)的酶反应特性。实验结果表明,RhaG只水解人参皂苷Re的C-6位末端上的一个α-鼠李糖基,而RhaR能水解芦丁、橙皮苷、柚皮苷的α-鼠李糖基。两种酶反应条件中相同之处是酶反应最适底物质量浓度为1.0 g/mL、最佳反应pH 5.0,不同之处是RhaG反应的最佳反应温度是50℃,而RhaR则为40℃。     

人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的cDNA5’末端的快速扩增

根据人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的CDS区已知序列设计引物，应用“去帽法”原理快速扩增出了人参皂苷-α-鼠李糖苷酶cDNA5’端未知序列．测序结果表明，扩增出的5’端未知序列长度为421bp．通过与已知的CDS区序列比对，确定扩增出的5＇端未知序列就是目的序列，其5’端非编码区长度为61bp．     

人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的cDNA 5′末端的快速扩增

根据人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的CDS区已知序列设计引物,应用"去帽法"原理快速扩增出了人参皂苷-α-鼠李糖苷酶cDNA 5′端未知序列.测序结果表明,扩增出的5′端未知序列长度为421 bp.通过与已知的CDS区序列比对,确定扩增出的5′端未知序列就是目的序列,其5′端非编码区长度为61 bp.     

芦丁-α-鼠李糖苷酶分离提纯及其酶性质

报道了微生物sp.R9g产芦丁 α 鼠李糖苷酶的分离提纯及其酶性质鉴定。该酶能水解芦丁的一个 α 鼠李糖基,从而制备异槲皮甙。该酶蛋白的分子量约为72kDa,且酶反应的最佳温度是40℃,最适pH值是5。     

芦丁的酶法转化及其产物异槲皮苷的分离

利用微生物Absidiasp.R9g产的芦丁-α-鼠李糖苷酶(RhaR)转化芦丁制备异槲皮苷,采用硅胶柱层析法对酶解产物进行分离纯化。结果表明,24.0g芦丁的酶解产物,经分离可得到较纯的异槲皮苷单体13.1g,其得率为49.4%。通过高效液相色谱检测其纯度达到98.3%。     

芦丁鼠李糖苷酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达

芦丁鼠李糖苷酶目的基因亚克隆至pPIC9K表达载体，电转化至毕赤酵母GS115中，进行了基因表达研究．结果表明，该转化宿主菌在甲醇诱导培养至144h．表达产蛋白具有芦丁鼠李糖苷酶活性，运用SDS-PAGE电泳技术确定其分子质量为53ku，与理论值基本相符．     

人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的亚克隆及表达

将人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因亚克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K,再将构建后的表达载体电转化到毕赤酵母GS115中,并诱导表达该基因。结果显示,重组酵母菌在甲醇体积分数为0.5%,72 h培养后,所提取的酶蛋白经酶活性检测,发现具有人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的活性,经SDS-PAGE分析,确定其分子质量为52 ku,与理论值基本相符,表明该基因得到了表达。     

人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的亚克隆及表达

将人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因亚克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K,再将构建后的表达载体电转化到毕赤酵母GS115中,并诱导表达该基因。结果显示,重组酵母菌在甲醇体积分数为0.5%,72 h培养后,所提取的酶蛋白经酶活性检测,发现具有人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的活性,经SDS-PAGE分析,确定其分子质量为52 ku,与理论值基本相符,表明该基因得到了表达。     

人参皂甙—α—鼠李糖苷酶分离提纯及其酶性质

主要研究微生物sp．G9产皂甙鼠李糖苷酶的分离提纯及其酶性质。该酶能够水解人参皂甙Re的C-6位末端上的一个α-鼠李糖基，从而制备人参皂甙Rg1。该酶蛋白的分子量约为54kDa，且酶反应的最佳温度是40℃，最适pH值是5。     

芦丁鼠李糖苷酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达

芦丁鼠李糖苷酶目的基因亚克隆至pPIC9K表达载体,电转化至毕赤酵母GS115中,进行了基因表达研究.结果表明,该转化宿主菌在甲醇诱导培养至144 h,表达产蛋白具有芦丁鼠李糖苷酶活性,运用SDS-PAGE电泳技术确定其分子质量为53 ku,与理论值基本相符.     

