佛手山药多酚氧化酶提取及酶促合成茶黄素研究

为探究佛手山药多酚氧化酶(PPO)粗酶液提取及其催化儿茶素合成茶黄素的能力,本研究利用缓冲液浸提法制备佛手山药PPO粗酶液,考察料液比、pH、反应温度等因素对佛手山药PPO酶提取效果的影响。结果表明佛手山药PPO酶最适提取条件为料液比1∶2,pH 5.5,反应温度35℃。以反应底物作为研究对象时,邻苯二酚使得佛手山药PPO酶表现出最大酶活,茶多酚与EC表现相当,而EC优于其他三种儿茶素单体。以佛手山药PPO粗酶液作为催化剂,四种儿茶素单体之间成对组合作为酶促合成茶黄素的底物,通过HPLC法检测佛手山药PPO粗酶液催化儿茶素合成茶黄素的能力,结果表明佛手山药PPO酶能催化合成茶黄素TF1、TF2A、TF2B、TFDG,但四种产物的合成率却相差较大,PPO催化儿茶素合成四种茶黄素的为TF1> TF2B> TF2A> TFDG,TF1的合成率达到30.66%。     

不同茶树品种悬浮发酵对茶黄素形成的影响

以同一嫩度的英红9号、福鼎大白、金观音、槠叶齐4 个差异性较大品种的鲜叶为原料进行悬浮发酵实验,开展茶树品种、酶源类型（多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）、过氧化物酶（peroxidase,POD）活性等）、儿茶素组分（含量、配比等）对茶黄素形成影响的研究,结果表明：PPO活性/POD活性比值以福鼎大白最高,英红9号和金观音次之;简单儿茶素总量（total simple catechin,TSC）和酯型儿茶素总量（total ester-type catechin,TETC）均以英红9号最高,福鼎大白和金观音次之,槠叶齐最低;各儿茶素组分除没食子儿茶素没食子酸酯和儿茶素没食子酸酯外均呈前期迅速下降、后期平稳的趋势,儿茶素剧烈消耗期在发酵前30?min;茶黄素组分形成量均呈先升后降的趋势,峰值点在发酵15?min和30?min,不同品种不同茶黄素组分峰值时间和高度不同;整体上,以最高儿茶素底物含量和第2高PPO活性/POD活性比值的英红9号品种茶黄素的形成量显著最多,最高PPO活性的福鼎大白和金观音品种可最快形成茶黄素,但较高活性的POD和较低含量的儿茶素,导致茶黄素的形成量较低,而具有最低PPO活性/POD活性比值和最低含量的儿茶素底物的槠叶齐品种形成茶黄素的能力最差。即PPO活性/POD活性比值越大,儿茶素底物含量越大,TETC/TSC比值越大,形成茶黄素的能力越强。     

祁门红茶多酚提取工艺优化及其组成鉴定

以祁门红茶为原料,优化了红茶多酚提取的工艺条件。通过单因素实验考察乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比、p H对红茶多酚提取率的影响,并进一步采用正交实验优化提取工艺,得到最佳工艺为:乙醇体积分数60%,提取温度70℃,提取时间2.5 h,料液比1∶50(g/m L),p H4。在此工艺下,提取两次后红茶多酚提取率为(214.23±6.29)mg/g。采用UPLC-DAD鉴定祁门红茶的多酚组成,结果表明,祁门红茶多酚的主要成分为没食子酸、没食子儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、儿茶素没食子酸酯、茶黄素、茶黄素-3-没食子酸酯、茶黄素-3′-没食子酸酯和茶黄素双没食子酸酯。     

HPLC法同时测定茶叶中聚酯型儿茶素和茶黄素

为建立茶叶中3种聚酯型儿茶素(聚酯型儿茶素A、聚酯型儿茶素B、聚酯型儿茶素C)和4种茶黄素(茶黄素、茶黄素-3-没食子酸酯、茶黄素-3'-没食子酸酯和茶黄素双没食子酸酯)同时检测的高效液相色谱分析方法,采用日本cosmosil 5C18-AR-Ⅱ柱(4.6 mm×250 mm),2个流动相分别为50 mmol/L磷酸和100%乙腈,流速为0.8 mL/min,柱温35℃,检测波长280 nm,外标法定量。在该分析条件下,各组分获得了良好的分离。在一定的范围内,线性关系显著,R2均在0.9925以上。重复性试验、精密度试验、稳定性试验的相对标准偏差(RSD)分别在0.01%~0.72%,0.04%~0.28%,0.02%~0.32%。加标回收率试验结果显示:聚酯型儿茶素各组分平均回收率在95.50%~120.13%,相对标准偏差0.41%~4.24%;茶黄素各组分平均回收率在84.14%~105.31%,相对标准偏差1.59%~4.59%。该方法具有较好的重复性、精密性、稳定性,可同时测定茶叶中聚酯型儿茶素和茶黄素。     

