基于双向电泳和质谱联用技术的水牛乳源酪蛋白的研究

利用双向电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-MS)联用技术对水牛乳酪蛋白与其他乳源蛋白差异性进行了研究。根据Image Master 2D Platinum图像分析软件对不同乳源酪蛋白的双向电泳(2-DE)图谱进行蛋白斑点的匹配分析,获得21个存在于水牛奶中,主要分布在低丰度蛋白区的差异蛋白点,经质谱分析,得到4个属于水牛奶酪蛋白的主要组分,另外发现两个与水牛奶中的蛋白有较高同源性的新组分。     

不同来源牛乳酪蛋白过敏原性评价及酶解消减作用研究

牛乳酪蛋白是引起婴幼儿过敏的重要来源。为分析不同来源的牛乳酪蛋白过敏原性差异,并通过蛋白酶水解实现低水解度下高效消减牛乳酪蛋白过敏的作用,研究了不同来源的酸法酪蛋白、酶法酪蛋白和胶束酪蛋白原料差异以及制备方法对牛乳酪蛋白过敏原性的影响,并分析了蛋白酶水解消减酪蛋白过敏的作用效果。结果表明,不同制备方法获取的酪蛋白过敏原性差异明显,酶法酪蛋白和胶束酪蛋白具有更高的过敏原性。对具有高过敏原性的酶法酪蛋白采用4种单酶水解时,均获得了较低的残留过敏原性,其中菠萝蛋白酶具有最优效果,残留抗原性降低至9%,对应水解度仅为8%。菠萝蛋白酶水解牛乳酪蛋白时更有利于获得低水解度下具有低致敏性的水解产品。     

基于乳清蛋白的骆驼乳中掺假牛乳的检测及热处理对方法的影响

利用超高效液相色谱（ultra-high performance liquid chromatography,UPLC）技术,建立一种以牛β-乳球蛋白为掺假标识物的检测方法,用于定性定量检测骆驼乳中掺假的牛乳,并且探讨不同热处理方式对掺假标识物的影响,以期满足不同商品化驼乳制品的检测需求。结果表明：该方法能有效地检测鲜驼乳、巴氏杀菌驼乳以及驼乳粉中掺假的牛乳,3 种类型掺假乳样本的定量检测回归方程线性良好,线性相关系数（R2）分别为0.997 9、0.996 9和0.997 8;鲜驼乳、巴氏杀菌驼乳和驼乳粉中掺假牛乳的检出限分别为2%、3%和5%,可满足检测需求;利用该方法在10 种不同品牌市售纯驼乳粉中检测出4 种掺假驼乳粉产品。UPLC法可以有效地检测骆驼乳及其制品中掺假的牛乳,为骆驼乳行业的掺假检测提供一定的技术方法支持。     

牛乳酪蛋白源活性肽制备及结构研究现状

从牛乳酪蛋白源活性肽、制备方法、结构分析鉴定等方面，对以牛乳酪蛋白为原料研制开发的活性肽类进行了综述，并总结了目前人们从酪蛋白中发现的活性肽的氨基酸组成结构。     

牛乳主要过敏原酪蛋白的特性和分离纯化研究进展

牛乳是理想的蛋白补充剂,其中80%蛋白质为酪蛋白。酪蛋白作为牛乳中主要过敏原,严重影响牛乳过敏患者的营养补充选择。酪蛋白的结构特征与其致敏性强弱有关,所以选择合适的分离纯化方法,获得高纯度的酪蛋白是深入探究结构特征与致敏性关联的前提。本文从酪蛋白胶束的初步分离和酪蛋白亚型的提纯两个角度,总结了国内外牛乳酪蛋白分离纯化的研究进展。同时,文章也阐述了牛乳酪蛋白的基本特性以及其结构与致敏性的关系,以期为进一步降低酪蛋白致敏性的研究提供参考。     

牛乳酪蛋白遗传多态性研究

牛乳酪蛋白遗传多态性影响着牛乳的组成和干酪制作,同时是研究牛品种特性和系统进化的有用工具.就牛乳中酪蛋白的遗传多态性、乳酪蛋白遗传多态性的研究方法以及酪蛋白多态性与乳品质之间的相关性等进行综述,旨在阐述当前牛乳酪蛋白遗传多态性研究的现状,为今后该方向研究提供参考.     