芦丁鼠李糖苷酶水解反应液中鼠李糖的分离纯化

利用微生物Absidiasp.R9g产的芦丁-α-鼠李糖苷酶(RhaR),水解芦丁制备鼠李糖。24.0g芦丁经酶解后,采用大孔吸附树脂对产物进行分离,得到含有4.18g鼠李糖的粗糖液,其得率为17.4%。结合结晶法对鼠李糖粗糖液进行精制,当鼠李糖水溶液质量浓度达到0.4g/mL时,鼠李糖可达到过饱和状态而开始结晶,所得晶体颗粒饱满,无色透明,结晶得率为27.5%。通过高效液相色谱检测,纯度达到99.0%。     

人参皂甙-α-鼠李糖苷酶分离提纯及其酶性质

主要研究微生物sp.G9产皂甙鼠李糖苷酶的分离提纯及其酶性质。该酶能够水解人参皂甙Re的C 6位末端上的一个α 鼠李糖基,从而制备人参皂甙Rg1。该酶蛋白的分子量约为54kDa,且酶反应的最佳温度是40℃,最适pH值是5。     

大连轻工业学院学报第24卷（2005年）目次

第1期穿山龙薯蓣皂苷酶解产物的分离纯化………………………………王元好,刘冰,鱼红闪,金凤燮(1)白头翁皂苷酶解产物的分离纯化……………………………………王伟,唐正军,鱼红闪,金凤燮(4)芦丁-α-鼠李糖苷酶基因的克隆………………………………………马安周,王栩林,鱼红闪,金凤燮(8)纳豆枯草杆菌的分离鉴定及发酵条件优化…………………………郎亚军,隋海澜,于育玲,张苓花(12)柴胡皂苷的提取与鉴定……………………………………宋海妹,苏小凤,李楠,鱼红闪,金凤燮(15)黄芪皂苷糖苷酶产生菌的筛选及其酶反应条件……………………………毛羽,…     

芦丁鼠李糖苷酶基因多位点突变的修复

任何与原模板不匹配的碱基都可掺入到PCR产物中,形成“不配或错误”。该现象为创造定点突变,基因修复提供了简便易行的方法。利用套叠PCR和高保真DNA聚合酶对芦丁鼠李糖苷酶基因的多个突变位点进行修复,获得100%的修复成功率。     

人α-防御素HNP-1基因克隆及其结构分析

为了获得一种具有生物学活性的小分子多肽基因人α-防御素HNP-1，提取人外周静脉血液总RNA，反转录为cDNA作为模板，采用PCR的方法扩增得到长度约为380bp的防御素(Defensin)基因片段，并将该扩增产物连接入pMD18-T载体，转化大肠杆菌JM109感受态细胞，对PCR鉴定含有目的片段的克隆进行核苷酸序列测定，获得α-防御素HNP-1基因克隆。用序列处理在线工具包分析HNP-1基因结构。     

芦丁鼠李糖苷酶基因多位点突变的修复

任何与原模板不匹配的碱基都可掺入到PCR产物中,形成“不配或错误”.该现象为创造定点突变,基因修复提供了简便易行的方法.利用套叠PCR和高保真DNA聚合酶对芦丁鼠李糖苷酶基因的多个突变位点进行修复,获得100%的修复成功率.     

白头翁皂苷的分离提纯

酒精溶剂浸提得到较粗的白头翁总皂苷，脱脂后，经大孔树脂层析得到高产、高纯的白头翁总皂苷，得率为9．4％。总皂苷经硅胶柱层析得到无色的、纯度较高的单体皂苷，得率为22．8％。通过薄层层析把纯化的单体皂苷与标准品白头翁皂苷Ⅲ进行对照，分离纯化的单体皂苷与标准品相同．是3-O-[α-L-鼠李糖基(1-2)-L-阿拉伯糖苷]-3β，23-羟基-△^20(29)-羽扇豆烯-28-O-[α-L-鼠李糖基(1→4)-β-D-葡萄糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖酯苷。