除草剂扑草净胶体金免疫层析检测试纸条的研制

制备了扑草净胶体金免疫层析检测试纸条,建立了水样中扑草净的快速检测方法.采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备胶体金,对胶体金免疫层析方法的工作条件(NC膜的封闭条件、金标垫的处理方法)进行优化.最终建立的方法检出限为5 ng/mL,5min内可以通过目测进行结果判断.河水样品不需要任何处理可以直接进行检测,检出限为5 ng/mL.本研究建立的快速免疫检测方法适用于水中扑草净残留的现场检测.     

时间分辨荧光免疫层析法定量检测谷物中黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮残留

建立了一种快速定量检测谷物产品中黄曲霉毒素(Aflatoxin B1,AFB1)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)的时间分辨荧光免疫层析方法。采用时间分辨荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体和玉米赤霉烯酮抗体,研究了如p H值、标记抗体浓度、荧光探针使用量、检测T线包被原浓度、质控C线羊抗鼠Ig G浓度、样品前处理方法等因素对时间分辨荧光免疫层析方法灵敏度的影响。结果表明:AFB1的检出限为0.80 ng/mL,线性范围(IC20~IC80)为0.81~5.67 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为2.15 ng/mL。在ZEN检出限为4.58 ng/mL,线性范围(IC20~IC80)为4.76~85.60 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为20.19 ng/mL。方法特异性良好,与T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、伏马毒素、赭曲霉毒素A多种真菌毒素交叉率小于10%。通过选择玉米、麦麸、大豆、小麦进行添加回收试验,AFB1的添加回收率在97.1%~108.7%之间,ZEN的添加回收率在92.8%~109.1%之间,相对标准偏差小于15%。选取经HPLC-MS/MS检测过的FAPAS标准质控样本进行测试,检测结果与其结果一致。在实际产品检测对比中,与市售胶体金免疫层析卡,ELISA试剂盒的检测结果基本一致。本方法操作简单快速、可定量,检测过程约25 min,适用于谷物样品中黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮的现场快速筛。     

胶体金免疫层析法快速检测牛奶中环丙沙星残留

针对牛奶中恩诺沙星的代谢物环丙沙星残留的问题,该研究开发一种胶体金试纸条快速检测牛奶中的环丙沙星残留。研究制备环丙沙星包被抗原,对环丙沙星抗体进行表征,优化胶体金标记条件,选用最佳标记pH和最佳蛋白添加量,以硝酸纤维素膜为固相载体,环丙沙星包被抗原为检测带(T带),羊抗兔二抗为质控带(T带)。依据免疫竞争法原理,建立胶体金免疫层析试纸条快速检测牛奶中环丙沙星的方法,方法检出限为6.25 ng/mL,对牛奶样品的检出限为12.50 ng/mL。样品前处理方法简单,在10 min内即可目测判断结果。     

高效液相色谱法同时检测粮食中常见8 种真菌毒素的含量

建立免疫亲和柱净化-高效液相色谱法同时测定粮食中黄曲霉毒素B1（aflatoxins,AFB1）、黄曲霉毒素B2（AFB2）、黄曲霉毒素G1（AFG1）、黄曲霉毒素G2（AFG2）、赭曲霉毒素A（ochratoxin A,OTA）、玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）、呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）和T-2毒素的检测方法。样品经乙腈-水提取后,用免疫亲和柱净化,Agilent Elipse Plus C18（100 mm×4 mm,3.5 μm）色谱柱分离,以甲醇-乙腈-水-乙酸为流动相,流速1 mL/min,柱温35 ℃,进样量20 μL,检测系统为可变波长检测器串联光化学衍生器串联荧光检测器。根据信噪比为3的峰响应值,确定各真菌毒素的检出限为：AFB1 0.446 ng/mL、AFB2 0.152 ng/mL、AFG1 0.523 ng/mL、AFG2 0.334 ng/mL、ZEN 7 ng/mL、OTA 0.7 ng/mL、DON 200 ng/mL、T-2毒素100 ng/mL。样品中各真菌毒素的平均加标回收率,玉米为80.0%～104.5%,小麦为83.2%～102.8%,方法精密度为2.6%～10.2%。从样品前处理到分析整个过程耗时约2 h。本方法简便、快速、灵敏度高,适用于粮食中多种真菌毒素的快速测定。     

