曲酸高产菌的复合诱变选育

以米曲霉（Aspergillus oryzae）3.042为出发菌株,其孢子在无菌水中孵育4 h后,首先经两次紫外照射诱变,筛选获得产曲酸能力提高的突变株UV15。随后将UV15继续进行超声波和微波照射的复合诱变筛选,获得高产菌株M22,将其传代10次后,最终确定M22是一株生长性能和产酸能力均稳定的曲酸高产菌株。该菌株在接种量为104个/mL、30℃、摇床250 r/min、发酵时间6.5 d的条件下,产酸量由原来的11.55 g/L提高到34.28 g/L,比出发菌株提高了197%。     

紫外线和He—Ne激光诱变产植酸酶黑曲霉菌株的研究

采用He—Ne激光（波长632nm,功率10mW）和紫外线对植酸酶产生茵黑曲霉Px的孢子和原生质体进行诱变。结果表明：原生质体对紫外线诱变的耐受能力比孢子强,而对He—Ne激光诱变的耐受能力比孢子弱。经诱变后筛选出一株突变菌株L2—2,植酸酶产量为9274IU／mL,是出发菌株的1．51倍,传代实验表明该菌株植酸酶产量稳定。     

一株高产黑色素暗盘菌菌株的选育

研究黑色素暗盘菌Plectania YM421原生质体制备的最佳条件,并对该原生质体进行紫外诱变以获得高产黑色素菌株。结果表明：在质量浓度为2.5g/100mL蜗牛酶,33℃酶解3h的条件下,Plectania YM421原生质体形成率最高;在距离20W紫外灯下30cm处,紫外诱变时间在15～25s之间时,获得突变株YM421-2#黑色素的产量较出发菌株提高了10.03%,生物量提高了11.33%。该突变株可以作为黑色素工业生产的候选菌株。     

紫外线与N~+注入复合诱变选育曲酸高产菌株

为得到一株曲酸的高产菌株,从5种实验菌株中筛选得到1株米曲霉CICC-2336菌株,以其作为出发菌株,经过紫外诱变和氮离子注入诱变两种复合诱变,得到1株曲酸高产菌株,将其命名为Aspergillus oryzaeN11。该菌株经过传代6次后,性状稳定,产酸量基本不变。在接种量15%、30℃恒温、摇床180r/min条件下发酵培养7d后,其产酸量达到24.12g/L,比出发菌株提高101%。     

棒状链霉菌F613-1的诱变及其发酵工艺优化

该实验旨在获得克拉维酸高产菌株,并通过发酵条件优化提高其产量。以棒状链霉菌（Streptomyces clavulans）F613-1为出发菌株,通过紫外和亚硝基胍（NTG）联合诱变及含链霉素固定培养基筛选并在对突变菌株添加发酵前体研究基础上,通过单因素试验和响应面法优化其摇瓶发酵条件。结果表明,成功筛选一株棒状链霉菌衍生菌株,克拉维酸产量较出发菌株提高19.9%;添加1.5%甘油和0.15%谷氨酸可大幅缩短突变株发酵时间;突变株前36 h时25 ℃培养,后37 h时29 ℃培养,发酵pH值为7,克拉维酸产量达5.44 g/L,较出发菌株提高了55.8%。棒状链霉菌高产菌株的摇瓶发酵条件优化效果显著,为进一步提高克拉维酸生产提供依据。     

蛋氨酸高产菌株诱变育种

本实验以北京棒杆菌AS1.299作为出发菌株,采用紫外线和亚硝基胍(NTG)作为诱变剂,进行诱变育种,以期获得蛋氨酸高产菌株。研究结果表明:紫外诱变菌悬液最佳菌浓度为103CFU/ml,最佳紫外照射时间为18s;NTG诱变最佳菌浓度为102CFU/ml,NTG诱变的最佳诱变时间为40min;通过三轮紫外和NTG交替诱变处理后可提高该菌株蛋氨酸产量,其中突变株N3-10蛋氨酸产量为1.103g/L,比原菌株蛋氨酸产量增加了0.703g/L,5次传代表现出较好的遗传稳定性。     

He-Ne激光对红曲霉M9x的原生质体诱变育种

采用He—Ne激光诱变红曲霉M9x原生质体，获得一株Monacolin K产量为103．73μg／ml的诱变株M9y，其产量约是出发菌株M9x的4．1倍，经酯酶同工酶分析，其酶带条纹数、迁移率等均发生了明显变化。对诱变株进行传代稳定性试验，结果表明：经斜面传代八代以后，诱变株M9y的Monacolin K产量仍较稳定，无明显的回复突变。     

产ε-聚赖氨酸白色链霉菌的化学诱变育种

该研究以白色链霉菌（Streptomyces albus）BNCC 186223为原始菌株,使用硫酸二乙酯对其进行化学诱变,考察最佳诱变条 件,并筛选高产ε-聚赖氨酸的菌株。结果表明,最佳诱变条件为硫酸二乙酯10 μL/mL,诱变时间45 min。在此最佳诱变条件下,获得一株 高产ε-聚赖氨酸突变菌株DES-27,其ε-聚赖氨酸产量为2.90 g/L,较未诱变前提高38.10%。 因此,硫酸二乙酯的诱变作用能够显著提 高ε-聚赖氨酸的产量。     

