漆酶产生菌的原生质体诱变选育

利用紫外线对杂色云芝原生质体进行诱变,经原生质体再生培养和筛选再生菌株,获得一株高产漆酶突变株,突变株比出发菌株的漆酶酶活提高了54.32%.而且,突变株继代遗传稳定,说明利用原生质体紫外诱变育种是获得漆酶高产菌的一种有效方法.     

酯化红曲霉原生质体制备及紫外线诱变育种

以红色红曲霉（Monascus ruber）为出发菌株,用混合酶制取原生质体并对原生质体形成条件进行探讨,并进行紫外诱变选育。采用50h菌龄的菌丝体,使用蜗牛酶（0.6%）＋溶菌酶（0.4%）＋纤维素酶（0.6%）的复合酶液,30℃酶解2h,在该条件下原生质体浓度可达7.8×106个/mL,再生率为7.3%。在最佳紫外照射时间80s下,突变株经筛选,得到一株酯化酶活显著提高、遗传性能稳定的诱变株HN215-6,其酶活达468.4mg/100mL,比出发菌株HN215提高了1.66倍。     

氯化锂诱变黑曲霉原生质体选育高产植酸酶菌株

采用氯化锂诱变黑曲霉原生质体,筛选高产植酸酶菌株。获得制备黑曲霉原生质体的最适条件:纤维素酶1.0%,蜗牛酶0.5%,菌龄24 h,酶解温度30℃,酶解时间2 h,渗透压稳定剂0.7 mol/L NaCl。采用氯化锂对制得的原生质体进行诱变,结果表明:经0.15%LiCl诱变后,原生质体存活率为23.37%,此时,获得一株植酸酶活最高的突变株,为19.24 U/mL,比出发菌株提高54.41%,该菌株具有良好的遗传稳定性。     

PlectaniaYM421胞内黑色素提取及其生物功能

对暗盘菌 YM421菌株胞内黑色素的提取工艺、抗紫外线活性、抗卵磷脂氧化和抗油脂氧化进行了研究.结果表明Plectania YM421胞内黑色素最佳提取条件是A3B3C2,即提取时间为4 h,提取温度为90 ℃, 料液质量比为1∶200;该黑色素具有较强的抗紫外线能力,在质量浓度为80 mg/mL时对卵磷脂抗氧化指数为56%,能显著抑制大豆油的氧化.     

灵芝原生质体诱变选育高产漆酶突变株的研究

对一株产漆酶活性较高的灵芝(Ganoderma.lucidumKarstNo.1)原生质体的制备、再生及紫外诱变育种进行了研究,获得了1株漆酶活性比对照菌株提高2.83倍的突变株G301。实验所确定的原生质体最佳制备条件为:以蔗糖为稳渗剂,采用4%(W/V)溶壁酶与2%(W/V)蜗牛酶等体积混合酶液,在30℃、pH6.0下,对液体培养48h的灵芝菌丝体酶解1h;同时实验所确定的原生质体诱变的适宜条件为:30W紫外灯距离40cm照射30s。     

原生质体紫外诱变选育L-半胱氨酸高活力转化菌株

对Pseudomonas sp.HJ-14的原生质体制备和再生条件进行了研究,并对其原生质体紫外辐照诱变选育L-半胱氨酸高活力转化菌株。在37℃、2 mg/mL溶菌酶作用下酶解60 min,其原生质体的形成率和再生率分别为78.6%和28.6%。经过紫外辐照诱变Pseudomonas sp.HJ-14原生质体,在含DL-2-氨基-△~2-噻唑啉- 4-羧酸(DL-ATC)再生平板上筛选抗性菌株,获得1株酶活较高的正突变株B-3,该菌株具有良好的遗传稳定性和酶活稳定性。采用5L罐进行产酶培养,并在pH8.0、DL-ATC·3H_2O浓度为10 g/L、42℃酶促反应9 h,L-半胱氨酸最高产量达4.63 g/L,摩尔转化率为76.5%,较HJ-14提高了117.7%。     

自选菠萝果酒酵母菌的诱变育种

以1株自行分离的菠萝果酒酵母菌H10为出发菌株,制备原生质体后进行紫外诱变选育优良突变菌株。优化了酶法制备菠萝果酒酵母原生质体的工艺条件和紫外照射时间,并对诱变菌株进行初筛和复筛。结果表明:菌龄10 h、在酶解温度32℃、酶解液pH6.2、酶解时间90 min为原生质体制备的最佳工艺条件;最优紫外灯照射时间为150 s;诱变菌株经过初筛和复筛后,得到1株对菠萝汁发酵能力强,产香能力好,耐乙醇和SO2,遗传稳定性好,适合热带地区菠萝酒生产的的优良酵母菌株H10-15。     

低能离子注入对产胡萝卜素红酵母NR06的诱变效应研究

分别以红酵母NR06和其原生质体为研究对象,通过注入生命必需元素N 以期获得高产类胡萝卜素突变株.结果表明,原生质体在各种注入剂量下的存活率几乎均为零,说明在所实验的条件下原生质体不宜用于离子注入诱变育种.但对红酵母细胞直接诱变时,当注入剂量为12×1014N /cm2时,获得一株高产类胡萝卜素突变株L15,其β-胡萝卜素产量可达8.0mg/L,比出发菌株NR06提高了34.5%,并且该高产菌株遗传性能较为稳定.     