超声波水浴辅助消解-原子荧光光谱法测定食用菌中硒含量

为提高检测效率,建立超声波水浴辅助消解-原子荧光光谱法测定食用菌中硒含量的方法。对仪器实验条件进行正交试验优化,对样品前处理方法、铁氰化钾的影响和方法选择性等影响因素进行研究,根据样品检测结果进行原因分析及安全性评价。该方法检出限为0.20ng/mL,加标回收率为91.6%～102.7%。与国标方法对照,提高了样品前处理效率且结果无显著性差异,为食用菌中硒的检测与质量控制提供了一种快速、准确的分析方法。     

超高效液相色谱测定烟叶中的糖类化合物及在筛选评价中的应用

利用可以快速批量前处理的新型样品萃取瓶作为前处理装置,建立了新鲜烟叶中葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖4种糖类化合物的超高效液相色谱快速检测方法。试验结果表明:(1)新开发的样品前处理装置集提取、过滤和转移为一体,可以大大提高样品前处理效率;(2)利用75%的乙腈(内含0.2%三乙胺)为流动相,以ACQUITY UPLC BEH Amide(2.1 mm×100 mm,1.7μm)为色谱柱,以流速0.2mL/min进行色谱分析。4种糖类物质在5～250μg/mL时具有较好的线性关系,线性相关系数0.999;检出限为1.0～3.2μg/mL;不同添加水平下,平均回收率为91.0%～102.0%,精密度试验RSD5%;(3)对于不同类型的新鲜烟叶进行检测,发现糖类化合物的含量差异明显。该方法前处理简单易操作,重复性较好,可以满足烟草及相关样品检测评价的要求。     

基于分子印迹聚合物的微流控化学发光传感器 检测莱克多巴胺

目的 制备能特异性识别莱克多巴胺(ractopamine, RCT)的分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymers, MIPs), 将该印迹聚合物与微流控化学发光法结合起来, 以制备高选择性的化学发光传感器。方法 利用沉淀聚合法制备莱克多巴胺印迹聚合物, 采用扫描电镜、红外光谱法、吸附实验对其进行表征; 以该印记聚合物为识别元件, 以微流控芯片为流通反应池, 并以化学发光仪作为检测器, 通过流动注射分析法来检测猪肝和牛肉中的莱克多巴胺。结果 在最佳条件下, 测得莱克多巴胺线性范围6?960 ng/mL, 线性回归方程为?I=4.8777C-9.7851, r=0.9907, 检出限为0.83 ng/mL, 对10 ng/mL莱克多巴胺平行测定11次, 其RSD(相对标准偏差)为7.1%。应用该方法成功分析了猪肝和牛肉中RCT含量, 回收率可达90.3%~99.8%。结论 本方法快速、准确、样品前处理简单, 能很好地用于食品中莱克多巴胺残留的检测。     

水产品中恩诺沙星胶体金免疫层析毛细管检测及其前处理

目的:结合胶体金标记技术和免疫层析技术建立胶体金免疫层析毛细管检测技术,用于水产品中恩诺沙星残留的快速现场检测。方法:以间接竞争的实验原理,通过优化检测区抗原、质控区二抗、金标一抗检测浓度初步建立胶体金免疫层析毛细管检测方法,并进一步确定其检测灵敏度、特异性、重复性等及前处理的优化操作。结果:该方法检测恩诺沙星的视觉检测限为5 ng/mL,半定量检测限为1.29 ng/mL。在大菱鲆、鲅鱼、舌鳎、南美白对虾阴性样品中的平均添加回收率在78.3%~129%之间,相对标准偏差均小于10%。特异性实验表明,除对环丙沙星外,对其他相似物的特异性较好;环丙沙星的视觉检测限为10 ng/mL,半定量检测限为4.37 ng/mL,满足国标检测的限量要求。同时,针对免疫层析毛细管检测的前处理方法进行初步探究,最终确定采用常温条件下磺基水杨酸提取的前处理方法。结论:恩诺沙星胶体金免疫层析毛细管检测技术具有简单、快速、易操作、重复性好的优势,为食品药物残留检测领域提供了检测新方法。同时,选择新型试剂作为胶体金免疫层析毛细管检测技术的前处理方法,该方法可以为多种快检技术的前处理提供理论基础与技术支撑。     