灵芝原生质体化学诱变育种

分别采用氯化锂、甲基磺酸乙酯(EMS)、亚硝酸诱变灵芝原生质体,对高产胞外多糖的菌株进行筛选。结果表明,氯化锂最佳诱变剂量为0.03%,此时诱变株L31胞外多糖产量最高为19.99 mg/mL,较原发菌株提高914.72%;EMS最佳诱变剂量为0.12%,此时诱变株E40胞外多糖产量最高为6.14 mg/mL,较原发菌株提高211.68%;亚硝酸最佳诱变时间为15 min,此时诱变株H48胞外多糖产量最高为10.13 mg/mL,较原发菌株提高414.21%;3种诱变方式下,诱变株L31的胞外多糖产量最高,且遗传性状最稳定,第三、五、七、九代胞外多糖产量较原发菌株分别提高了738.58%、671.07%、683.25%、673.10%。     

醋曲菌的诱变选育及性能测定

以乌沙曲霉为出发菌,经紫外线（U．V）和亚硝酸复合因子诱变,筛选出一株糖化酶活性强的变异株,其液体曲和固体曲的糖化酶活力分别提高28％和15％以上。该菌生长快,产孢子多,产酸性能好,还具备分解淀粉的能力。     

Improvement of production of Kojic acid by a mutant strain Aspergillus oryzae, MK107-39

A strain designated MK107-39, producing kojic acid with a high yield, was obtained by a new screening method using a 96-well microtiter plate after NTG treatment of Aspergillus oryze ATCC 22788. The amount of kojic acid produced by strain MK107-39 in a shaking flask was 28 g/l from 100 g/l of glucose, which was 7.7-times higher than that produced by parent strain. The kojic acid yields per cell and the amount of glucose consumed were 9.8 and 6.0-times higher than those of the parent strain. Based on differences in the use of carbohydrates and organic acids, it seems that strain MK107-39 has some mutation regarding carbohydrate metabolism. By customizing the medium and culture conditions such as glucose concentration, dissolved oxygen concentration and pH of the fermentation broth, more than 110 g/l of kojic acid was produced in a 3-l jar fermentor. Upon scale up to a 600-l pilot fermentor, enhanced production of kojic acid was successfully achieved. The kojic acid yield from glucose consumed, Y(P/S), was 0.43 (g/g) in this pilot plant-scale fermentation.     

曲酸生产菌种的筛选和发酵培养条件的优化

通过多次UV诱变黄曲霉菌A－5，获得-高产曲酸生产菌株UV3x3，该菌株的适宜发酵条件为：温度33℃，淀粉14％，酵母浸出物0．5％，H3PO4。0．07％，MgSO4·7H2O0．05％，FeSO4·7H2O0．002％，K2CO30.03％，在此条件下摇瓶培养6天可生产曲酸6．84g／100m，平均生产效率为11．4g／（1·d），后期生产效率达15．4g／（1·d），转化率为55％。     

曲酸生产菌的复合诱变选育

以生产菌株米曲霉（Aspergillus oryzae）w-56为出发菌株,经2次紫外线、2次60Co多重复合诱变处理,选育获得曲酸生产菌UR28,生产发酵周期由原来的130h缩短至65h,曲酸产量由原来的36g/L,提高到68g/L,比出发菌株提高了88.9%。实验证明采用复合诱变,能有效改变菌株对诱变因素的敏感性,提高突变率,逐步提高突变株的产酸水平。     

高产辅酶Q10类球红细菌的化学诱变筛选及其发酵培养基优化

利用菌株对（维生素K3+叠氮化钠+对羟基苯甲酸）的复合抗性作为筛选标记,对产辅酶Q10的类球红细菌（Rhodobacter sphaeroides）使用亚硝基胍进行化学诱变,筛选高产菌株并采用响应面法优化其发酵培养基。结果表明,经诱变选育得到一株遗传稳定的辅酶Q10高产菌株R.sp3-7,其最佳发酵培养基组成为：葡萄糖31.7 g/L,玉米浆干粉5.6 g/L,（NH4）2SO4 5.3 g/L、谷氨酸钠 3.0 g/L、NaCl 3.0 g/L、MgSO4·7H2O 12.5 g/L、KH2PO4 3.0 g/L、CaCO3 2.0 g/L、辅液1 mL/L。在此培养条件下,诱变菌株R.sp3-7的辅酶Q10产量达（93.63±0.59） mg/L,与出发菌株相比提高了116.8%。 关键词：中图分类号：TS201.3 文章编号：0254-5071（20１6）06-0090-06 doi:     

