鲬鱼肉酶解物抗氧化活性的研究

深度开发利用鲬鱼蛋白,以羟自由基清除率为指标,从碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶中,筛选出碱性蛋白酶为其水解酶。采用单因素试验及响应面分析法对碱性蛋白酶的水解条件进行优化,得到最佳酶解条件为:加酶量3 000 U/g蛋白、pH 9.0、温度40℃、时间180 min、固液比1∶30(g/mL),清除率为89.49%。酶解物清除羟自由基的IC_(50)值为0.58 mg/mL,表明鲬鱼酶解物是具有良好的抗氧化作用的天然抗氧化剂。     

酶法制备鱼降血压肽的工艺优化及其组分分析

为了开发鲬鱼蛋白,以体外血管紧张素转换酶(ACE)抑制率为指标,通过适宜酶酶解鲬鱼蛋白质制备降血压活性肽。根据供试酶的水解进程筛选适宜水解酶,在单因素试验的基础上,采用响应面分析法优化水解条件,凝胶过滤层析法测定活性肽相对分子质量分布。结果表明,Alcalase是供试酶中最适的水解酶,最优水解条件为:温度48.9℃,pH7.93,加酶量为32396.6 U/g·pro,固液比1:5 g/mL,水解时间2.5 h。在此条件下,酶解液的ACE抑制率IC₅₀=0.269 mg/mL;酶解物经Sephadex G-15凝胶过滤层析得到三个组分,相对分子质量分别为635、258、67,其中的2号组分(C=0.74 mg/mL) ACE抑制活性相对较高,达到89.09%。     

酶解玉米胚芽粕制备ACE抑制肽的条件优化

采用碱性蛋白酶酶解玉米胚芽粕制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,并以ACE抑制率为指标,在单因素的基础上,通过L9(34)正交试验来确定酶解的最佳工艺条件。最佳酶解条件为:底物浓度5%(w/v)、加酶量3%(w/w)、温度60℃、pH 8.5、水解时间2.5 h,在此条件下,水解物对ACE抑制作用最强,抑制率可以达到86.38%(此时水解度为22.76%)。以截留分子量为6KDa的超滤膜分离该水解物,测定两组分的ACE抑制活性。酶解液经超滤后组分Ⅱ(M6 kDa)的IC50值达到1.38 mg/mL,优于未超滤的酶解液的IC50值(3.16 mg/mL)。     

特异性蛋白酶酶解虾副产物制备ACE抑制肽

ACE抑制肽构效关系(QSAR)的研究认为小肽C末端氨基酸的疏水性和其ACE抑制活性之间呈正相关关系。针对性地选择胰凝乳蛋白酶和脯氨酸蛋白酶两步酶解虾副产物制备ACE抑制肽。在一定温度、pH和加酶量条件下,以蛋白质的水解度和ACE抑制率为指标,确定胰凝乳蛋白酶、脯氨酸蛋白酶的最佳酶解时间均为4h。两步酶解产物ACE抑制的IC50值为1.645mg protein/mL。经透析后,得到0~500u(组分1)和500~1000u(组分2)两个组分,组分1和组分2的IC50值分别降为0.333mg peptide/mL和1.320mg peptide/mL。质谱分析结果表明组分1中含有10个肽,分别由5~14个氨基酸组成;组分2中含有15个肽,分别由7~14个氨基酸组成。25个已知序列多肽中有22个多肽的羧基端是脯氨酸或芳香族氨基酸,与预期相符。     

海湾扇贝酶解产物清除自由基活性的研究

利用双酶(胰酶0.3%和枯草杆菌中性蛋白酶0.8%)。在50℃、pH值7.0～8.0、料水比1:3的条件下,对海湾扇贝肉酶解4h后制备得到产物.该酶解产物对羟自由基的清除活性IC_(50)为2.01 mg/mL,对超氧阴离子的清除活性IC_(50)为9.54 mg/mL,对DPPH自由基的清除活性IC_(50)为5.90 mg/mL。Sephadex G-15(1.6 cm×68 cm)凝胶色谱结果表明,该酶解产物中分子质量分布在1450～288 u,肽链长度在13.2～2.6的组分具有较强的清除羟自由基和DPPH自由基活性。     