基于高通量定量蛋白组学技术的全脂牛乳和脱脂牛乳蛋白组差异分析研究

蛋白质是牛乳中重要的营养成分,然而关于脱脂处理对牛乳蛋白含量的影响尚不清楚。本文采用串联质谱标签（Tandem Mass Tags,TMT）标记定量蛋白组学方法,对全脂牛乳和脱脂牛乳中全蛋白组进行分析,探究脱脂对牛乳蛋白的影响。全脂和脱脂牛乳中共鉴定出1352个蛋白,筛选出199个差异表达蛋白。与全脂牛乳相比,脱脂后有67个蛋白上调,132个蛋白下调。牛乳主要活性蛋白中,κ-酪蛋白在脱脂后相对含量降低,而β-乳球蛋白和乳铁蛋白在脱脂后相对含量升高,α-乳白蛋白、αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、β-酪蛋白、牛血清蛋白及乳过氧化物酶相对含量则无显著性差异。乳脂肪球膜蛋白中嗜乳脂蛋白和乳凝集素在脱脂后相对含量降低。脱脂对牛乳中骨架蛋白、代谢相关蛋白等也有影响,改变了牛乳品质及营养价值。通过对全脂和脱脂牛乳中蛋白质分析,明确了脱脂对牛乳蛋白的影响,可以为婴幼儿乳品开发及消费者购买不同脂肪含量的牛奶提供参考。     

牛羊乳酪蛋白制备及电泳分析比较

采采用新鲜和复原的牛羊乳为原料,等电点沉淀,通过洗涤、干燥等步骤分别制得牛乳和羊乳酪蛋白,用凯氏定氮法对其进行定量检测,应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析比较牛羊乳酪蛋白组分差异。结果表明：牛乳酪蛋白得率为86．75％,羊乳酪蛋白得率为90．55％,高含量的酪蛋白主要集中在电泳图谱的中分子量组,可分为ds,CN、as2-CN、β-CN和K—CN,牛羊乳as2-CN分子量羊乳大于牛乳,牛乳a-CN含量比较多,羊乳β—CN含量比较多,鲜乳与复原乳全蛋白主要组分在电泳图谱中除酪蛋白差别外,上端的高分子量组清蛋白区羊乳IgG重链的分子量比牛乳小。应用蛋白质电泳分析技术可以区分羊乳和牛乳的蛋白质组分,等电点沉淀法制备酪蛋白的方法简单,易于操作。     

驼乳乳清蛋白多态性的研究

以生鲜驼乳和不同干燥方式生产的驼乳粉为材料，用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)表征采集时间、采样地点、脂肪含量、干燥方式对驼乳乳清蛋白多态性的影响。结果表明，同一地点同一个体的驼乳在不同月份之间的乳清蛋白有统计学差异，说明驼乳中的蛋白质变化水平受季节的影响。不同地点采集的驼乳中乳清蛋白在同一个月份也有统计学差异，说明不同采样地点对鲜驼乳乳清蛋白的多态性都具有一定的影响。乳粉加工的干燥过程会影响驼乳乳清蛋白的多态性，干燥后得到的各类驼乳粉中乳清蛋白的组分均发生了不同程度的热损伤。乳粉中乳脂对乳清蛋白也具有一定的保护作用。驼乳粉乳清蛋白中蛋白组分相对丰度的变化不仅与原料乳中脂肪含量有关，也与乳粉的热加工方法、乳清蛋白中的热敏蛋白、加热杀菌有关。且与低温真空干燥法相比，喷雾干燥法对驼乳粉中乳清蛋白的多态性变化影响更为显著，对乳铁蛋白和α-乳白蛋白的破坏严重。用RPHPLC方法能够快速检测驼乳粉中α-乳白蛋白，表明其可以作为驼乳清蛋白多态性的最佳标识物。     

母乳、牛乳与主要小品种乳蛋白质组成及乳清蛋白二级结构比较

目的 对比母乳、牛乳、山羊乳、绵羊乳、驼乳和驴乳的蛋白质组成及乳清蛋白二级结构,厘清主要加工乳种与母乳的蛋白质差异。方法 通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE）和傅里叶变换红外光谱法（Fourier transform infrared spectroscopy, FTIR）对比各乳种的蛋白质组成和乳清蛋白二级结构。结果 绵羊乳中蛋白质、乳糖、脂肪含量均显著高于母乳、牛乳、山羊乳、驼乳和驴乳（P<0.05）,母乳中蛋白质、乳糖、矿物质与驴乳各对应指标均无显著性差异（P>0.05）;酪蛋白﹕乳清蛋白（C:W）是衡量动物蛋白质量的指标,检测结果为母乳C:W为38.58﹕61.42,牛乳C:W为81.43﹕18.57,山羊乳C:W为61.14﹕38.86,绵羊乳C:W为68.42﹕31.58,驼乳C:W为56.16﹕43.84,驴乳C:W为8.91﹕91.09;母乳与驼乳均含有较高的乳铁蛋白与血清白蛋白,且几乎不含β-乳球蛋白;驼乳与母乳乳清蛋白的α?螺旋结构占比较高。结论 母乳与主要加工乳种蛋白质组成与乳清蛋白二级结构不尽相同,该研究为各种乳源高值化利用和纯度鉴别提供了参考依据。     