基于分子印迹聚合物的微流控化学发光传感器检测莱克多巴胺

目的制备能特异性识别莱克多巴胺(ractopamine,RCT)的分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymers,MIPs),将该印迹聚合物与微流控化学发光法结合起来,以制备高选择性的化学发光传感器。方法利用沉淀聚合法制备莱克多巴胺印迹聚合物,采用扫描电镜、红外光谱法、吸附实验对其进行表征;以该印记聚合物为识别元件,以微流控芯片为流通反应池,并以化学发光仪作为检测器,通过流动注射分析法来检测猪肝和牛肉中的莱克多巴胺。结果在最佳条件下,测得莱克多巴胺线性范围6～960 ng/mL,线性回归方程为?I=4.8777C-9.7851,r=0.9907,检出限为0.83 ng/mL,对10 ng/mL莱克多巴胺平行测定11次,其RSD(相对标准偏差)为7.1%。应用该方法成功分析了猪肝和牛肉中RCT含量,回收率可达90.3%~99.8%。结论本方法快速、准确、样品前处理简单,能很好地用于食品中莱克多巴胺残留的检测。     

PhIP化学模型体系中前处理及UPLC-MS检测方法的研究

本文以PhIP化学模型体系为对象,建立了利用冻干浓缩萃取进行样品前处理,用 UPLC-MS进行PhIP含量检测的分析方法。本研究简化了样品前处理步骤,将反应体系冻干浓缩后采用碱性乙酸乙酯体系提取,用超高效液相色谱-三重四级杆串联方式(UPLC-MS)进行PhIP检测,采用Waters BEH phenyl色谱柱,以乙腈和0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱。结果表明,本方法检测PhIP的线性范围为0.5~15 ng/mL,决定性系数为0.999,检出限为0.110 ng/mL,定量限为0.332 ng/mL,在加标水平为10、15、30 ng/mL时的平均收率分别为78.16%、81.22%、82.03%,相对标准偏差(RSD)分别为6.32%、5.40%、4.28%。本方法操作简便、可重复性高,可作为测定化学模型中PhIP的有效方法。     

胶体金免疫层析法快速检测配方羊奶粉中的牛β-乳球蛋白

建立了一种可快速检测配方羊奶粉中牛β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-lg)的胶体金免疫层析检测方法。通过杂交瘤技术制备β-lg单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),半抑制浓度(50% inhibiting concentration,IC₅₀)为5.87 μg/mL。将胶体金标记的β-lg mAb包被于金标垫,β-lg和山羊抗小鼠IgG标记于硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane,NC膜)分别作为检测线(T线)和质控线(C线),开发了可检测β-lg的免疫层析试纸条。该试纸条对β-lg的检测限(limit of detection,LOD)值为50 μg/mL,与其他基质成分均未产生有效交叉反应,对全脂山羊乳粉中掺杂脱脂牛奶粉(nonfat skim milk,NFSM)、脱盐乳清粉(desalted whey powder,DWP)和乳清蛋白粉(whey protein powder,WPP)的LOD值分别为5%、5%和0.1%。运用该方法对9个市售配方羊奶粉进行分析,检测结果与商品化酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒一致。该方法前处理快速简单,5 min即可裸眼判定结果,可用于配方羊奶粉商品的现场快速检测。     