响应面法优化大孔树脂吸附发酵羊乳ACE抑制肽

血管紧张素转换酶(ACE)的活性过高是导致高血压的重要因素之一。ACE抑制肽可有效地抑制ACE的活性。为了制备高纯度的ACE抑制肽,考查不同截留分子量超滤膜对发酵羊乳中的ACE抑制肽的分离效果,比较4种树脂(AB-8、HPD-100、DA201-C、DM130)对ACE抑制肽的纯化效果,选择最佳树脂并对其纯化工艺参数进行优化。结果表明,经超滤分离后,ACE抑制肽主要集中在M1 ku组分中,其IC50值降到了0.348 mg/mL,ACE抑制率为86.91%,比超滤前ACE抑制率提高了5.61%;大孔树脂DA201-C最佳,静态吸附最佳工艺条件为上样pH2.15、上样浓度20 mg/mL、吸附率为(72.38±1.26)%,通过大孔树脂后IC_(50)值达到0.301 mg/mL,与超滤液相比IC50降低了0.047 mg/mL。     

腰果蛋白ACE抑制肽的分离纯化研究

以海南腰果为原料,通过碱溶酸沉法制备腰果蛋白,对其氨基酸的组成进行了分析,并通过酶解法制备腰果蛋白多肽,依次经过透析、柱层析分离纯化来研究腰果蛋白多肽的血管紧张素酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE)抑制活性。实验结果表明,腰果蛋白中富含必需氨基酸与非必需氨基酸,是一种优质蛋白资源,腰果蛋白中疏水性氨基酸含量为20.4g/100g,有助于其ACE抑制活性。利用碱性蛋白酶进行酶解后制得的酶解液(1mg/mL)ACE抑制率为71.24%±5.96%,经过透析后所得小分子组分[(0～3500)u]的ACE抑制率(1 mg/mL)为85.01%±1.44%,经葡聚糖凝胶(Sephadex G-25)分离纯化后,得到6种组分,其中ACE抑制活性最高的组分为P4,1 mg/mL P4的ACE抑制率为90.01%±0.16%[IC_(50)为(36.25±0.12)μg/m L],将P4进行反向高效液相色谱进一步分离纯化后,得到3个组分,其中P4-3的ACE抑制活性最高,1 mg/mL P4-3的ACE抑制率为91.04%±0.31%[IC_(50)为(2.12±0.067)μg/mL],表现出较高的ACE抑制活性,腰果蛋白ACE抑制肽有望应用于高血压的预防与功能食品的开发,对腰果中蛋白资源的开发利用有一定的实验意义。     

酶法水解鲢鱼蛋白的研究

研究鲢鱼蛋白酶解液制备的工艺条件,采用正交试验着重探讨蛋白酶酶量、酶解时间、酶解温度、初始pH值、固液比对鲢鱼蛋白酶解效果的影响.结果表明,最佳酶解条件为:中性蛋白酶:木瓜蛋白酶=2:1(质量分数),底物浓度为固液比1:2(g/mL),酶添加量为底物浓度的1.6%,初始pH7.0,温度50℃,酶解时间5 h.酶解后,水解度为68.71%,氨基氮为67.3 mg/100 mL,可溶性蛋白得率可达70.02%.     

马氏珠母贝肉ACEIP分离及提取的初步研究

选用合适的蛋白酶对马氏珠母贝肉(Pinctada martensii)进行水解,水解液经过分离提取后,得到血管紧张素转换酶抑制肽(ACEIP)。2个较高 ACE 抑制活性的组分样品 A 和样品 B 的 IC_(50)分别为0．033mg/mL 和 0．041mg/mL。2个样品氨基酸含量最多的是 Phe,分别达到57．5%和53．2%,其相对分子量分别为1042和 256。     

酶解斑点叉尾鮰内脏制备血管紧张素转换酶抑制产物

以斑点叉尾鮰内脏为原料,血管紧张素转化酶抑制率为指标,筛选出木瓜蛋白酶为酶解的最适蛋白酶,并研究该酶的酶解时间、酶添加量、初始pH 值、酶解温度、液料比(mL/g)对酶解产物抑制活性的影响,通过正交试验优化得到了具有ACE 抑制活性的酶解产物的最佳工艺条件。结果表明：最优酶解条件为初始pH7.5、酶解温度55℃、液料比2:1(mL/g),酶解产物ACE 抑制率为72.34%。     

酶解制备马氏珠母贝肉ACEIP的工艺研究

以ACE抑制率为评价指标,确定蛋白酶对马氏珠母贝肉（Pinctada martensii）水解条件。六种蛋白酶中水解效果较好的酶种为胃蛋白酶。正交试验确定的水解条件为:在pH2．2、温度39℃、酶浓度3%、水解6．0h、底物浓度12%。在该条件下水解,水解液ACE抑制率可以达到81．70%,IC50值为1．323mg/ml。     