茶黄素双没食子酸酯的酶法合成条件优化与纯化

利用皇冠梨多酚氧化酶催化表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）和表儿茶素没食子酸酯（epicatechin gallate,ECG）合成茶黄素双没食子酸酯（theaflavin-3,3’-O-digallate,TFDG）,首先单因素试验确定了酶促反应的底物EGCG/ECG物质的量比3∶1、pH?4.0、反应温度35?℃,在此基础上采用Box-Behnken试验设计法进行3因素3水平响应面优化试验,确定了TFDG最优酶促反应条件为底物EGCG/ECG物质的量比3.1∶1、pH?4.1、反应温度37?℃;在最优反应条件下进行TFDG的合成,并利用AB-8层析柱结合高速逆流色谱技术分离纯化反应液,结果表明TFDG的得率和纯度分别达到85.14%和97%。     

外源多酚氧化酶催化合成儿茶素二聚体氧化产物的研究进展

在红茶加工过程中,儿茶素通过多种氧化途径形成种类和构成都很复杂的氧化聚合产物,也赋予了红茶特有的色泽和口感。目前研究较多的儿茶素二聚体氧化产物主要是茶黄素类和聚酯型儿茶素。本文综述了近年来国内外在儿茶素二聚体氧化产物形成的反应途径、儿茶素酶性氧化中的外源多酚氧化酶及其与底物的特异性、儿茶素酶性氧化生成二聚体氧化产物及其生物活性、外源多酚氧化酶催化儿茶素氧化生成二聚体氧化产物在茶类加工中应用等方面的研究现状,旨在为进一步深入理解儿茶素酶性氧化机理提供参考,同时也为茶叶深加工提供应用科学理论依据。     

山楂叶多酚的纯化及其抗氧化特性与组分分析

探讨山楂叶多酚的纯化工艺,并分析其抗氧化活性和组成成分。比较SP-825,D101,AB-8,XDA-2等四种树脂对山楂叶多酚的吸附性能,筛选最佳树脂,并优化其纯化参数,分析其抗氧化活性、组成成分和红外光谱特性。结果表明,4种树脂中AB-8树脂纯化山楂叶多酚效果较好,其最佳纯化参数为样液初始pH 4.5、初始质量浓度0.064 mg/mL、上样流速1.5 mL/min、洗脱剂乙醇体积分数为70%和洗脱流速为0.6 mL/min,在此条件下,山楂叶多酚的回收率为78.25%,纯化后多酚的纯度提高了4.15倍。山楂叶多酚具有较好的抗氧化能力,其粗提液和纯化液清除DPPH·的IC_(50)值分别为(1.28±0.14)和(0.78±0.09)对螯合Fe~(2+)的IC_(50)值分别为(55.58±1.24)和(34.13±1.02)总还原能力的IC_(50)值分别为(3.66±0.18)μg/mL和(2.12±0.23)μg/mL,纯化液清除·OH的IC_(50)值为(4.49±0.16)μg/mL;表明纯化后其抗氧化能力有显著提高。FTIR分析表明其具有多酚和黄酮的特征峰;HPLC分析表明山楂叶多酚主要含绿原酸、表儿茶素、阿魏酸、芦丁和熊果酸,说明山楂叶多酚具有较高的开发应用价值。     

川红工夫加工过程多酚类物质及其相关酶的变化规律

以四川小叶种群体品种的一芽二叶为原料,采用传统工艺制备川红工夫,检测其茶多酚、黄酮、儿茶素、茶黄素、茶红素的含量,以及多酚氧化酶和过氧化物酶活性的变化,分析多酚类化合物含量与其形成相关酶活性之间的关系。结果表明：茶多酚和儿茶素含量在加工过程中呈现下降趋势;黄酮、茶黄素和茶红素含量在揉捻阶段显著增加,黄酮和茶黄素含量在发酵过程中较揉捻时降低;多酚氧化酶和过氧化物酶活性在揉捻阶段呈较显著下降趋势。通过相关性分析发现：茶多酚含量与多酚氧化酶（polyphenoloxidase,PPO）和过氧化物酶（peroxidase,POD）活性之间存在极显著正相关;茶黄素含量与POD活性呈极显著负相关;茶红素含量与POD活性及PPO活性分别呈极显著和显著负相关。适当延长揉捻时间和减少发酵时间,或是在发酵过程中采用提高多酚形成相关酶活性的方法,可制备出高茶黄素含量的川红工夫。     

基于SPSS空列正交设计的茶黄素动态提制工艺快速优化

以茶多酚为原料,采用动态-双相萃取法制备茶黄素。运用SPSS软件,以反应时间、多酚氧化酶浓度、水酯两相比为过程调控因素进行有空白列正交试验设计,对反应条件进行了优化分析,优化后的反应条件为:酶浓度1600U/g,水酯两相比1:0.5,反应时长60min,该反应条件下茶黄素的合成均量为846mg,粗品茶黄素组分含量为47%。     