紫外诱变球毛壳霉原生质体选育木聚糖酶高产菌株

[目的]对球毛壳霉原生质体进行紫外诱变处理筛选出一株高产木聚糖酶菌株.[方法]实验在不同条件下制备球毛壳霉(Chaetomium globosum AS3.3601)原生质体,分析不同酶浓度、酶解温度和时间对原生质体生成率和再生率的影响,利用单因素实验确定了紫外线诱变剂量,经初筛和复筛后,DNS法测定木聚糖酶活性.[结果]结果表明:结合原生质体的生成率和再生率确定其最佳制备条件为酶浓度1.5％,酶解温度30℃,酶解时间4h,在紫外照射时间60s下处理过的原生质体,木聚糖酶活性可达到9980IU/mL.[结论]获得的诱变菌株YZ-8比原始菌株提高了92.6％,此菌株经多次传代,遗传性能稳定.     

基因组改组:几株同源酱油曲霉的多亲株电融合育种

酱油酿造中原料的全氮利用率是一个主要的生产指标，通过育种提高生产菌株的中性蛋白酶活是一个有效的方法。利用一株用曲精中分离、纯化的酱油曲霉，制备其分生孢子的原生质体，并优化了原生质体制备的条件。将分生孢子的原生质体进行紫外诱变，得到7株酶活提高幅度较大的紫外诱变株U，以此作为候选株文库，采用基因组改组（Genome shuffling），进行多亲株灭活电融合，获得9株酶活进一步提高的菌株。     

紫外诱变选育耐酸酵母菌株及其特性研究

以实验室保存的耐酸酵母菌株YM1-1为出发菌株,在其对数生长期进行紫外诱变处理,经过三级筛选后,最终筛得一株在pH 1.8强酸环境中仍可存活的突变菌株YM1-1E。在其特性研究中发现,菌株YM1-1E最适生长温度和pH值分别为36 ℃和5.5,能耐受500 mg/L SO2、14%乙醇和65%的葡萄糖溶液。突变菌株YM1-1E在pH值为2.5的发酵培养基中发酵6 d后,发酵液酒精度为4.5%vol,糖醇转化率为46.39%,可溶性固形物含量为9.7%,较出发菌株YM1-1相比,产酒精能力提升了25%。     

铆钉菇D447黑色素高产菌株诱变育种及遗传稳定性研究

为提高铆钉菇（Gomphidius sp.）D447的诱变育种的效率,首先对该菌的孢子最佳活化时间及定向筛选剂曲酸的最优添加量进行了研究,结果表明孢子最佳活化时间为6.0 h,曲酸的最优添加量为0.4%。在此基础上,以紫外线、硫酸二乙酯、氯化锂、5-溴尿嘧啶等诱变剂对D447的活化孢子进行了单一及复合诱变,通过曲酸平板初筛,摇瓶复筛方法,最终获得一株黑色素产量为（2.45±0.16） g/L的诱变株DB-3,较出发菌株D447提高了1.57倍。对突变株进行传代稳定性试验,结果表明诱变株DB-3经斜面传代9代以后,黑色素产量仍较稳定,无明显的回复突变。     

紫外诱变选育高效降解甲醛菌株及其降解特性

以甲醛降解菌--拟青霉菌（Paecilomyces variotii）CSLG1为出发菌株,对其进行紫外诱变,并考察突变株对甲醛的降解特性。选用功率15 W的紫外灯、照射距离30 cm、照射时间30 s、致死率为88%的诱变强度对出发菌株进行紫外诱变;通过初筛、复筛选育出一株甲醛抗性及其降解能力明显提高的诱变菌株F1-23。结果表明：F1-23临界甲醛抗性质量浓度为7.88 g/L,比诱变前提高22.2%;甲醛脱氢酶酶活力为83.6 U/mg,提高了23.8%。连续传代5 代,诱变菌株F1-23的甲醛抗性和降解力基本不变,证实其具有良好的遗传稳定性。诱变菌株F1-23对甲醛的抗性及降解能力均较出发菌株高。     

嗜酸乳杆菌乳酸高产菌株的紫外诱变选育

通过紫外诱变提高嗜酸乳杆菌的产乳酸能力,通过正交试验确定了诱变参数：20W紫外灯,菌液稀释至OD600O．65左右,照射60s,照射距离为30．5cm,此条件的致死率为92．5％。诱变处理后的茵体产酸速率明显高于出发菌株,突变菌株在培养36h时产酸量达到最大值10．83g／L,而出发菌株最大值为10．41g／L,且突变菌株具有稳定的遗传性。     