鲎血细胞蛋白营养学评价及其水解肽体外活性

对鲎血细胞蛋白(TTBCP)进行营养学评价,并测定TTBCP水解物的体外抗氧化性、α-葡萄糖苷酶和乙酰胆碱酯酶的抑制活性。结果显示:TTBCP中必需氨基酸优于成人的FAO/WHO推荐模式,基本符合小孩的FAO/WHO推荐模式,其中必需氨基酸与总氨基酸的比值(E/T)为31.2%,氨基酸评分(AAS)为68.1,蛋白质效率比(PER)小于2.0。TTBCP水解肽对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC₅₀)为0.199 mg/mL,抑制率最高达到83.8%,对乙酰胆碱酯酶同样有抑制作用;TTBCP水解肽能清除超氧阴离子自由基、DPPH自由基和羟自由基,当浓度小于0.75 mg/mL的范围时,还原能力大于维生素C。由此可见,TTBCP具有复合功效,可作为糖尿病的保健食品和药品开发利用。     

体外模拟消化对大米谷蛋白结构及水解产物生物活性的影响

通过体外模拟消化,研究不同消化时间下谷蛋白结构与抗氧化和血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制活性的关系。利用内源荧光光谱和傅里叶变换红光谱测定谷蛋白水解过程结构变化。通过测定水解产物抗氧化能力和ACE抑制率表征酶解产物的活性,利用四极杆串联飞行时间质谱鉴定具有抗氧化和ACE抑制活性的组分。结果表明,谷蛋白水解度在2 h内快速增加,随后趋于平缓。水解导致谷蛋白λmax红移且荧光强度增强,α-螺旋含量显著增加、β-折叠相对含量显著降低（P＜0.05）。α-螺旋结构含量的增加降低了水解物的抗氧化能力,谷蛋白β-折叠结构含量的减少能增强水解物的ACE抑制能力。水解0.5 h抗氧化能力最强,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率的半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）为（1.113±0.015）mg/mL,·OH清除率IC50为（0.518±0.053）mg/mL、Fe2＋螯合能力IC50为（0.678±0.019）mg/mL。ACE抑制率先增加后降低,在2 h达到最高,IC50为（0.693±0.011）mg/mL。水解度的增加降低了水解物抗氧化能力,但增强了ACE抑制能力。水解物在0.5～2 h抗氧化能力和ACE抑制能力呈现负相关关系,随后抗氧化能力和ACE抑制能力均下降。水解物抗氧化肽和ACE抑制肽分子质量均小于2 kDa,筛选出以VEGGFLFIV为代表抗氧化活性多肽,且ACE抑制肽大部分N-端是疏水性氨基酸或者碱性氨基酸。因此,通过控制谷蛋白体外消化水解度,可制备最优的大米谷蛋白抗氧化或降血压相关功能性产品。     

波纹巴非蛤ACE抑制肽的分离纯化

将波纹巴菲蛤酶解液经过凝胶层析柱(Sephadex G-15)分离收集到4个活性成分,活性最强的ACE抑制率达84.18%(0.5 mg/mL)。将组分4经过离子交换层析柱(SP Sephadex C-25)分离,并收集的高活性成分在可溶性蛋白为0.132 mg/mL ACE抑制率达到46.03%。最后将先后经过凝胶层析柱和离子交换层析柱收集到的ACE抑制率较高的组分通过反向高效液相色谱分析,出现2个洗脱峰,表明分离纯化效果良好。     

三斑海马蛋白ACE抑制肽的制备及其二级结构的研究

以三斑海马为原料,经碱性蛋白酶酶解,获得富含血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽的酶解液。酶解液经透析、Sephadex G-25凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱得到进一步分离纯化。结果表明,透析产物的IC50值为(0.44±0.26)mg/mL,相比酶解液(0.81±0.12)mg/mL,其ACE抑制活性更强。透析产物经Sephadex G-25凝胶柱分离纯化后,得到3种组分,其中组分F2的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.11±0.08)mg/mL。F2经反相高效液相色谱进一步分离后,得到6个具有ACE抑制活性的组分峰,其中组分F2-4的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.005 7±0.000 9)mg/mL。经过3步分离纯化后,成功从三斑海马蛋白中分离得到一种活性较强ACE抑制肽:ProAla-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala(PAGPRGPA),多肽分子量为721.39 Da。圆二色谱分析多肽二级结构表明其主要含无规则卷曲。因此,从三斑海马蛋白中分离得到的多肽可能成为营养保健品和抗高血压药品及相关疾病的一种有益成分,且对海马蛋白资源的开发利用具有重要意义。     