牛乳酪蛋白的人乳化改性研究

由于牛乳酪蛋白不易为婴儿消化吸收，通过对牛乳酪蛋白人乳化改性的研究，即运用犊牛皱胃酶的作用，减少牛乳α＿ｓ＿１－酪蛋白的量，使β－酪蛋白与α＿ｓ＿１－酪蛋白的比例由原来的０．７提高到３．ｏ以上，从而接近了人乳的消化吸收性。经人乳化改性后的牛乳可适用于新生婴儿配方乳的制造。     

低矿化牛乳酪蛋白胶束与婴幼儿蛋白质胃肠消化的关系

蛋白质消化吸收对生命早期的生长发育至关重要，牛乳酪蛋白胶束矿化水平是影响婴幼儿蛋白质胃肠消化的重要因素。目前，乳制品加工业中常用的降低酪蛋白矿化水平的方法有离子交换脱钙法、螯合脱钙法和酸化脱钙法。低矿化牛乳酪蛋白能增加蛋白质溶解性、抑制蛋白凝胶形成、提高酪蛋白体外胃肠消化速率。研究发现，低矿化牛乳酪蛋白通过改变酪蛋白胶束结构，导致酸性环境和胃蛋白酶作用下形成的絮凝颗粒小且疏松，加速酪蛋白在胃中的分解和消化速率，能够帮助改善婴幼儿蛋白质胃肠消化问题，提高婴幼儿胃肠舒适度。文章旨在为婴幼儿配方奶粉选用低矿化牛乳酪蛋白胶束作为配料改善婴幼儿胃肠消化提供营养学理论支持。     

牦牛乳酪蛋白抗凝血肽制备工艺研究

酪蛋白为牛乳中主要的蛋白形式,不仅能为生物体生长发育提供必需的氨基酸,而且酶解后可得到一系列具有重要生理功能的生物活性肽,抗凝血肽就是其中一种,毒副作用小、抗凝血效果明显,可作为心脑血管疾病治疗的潜在药物。本试验以牦牛乳酪蛋白为原料,采用胰蛋白酶酶解酪蛋白制备抗凝血肽,通过筛选显著单因素和设计正交试验,确定了牦牛乳酪蛋白抗凝血肽最佳制备条件为:温度为30℃、pH为6.2、底物浓度为4%、酶底比为1.75%、反应时间为3h。在该条件下所制备的抗凝血肽的抗凝血效价单位数可达837.4U/mg。     

牛乳和双峰驼乳中乳脂球膜蛋白的差异分析

为阐明双峰驼乳中乳脂球膜蛋白（milk fat globule membrane proteins,MFGMP）的组成以及与牛乳MFGMP之间的差异,以牛乳和双峰驼乳中的MFGMP为研究对象,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向电泳和液相色谱-串联质谱（liquid chromatograph-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）技术对其中的高丰度蛋白质进行表征,并对双峰驼乳MFGMP提取方法进行选择。结果显示,双峰驼乳和牛乳MFGMP中含量最高的蛋白组分依次为嗜乳脂蛋白、黄嘌呤氧化还原酶/脱氢酶、乳凝集素（MFG-E8或PAS6/7）、脂肪分化相关蛋白（ADRP或PLIN2）,3 种方法分析双峰驼乳和牛乳中MFGMP中高丰度蛋白组分的结果具有一致性。基于LC-MS/MS技术对双峰驼乳的MFGMP进行鉴定,并将对鉴定出的蛋白质进行基因本体功能注释和京都基因与基因组百科全书路径分析,发现这些蛋白主要是细胞膜、线粒体、内质网膜等组分,参与的生物途径有翻译和翻译的起始、氧化还原过程、细胞内蛋白质转运、蛋白质折叠、细胞氧化还原稳态等,具有结合活性和分子催化等分子功能。     

牛乳酪蛋白源生物活性肽研究进展

乳酪蛋白源生物活性肽以其良好的消化性、低敏性及生物活性而日益受到重视。综述国内外在牛乳酪蛋白来源的阿片肽、阿片拮抗肽、ACE抑制肽、免疫调节肽和矿物元素结合肽等方面的研究,旨在为更好地利用牛乳酪蛋白源的生物活性肽提供参考。     