高灵敏度磁荧光免疫层析试纸模式构建及在呕吐毒素检测中的应用

构建基于磁荧光纳米材料的免疫层析试纸模式,弥补现在免疫层析技术的不足,为更灵敏的免疫学快速检测提供技术支撑。以呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）为靶标,采用溶剂热法制备羧基修饰的超顺磁颗粒,碳二亚胺法将磁颗粒、绿色荧光蛋白及DON单克隆抗体进行偶联,一步法制备磁荧光抗体探针,以DON人工抗原（DON-BSA）为检测线建立磁荧光免疫层析试纸。同时用胶体金标记DON单克隆抗体,以DON-BSA为检测线建立胶体金免疫层析试纸;制备的磁荧光抗体探针具有很好的磁性、荧光特性及抗体反应性,基于该探针成功制备了DON磁荧光免疫层析试纸,该试纸回归方程为y=－0.562x＋0.921,R2=0.990,IC50为5.611 ng/mL,检出限为1.089 ng/mL;制备了DON胶体金免疫层析试纸,该试纸裸眼检测灵敏度为500 ng/mL;定量检测回归方程为y=－0.543x＋1.485,R2=0.991,IC50为65.16 ng/mL,检出限为11.94 ng/mL。DON磁荧光免疫层析试纸的灵敏度是胶体金免疫层析试纸的10.96 倍。本实验建立的磁荧光免疫层析试纸模式可以同时实现样品的富集及荧光信号检测,提高检测灵敏度,并成功用于DON的检测,为磁荧光纳米颗粒广泛应用于免疫层析领域提供参考。     

Development of an Ultrasensitive Immunochromatographic Assay (ICA) Strip for the Rapid Detection of Phenylethanolamine A in Urine and Pork Samples

In this study a one‐step immunochromatographic assay based on competitive format was developed for the rapid detection of phenylethanolamine A (PEAA) residues in urine and pork samples. A monoclonal antibody against PEAA was produced from BALB/c mice immunized with the PEAA‐BSA conjugate. The results of this qualitative test strip were to be interpreted visually. The visual detection limit (VDL) and threshold level of the optimized immunochromatographic assay for PEAA were 0.1 ng/mL and 0.5 ng/mL, respectively. Cross‐reactions with other β‐agonists were not significant inhibitions to the performance of the test strip assay. The results from the test strip were in a good agreement with those obtained using a high performance liquid chromatography‐tandem mass spectrometry (HPLC‐MS/MS) assay. The immunochromatographic assay developed here was a useful on‐site screening tool that is rapid to use, low in cost, and extremely convenient for the detection of PEAA in urine samples and pork samples.     

荧光微球免疫层析技术定量检测河鲀毒素

建立河鲀毒素的荧光微球免疫层析检测方法。基于抗体亲和位点保护标记方法制备抗河鲀毒素抗体偶联荧光微球,方法简单稳定,所有结合分离步骤均在亲和柱中完成,避免了亲和位点被破坏而且荧光信号更强,将检测灵敏度提高至原来的8倍左右。所建立的河鲀毒素检测方法IC50为18.4 ng/m L,线性范围为2~200 ng/m L(y=-0.15ln x+0.95,R2=0.98)。检测河鲀样本的最低检出限为10μg/kg,平均相对标准偏差小于25%(n=6)。该方法适用于热加工样品的检测,整个检测过程仅需15 min,且无需使用大型设备,为河鲀餐前速测提供了一定技术手段。     

Development of a Monoclonal Antibody-Based Immunochromatographic Assay Detecting Ractopamine Residues in Swine Urine

A lateral-flow immunochromatographic assay (LFIA) using monoclonal antibody was developed for the rapid detection of ractopamine residues in swine urine. The assay procedure could be accomplished within 5 min, and the results of this qualitative one-step assay were evaluated visually according to whether test lines appeared or not. When applied to the swine urines, the detection limit and the half maximal inhibitory concentration (IC₅₀) of the lateral-flow immunochromatographic test strip under an optical density scanner were calculated to be 0.1?±?0.013 and 0.71?±?0.056 ng/mL, respectively. The cut-off level was observed with the naked eye of 1 ng/mL for detection of ractopamine residue in swine urine. Parallel analysis of swine urine samples with ractopamine showed comparable results obtained from the LFIA and LC-MS/MS. Therefore, the described lateral-flow test strip can be used as a reliable, rapid and cost-effective on-site screening technique for the determination of ractopamine residues in swine urine.     

盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制

为建立快速检测猪尿等样品中盐酸克伦特罗（CL）的胶体金免疫层析方法,用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金,将其标记抗CL单克隆抗体,制备了金标抗体;以CL-人血清白蛋白（HSA）为包被抗原、羊抗鼠IgG为质控线二抗,制成胶体金试纸。优化了胶体金颗粒粒径、标记抗体用量和pH值等各项参数,最终确定胶体金粒径为15 nm、每毫升胶体金溶液中添加20 ?g抗体、胶体金溶液pH值为7.4、金标抗体稀释液为添加0.1 %牛血清白蛋白（BSA）的0.05 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）、金标抗体喷涂量为50 ?L/cm2、CL-HSA和羊抗鼠IgG的包被浓度分别0.5 mg/mL和2 mg/mL。研制的CL胶体金试纸检测限为3 ng/mL,与莱克多巴胺、沙丁胺醇等六种?-兴奋剂类药物无交叉反应。对42份猪尿样品的检测结果与市售酶联免疫（ELISA）试剂盒的符合率为100 %。试纸无需仪器辅助,操作简便,可在5 min内完成,适用于对CL残留进行现场检测。     

量子点标记免疫层析试纸条快速检测谷物中赭曲霉毒素A

目的:根据竞争抑制免疫层析原理,构建一种基于量子点标记的免疫层析试纸条用于检测谷物中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的残留量。方法:通过活化酯法将羧基功能化的量子点(Quantum dot,QD)与赭曲霉毒素A多克隆抗体(Antibody,Ab)偶联制备量子点抗体偶联物(QD-Ab);通过分别添加不同量的QD-Ab和工作液,优化量子点标记免疫层析试纸条的工作条件;通过商品化试剂盒验证该方法的有效性。结果:当QD与Ab的摩尔比为1:10时,QD-Ab荧光特性最佳;在QD-Ab和工作液添加量分别为1、10 μL时,量子点标记免疫层析试纸条结果最佳;量子点标记免疫层析试纸条的检测限为0.5 μg/L,谷物样品中的检测限为5 μg/kg,整个检测过程不超过10 min;量子点标记免疫层析试纸条特异性良好且具有有效性。结论:该方法操作简便、检测快速、结果准确灵敏,易于判断,可以满足谷物中赭曲霉毒素A残留量现场快速检测的要求。     

玉米赤霉烯酮时间分辨荧光试纸条的制备及特性研究（网络首发、推荐阅读）

研究制备一种基于时间分辨荧光免疫层析法的玉米赤霉烯酮（ZEN）快速定量检测试纸条。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗ZEN的单克隆抗体,应用竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学考核。结果表明：ZEN荧光试纸条的灵敏度为0.1 ng/mL,线性范围为0.1~5.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样品的加标回收率在93.45%~112.20%之间,对于同一个样品5次重复测定的变异系数小于15%。ZEN快速定量检测试纸条具有灵敏度高、反应时间短、准确定量、稳定性好等技术特点,适用于谷物及制品中玉米赤霉烯酮的快速定量检测。     

基于量子点建立铅镉快速串联检测方法

将鼠抗Cd2＋-IEDTA单克隆抗体和鼠抗Pb2＋-IEDTA单克隆抗体分别与包载CdSe/CdS量子点聚苯乙烯微球偶联,建立一种可快速检测铅镉的量子点荧光定量串联卡及免疫层析竞争检测方法。串联卡的最佳反应时间为5?min,可检测的Pb2＋和Cd2＋质量浓度范围分别为1～500?ng/mL和1～400?ng/mL,检测变异系数小于10%;检测特异性良好,与其他金属离子无明显交叉反应;利用该方法与电感耦合等离子体-质谱（inductively coupled plasma-mass spectrometry,ICP-MS）法进行肉类食品检测对比,检测结果与ICP-MS相关性良好。该检测方法为同时定量检测铅镉提供快速简便的有效途径,适用于监测肉中Pb2＋和Cd2＋含量是否超标。