玉米蛋白复合风味蛋白酶水解物性质的研究

以玉米蛋白为原料,主要研究了通过复合风味蛋白酶水解制备的玉米蛋白水解物的功能特性。结果表明:玉米蛋白经复合风味蛋白酶水解后水解度为11.43%,体外实验该水解度下的玉米蛋白水解物结合胆汁酸的能力较强,相对分子质量分布在10 000～180 Da之间,水解物中有高含量的疏水性氨基酸残留。玉米蛋白水解物持水性为2.95 mL/g,持油性为2.13 mL/g,乳化性为49.96 mL/g,起泡性为126%。玉米蛋白水解物经Sephadex G-15、RP-HPLC分离纯化,对含量最高的组分F2,用MALDI-TOF/TOF MS/MS方法进行鉴定,其相对分子质量为244.2 Da,氨基酸组成为脯氨酸-谷氨酰胺。     

Identification and characterization of a novel angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptide (ACEIP) from silkworm pupa

The angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptide (ACEIP) was isolated and characterized from silkworm pupae and purified using Sephadex G-25 gel filtration. The structure and physicochemical properties of pupa ACEIP were analyzed. The α-P₃ fraction exhibited the most potent ACE inhibitory activity. After purification via semi-preparative reverse-phase HPLC (RP-HPLC) and HPLC, the α-P₃-6-b component was revealed to have the highest ACE inhibitory activity (IC₅₀=28.3 μg/mL). Edman degradation revealed a Val-Glu-Ile-Ser amino acid sequence in which novel active sequences were identified. Physicochemical property testing showed that purified pupa ACEIP exhibits good solubility, heat resistance, and acid resistance that all indicate ACEIP derived from silkworm pupa is an excellent food-derived ACEIP.     

蓝蛤蒸煮液与酶解液的风味改善作用研究

本文以蓝蛤蒸煮液和酶解液为研究对象,对两种调味基料的游离氨基酸进行了呈味特性分析,并评价了其对花蛤酱的风味改善效果。结果表明:蓝蛤酶解液中的总游离氨基酸(11685 mg/100 mL)明显高于蓝蛤蒸煮液(2498 mg/100 mL),且蓝蛤酶解液和蓝蛤蒸煮液中呈鲜味特性的氨基酸含量分别为1650 mg/100 mL和697 mg/100 mL,由此可知酶解液中呈味氨基酸的滋味贡献度要大于蒸煮液。电子鼻传感器对各组样品的响应值存在差异,其中传感器W5S(对氮氧化合物灵敏)的响应值最大,利用线性判别法可完全将各组样品区分开。气相色谱-质谱结果表明3组花蛤酱样品中共鉴定出挥发性风味物质47种,其中主要的风味物质是醛类和醇类物质,添加蒸煮液组(CG)、添加酶解液组(HG)和空白组(BG)的醛类化合物相对含量分别为31.73%、32.39%和18.48%,而醇类化合物的相对含量分别为12.90%、15.43%和11.16%。综上分析可知,蓝蛤酶解液中呈味氨基酸含量丰富,并可丰富和提升食品的风味品质,具有作为新型天然调味料的开发潜力。     

Evaluation of angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory activities of smooth hound (Mustelus mustelus) muscle protein hydrolysates generated by gastrointestinal proteases: identification of the most potent active peptide

In this study, smooth hound protein hydrolysates (SHPHs), obtained by treatment with various gastrointestinal proteases, were analyzed for their angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory activities. Protein hydrolysates were obtained by treatment with crude alkaline enzyme extract, low molecular weight (LMW) alkaline protease, trypsin-like protease and pepsin from Mustelus mustelus, and bovine trypsin. All hydrolysates exhibited inhibitory activity toward ACE. Hydrolysate generated with alkaline protease extract displayed the highest ACE inhibitory activity, and the higher inhibition activity (82.6% at 2 mg/mL) was obtained with a hydrolysis degree of 18.8%. This hydrolysate was then fractionated by size exclusion chromatography on a Sephadex G-25 into five major fractions (P₁–P₅). ACE inhibitory activities of all fractions were assayed, and P₃ was found to display a high ACE inhibitory activity (62.24% at 1 mg/mL). P₃ was then fractionated by reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) and ten fractions of ACE inhibitors were found (F₁–F₁₀). Sub-fraction F₃ showed the strongest ACE inhibitory activity, being able to suppress more than 60% of initial enzyme activity at a concentration of 100 μg/mL. The amino acid sequence of peptide F₃ was determined by ESI/MS and ESI–MS/MS as Ala-Gly-Ser, and the IC₅₀ value for ACE inhibitory activity was 0.13 ± 0.03 mg/mL. Further, purified peptide F₃ maintained inhibitory activity even after in vitro digestion with gastrointestinal proteases in order to demonstrate gastrointestinal stability digestion to enable oral application. These results indicate that smooth hound protein hydrolysate possesses potent antihypertensive activity.