微生物谷氨酰胺转胺酶高产菌株的诱变选育

以本实验室筛选的Streptomyces sp.WZFF.W—12(谷氨酞胺转胺酶活0．24U／ml)为出发菌株，孢子经预培养处理处于萌发状态后制备成单孢子悬浮液，用1—甲基—3—硝基—1—亚硝基服(NTG)单独和结合羟胺进行多次复合诱变处理。实验发现，诱变处理后菌落的形态变异等特征与产酶能力呈相关关系，并被用于最初的突变菌落挑选。接着先后采用蛋白质交联凝絮—沉淀性能分析的初筛试验和摇瓶测定酶活的复筛试验分离选育高产酶突变菌株，最后获得一产酶活力达2．18U／ml的高产菌株W—12var HZ3，酶活相对提高了8倍。对该菌株进行分类鉴定方面的理化性能测试和传代实验结果表明，该菌遗传性较为稳定，而且其理化性能与已报道的产酶菌种明显不同。     

产脂肪酶菌株的常压室温等离子体诱变及高通量筛选方法的建立

脂肪酶由于可催化的反应种类和底物类别多,且具有位置选择性和异构体选择性等特点而常用于结构酯的合成和油脂改性等领域。丝孢酵母(Trichosporon sp.)是一种产脂肪酶菌种,但生产能力偏低是限制该菌实现工业化生产的重要因素。本研究利用常压室温等离子体(ARTP)对丝孢酵母野生菌进行诱变处理,并建立了96孔板培养结合对硝基苯酚棕榈酸酯(P-NPP)法测定酶活力的高通量筛选方法,实现了60个突变菌株的初筛。以酶活力为筛选指标时,突变率和正突变率分别为51.7%和28.3%。8株初筛菌株的摇瓶发酵结果显示,A13和A5的产酶提高最显著,培养96 h后分别比野生菌增加2.64倍和1.54倍,且2个突变菌株的遗传稳定性良好。对比研究发现,突变菌株A13相较野生菌的最大优势在于提前24 h便能达到最高产酶量。     

紫外-硫酸二乙酯复合诱变高通量筛选虫草素高产蛹虫草突变株

为了进一步提高虫草素的产量,本研究以蛹虫草(Cordyceps militaris)CICC 14014菌株为出发菌株,利用紫外-硫酸二乙酯(UV-DES)进行原生质体复合诱变,结合96孔板高通量筛选方法筛选虫草素高产且性状稳定的菌株。通过96孔板初筛获得54株虫草素产量大于6 g/L的突变株;再经三角瓶复筛,最终筛选出了一株虫草素高产突变菌株UD10-2,在液体表面培养条件下虫草素产量达到11.32 g/L,比发菌株CICC 14014(产量为5.43 g/L)提高了108.47%,经过20次传代后性状稳定。     

微生物转谷氨酰胺酶生产菌的“神舟四号”飞船搭载育种研究——搭载前地面育种试验(I)

结合“神舟四号”无人飞船的试验条件和具体搭载要求 ,对转谷氨酰胺酶生产菌株Streptomycessp .WZFF .L -M 1(酶活 1.74U/mL)的孢子和菌丝体以 1 甲基 3硝基 1 亚硝基胍 (NTG)分别进行多种地面模拟比较性的诱变育种试验 ,发现诱变处理后菌落的形态变异等特征与产酶能力相关 ,经初筛和复筛的菌种驯化选育 ,获得具优异性能的突变菌株 ,酶活得到了明显提高     

Extraction,physicochemical characterisation,and bioactive properties of ink melanin from cuttlefish (Sepia esculenta)

The extracted melanin from Sepia esculenta was characterised by physicochemical properties and biological activities. The yields of melanin were 87.1%, 69.9%, and 62.5% by water extraction, enzymolysis and acidolysis, respectively. The ink melanin contained a characteristic indole structure with irregular spherical structures. Water extraction showed a positive effect on preserving the complete structure of melanin particles based on component analysis, whereas enzymes and acids had destructive effect. Water extraction melanin (WM) exhibited a certain thermal stability and light resistance. WM performed in radical scavenging in a dose-dependent manner. The IC₅₀ of WM for DPPH and ABTS was 99.8 and 104.2 μg mL⁻¹, respectively. WM protected kojic acid and ascorbic acid from light radiation. As the exposure time to light radiation prolonged, the stability of kojic acid and ascorbic acid was preserved. It indicated that melanin might be potentially used as an antioxidant and photo-protectant.     

等离子体诱变凝结芽孢杆菌提高木糖利用能力高产L-乳酸

为进一步提高凝结芽孢杆菌发酵木糖生产L-乳酸的产量和转化率,以实验室保存的一株能利用木糖产L-乳酸的野生型凝结芽孢杆菌菌株NL01为出发菌株,通过等离子体诱变育种技术和平板菌落初筛、摇瓶复筛,最终得到一株木糖耐受力强、L-乳酸产量高、遗传特性稳定的正向突变菌株NL-CC-17。该突变菌株是目前已报道的木糖耐受力最高的菌株。当以100 g/L的木糖为底物,50 ℃发酵72 h后,L-乳酸产量达到82.30 g/L,糖酸转化率为92.37%,L-乳酸产量较出发菌株提高21.51%,糖酸转化率提高了16.00%。通过初步优化发酵条件,确定该菌株最佳发酵温度为50 ℃,实验范围内最佳发酵pH值为5.5。