高产食用蛋白质产朊假丝酵母菌的选育及发酵条件优化

通过对产朊假丝酵母菌的紫外诱变,筛选蛋白质含量较高的可食用菌株。结果表明：在15W紫外线(30cm)处,照射120s,致死率为89%,得到蛋白质含量为33% 的诱变菌株,比诱变前的22.9% 提高了37.12%。对此菌种进行稳定性测试(传代10 次并进行蛋白质测定),性质稳定;对诱变后的发酵条件：碳源、氮源、培养温度和溶氧量(培养箱转速)进行优化,最终得到采用葡萄糖为碳源、硫酸铵和酵母浸膏粉的混合物为氮源、培养温度为32℃、转速为160r/min 时培养出的蛋白质含量及菌体生物量都在较高水平,蛋白质含量为37%。     

Effect of illumination intensities on astaxanthin synthesis by Xanthophyllomyces dendrorhous and its mutants

The aim of the study was to select optimal illumination for Xanthophyllomyces dendrorhous DSM 5626 and its mutants: 26UV, 10BE, 13B, and 34B for astaxanthin production. The strains were cultivated on YM medium at an illumination of 0–5,000 lx. The highest yields of astaxanthin were found in cultures at 600 lx. The maximum pigment production for the parental strain was 0.95 mg/L and 0.19 g/kg dry cell weight (DCW), while for mutants 1.23–1.51 mg/L and 0.34–0.39 g/kg DCW. It was calculated that the application of adequate values of illumination (within the range of 670–718 lx), determined on the basis of regression models, may improve astaxanthin production by approximately 5–15%, depending on the strain. This was confirmed in the verification experiments for the parental strain and mutants: 10BE, 13B, 26UV, but for 34B at 718 lx the volumetric astaxanthin production was found to be higher than predicted by the model.     

复合诱变选育短梗霉多糖高产菌株

以本实验室保存的出芽短梗霉AP8为出发菌株,采用甲基磺酸乙酯(EMS)和紫外线(UV)复合诱变,在EMS终浓度0.4mol/L、作用时间40～60min和30W的紫外灯照射距离30cm、照射时间1.5～2.5min条件下诱变效果好,获得一株稳定遗传的多糖产量高、色素含量低的出芽短梗霉突变株UV60,产量为22.1g/L,对菌落特征和发酵特征的比较发现,突变株UV60在菌落颜色、大小、质地和发酵特性上均明显优于出发菌株AP8。通过对变异株培养基碳氮比和培养基的组成进行单因素和正交试验,其最佳摇瓶发酵培养基组成为：蔗糖50.0g/L、酵母膏1.5g/L、NaCl 1.5g/L、MgSO4 0.3g/L、K2HPO4 2.0g/L、(NH4)2SO4 0.7g/L。采用上述优化的发酵培养基,突变株UV60获得的短梗霉多糖产量为27.24g/L,多糖转化率达54.48%。     

复合诱变选育茁霉多糖高产菌株

茁霉多糖具有许多优良的化学性质,可以作为中间体合成多种有经济价值的工业用化合物,是一种潜在的重要化工平台产品.以出芽短梗霉Y为出发菌株,通过紫外2轮、亚硝基胍3轮复合诱变,高蔗糖浓度(20％)平板筛选得到6株高产突变株,其中菌株N3茁霉多糖产量质量浓度达到37.84g/L,比出发菌株产量提高71.22％.     

一株非酿酒酵母的菌种诱变选育

将全美梅奇酵母作为出发菌株,进行紫外诱变和微波诱变,得到最佳诱变条件为：紫外线（30 W）照射5 min,微波（2 450 MHz, 700 W）辐照30 s。初筛与复筛后获得耐受性较好的突变菌株2株,最终通过气相色谱-质谱法进行香气成分测定,对比香气种类和含量,获得一株发酵力好,可耐受300 g/L葡萄糖、9%vol酒精度和300 mg/L二氧化硫环境的突变菌株W1。其发酵液总酯含量为85.97%,总醇含量2.33%,二者高于出发菌株和突变菌株W2。菌株W1发酵液香气饱满,以果香为主,具有赤霞珠葡萄酒的色泽,适合葡萄酒的酿造应用。     

苹果醋优势醋酸菌株的诱变选育

以酒精含量为7%vol的苹果酒发酵醪液为驯化介质,对引进的醋酸杆菌20056进行驯化与诱变选育。采用紫外诱变的方法,确定最佳诱变条件为诱变时间40 s、诱变距离40 cm、菌液稀释度10-5,此时细胞致死率为82.15%。15株诱变菌株通过诱变效应、产酸实验、定性实验等验证,结果表明经过初步筛选的UV-3、UV-6、UV-11三株正突变菌株,产酸总量分别和诱变前的原菌株相比分别提高了20.45%、23.73%、24.61%,乙醇脱氢酶活性的峰值分别是原菌株的2.7、3.5、3.7倍。紫外诱变有效的提高了苹果酒发酵醪液中的酒精转化力,为优势醋酸菌的选育提供了简便、有效的育种手段。