3种乳源酪蛋白粒径及胶束结构的差异性

通过纳米粒度分析仪和扫描电子显微镜,分别对水牛乳、牛乳及羊乳中的酪蛋白颗粒直径大小分布情况及酪蛋白胶束结构进行研究。结果表明：水牛乳、牛乳及羊乳中酪蛋白的粒径分布及胶束结构方面存在明显的差异。水牛乳酪蛋白平均颗粒直径为182.3nm,酪蛋白颗粒互相连接成较细长的胶束,胶束之间交联成网络状;牛乳酪蛋白平均颗粒直径为207.4nm,酪蛋白颗粒聚集成直径较大的胶束;羊乳酪蛋白平均颗粒直径为173.8nm,酪蛋白颗粒仅能够形成较短的胶束,也不能交联成网络状。     

不同等电点沉淀法和超速离心法提取牛奶乳清蛋白的双向电泳分析

为探索牛奶乳清蛋白提取的最适方法,以生鲜荷斯坦牛奶为对象,采用不同等电点（pH 4.6和pH 4.8）沉淀法和超速离心法提取牛奶乳清蛋白样品,并对提取效果进行双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）图谱分析。依据凝胶图谱上蛋白斑点比较图谱质量,采用PDQuest 8.0凝胶图像分析软件进行凝胶图谱分析。结果显示：2 种方法均能有效提取牛奶乳清蛋白,且获得的2-DE凝胶图谱背景清晰、蛋白点个体独立、无明显的拖尾现象,且重复性强,但都存在一定的酪蛋白残留。与超速离心法相比,pH 4.6沉淀法和pH 4.8沉淀法提取乳清蛋白的2-DE凝胶图谱可检测到较多的蛋白质斑点。pH 4.6沉淀法提取乳清蛋白制备的2-DE凝胶图谱中蛋白点的表达丰度略高于pH 4.8沉淀法。研究表明：pH 4.6沉淀法提取乳清蛋白制备2-DE凝胶图谱略优于pH 4.8沉淀法和超速离心法。但2 种等电点沉淀法和超速离心法都可有效去除牛奶中的高丰度酪蛋白,提高低丰度蛋白的检出敏感性。     

樟子松突变丛生枝蛋白质的双向电泳分析

本文通过对樟子松正常枝和突变体丛生枝进行蛋白质双向电泳实验,研究其突变体丛生枝的发生机理,并利用2-DE计算机分析系统对结果进行定性、定量分析.结果表明,共有59个蛋白点在表达的质和量上有变化,其中35个蛋白点在突变枝2-DE图谱中表达量均高于正常枝的蛋白点,20个蛋白点在突变枝2-DE图谱中表达量均低于正常枝的蛋白点,4个蛋白点在突变枝图谱上发生缺失.从而证明差异表达的蛋白点可能与突变丛生枝的发生有关.     

酰化修饰对牦牛乳酪蛋白结构及理化性质的影响

以丁二酸酐、丁二酸、乙酸酐为酰化试剂对牦牛乳酪蛋白进行酰化修饰,研究了酪蛋白空间结构、缓冲性能、钙镁磷含量、色度的变化。结果显示,丁二酸酐、乙酸酐、丁二酸酰化程度分别为90.0%、87.9%、18.5%。酰化修饰后,牦牛乳酪蛋白二级结构以转角和β-折叠的含量为主;丁二酸酐酰化促使酪蛋白形成少量规则的α-螺旋结构,含量为9.4%,其他样品中未检出。丁二酸酐酰化使其三级结构变化程度最大,丁二酸最小。酰化修饰后,牦牛乳酪蛋白最大荧光强度降低,除了乙酸酐修饰酪蛋白之外,其他样品最大发射波长红移;丁二酸修饰酪蛋白三级结构变化较小。酰化修饰后,酪蛋白缓冲性能增强。经酰化修饰后,牦牛乳酪蛋白中的钙、镁、磷含量均降低,但其色泽均变白。研究结果可为牦牛乳酪蛋白的改性及构效关系研究提供参考依据。     

酪蛋白磷酸肽酶解工艺条件的优化研究

酪蛋白磷酸肽(CPP)是以牛乳酪蛋白为原料,通过生物技术制得的具有生物活性的多肽,能有效促进人体对钙、铁、锌等二价矿物营养素的吸收和利用,可用于各种营养、保健食品。本研究对不同种类的酶水解牛乳酪蛋白,优选出CPP得率最高的LC-1酶,对其工艺条件进行优化,确定其最佳酶解条件为:pH8.0、温度50℃、底物浓度10%、酶解时间2h。通过中试验证,CPP含量为22.3%。