显齿蛇葡萄叶细胞悬浮培养体系的建立及其产多酚类物质研究

显齿蛇葡萄叶富含多酚类化合物,是一种具有很高开发利用价值的新资源食品原料。以显齿蛇葡萄幼叶为外植体诱导出了2种典型的愈伤组织,通过激素优化和连续筛选获得了性状优良的愈伤组织,在此基础上建立并优化了显齿蛇葡萄叶细胞悬浮培养体系,对悬浮培养细胞中的主要多酚类物质进行了鉴定,并评价了多酚的抗氧化活性。采用超高压液相色谱飞行时间质谱 (UPLC-Q-TOF MS/MS)和高效液相色谱 (HLPC)检测技术,分别从愈伤组织和悬浮培养细胞中鉴定出了7种和10种多酚类化合物,其中原花青素B1、(+)-儿茶素、表儿茶素没食子酸酯为愈伤组织和悬浮培养细胞中共有的物质,且含量较高,其中以表儿茶素没食子酸酯含量最高,在愈伤组织和悬浮培养细胞中分别达到了5020.965μg/g和1044.725μg/g。抗氧化活性评价结果显示,悬浮培养细胞多酚提取物具有很强的抗氧化活性,对2,2-联氮-二 (3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐 (ABTS⁺)和2,2-联苯基-1-苦基肼基 (DPPH)自由基清除的IC₅₀分别为30.681μg/mL和3.685μg/mL,相同质量浓度下对DPPH自由基的清除和总还原能力均强于维生素C,其抗氧化能力主要源于表儿茶素没食子酸酯和(+)-儿茶素。希望研究可为显齿蛇葡萄细胞培养及其多酚类次生代谢产物的合成调控提供参考。     

A reliable technique to identify superior quality clones from tea germplasm

Variations in the substrate level and enzyme activity of prominent south Indian tea germplasm were studied. The content of polyphenols, catechins (substrates) and polyphenol oxidase (PPO) showed variation, which influenced the final black tea quality. The enzyme PPO occurs in tea shoots and catalyzes the reactions between catechins to form theaflavins in the presence of oxygen. The catechins mainly epicatechin (EC), epigallo catechin gallate (EGCG), epicatechin gallate (ECG) and epigallo catechin (EGC) get mixed with PPO during the oxidation process to form quality constituents like theaflavins (TF), thearubigins (TR) and high polymerized substances (HPS). Theaflavins and their fractions such as simple theaflavin, theaflavin monogallate, (TFMG), theaflavin digallate (TFDG) in black tea are the essential quality constituents that are responsible for the liquor characteristics where as TR and high polymerized substances impart colour to the liquor. As oxidation of macerated leaves proceed through different stages of tea manufacture, a decline in PPO activity, polyphenol and catechin contents were observed. Data revealed that the oxidation reaction was faster during the initial stages of oxidation. During the period, oxygen consumption was higher and declined thereafter. Ratio between the enzyme (PPO) and its substrate (catechins) were used to characterize the quality potential of tea clones. An attempt has also been made to categorize prominent tea clones as high, moderate and average quality clones based on their enzyme substrate ratio. Theaflavin content (oxidation product) of different tea clones suggests that the ratio between PPO and catechins forms an important criterion which determines black tea quality. Results obtained were compared with standard clones of known high quality (CR-6017) and moderate quality (SA-6). The study reveals that the enzyme substrate ratio can be used to identify superior quality clones from the existing tea germplasm.     

闪式提取红茶中茶黄素的工艺研究

探讨了闪式提取红茶中茶黄素的工艺。以茶黄素得率为指标,在单因素实验基础上,选取乙醇浓度、提取时间、料液比、提取次数为影响因素,利用正交试验对提取工艺进行优化。结果表明,闪式提取茶黄素的最佳工艺条件为:乙醇浓度60%,提取时间80s,料液比1:20(g/mL),提取次数2次。在此条件下,茶黄素得率为(4.98±0.05)mg/g。与传统加热回流法相比,闪式提取法得率提高7.56%,乙醇用量减少31.43%,提取时间大大缩短。闪式提取是一种快速有效提取红茶中茶黄素的方法。     

茶叶多酚氧化酶三相分离纯化及酶学性质研究

为研究一种快速高效的茶叶多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)制备方法,本试验采用三相分离法(three phase partitioning,TPP)获取茶叶PPO,并研究其酶学特性.结果表明,通过两次三相分离纯化后可获得酶比活力210.46 U/mg、纯化15.76倍、回收率8.04％的茶叶PP...     

不同金属离子对多酚氧化酶的影响

采用匀浆法从茄子中提取多酚氧化酶(PPO),以绿茶粉为底物,研究Cu2+、Mn2+、Mg2+、Ca2+、Na+、Al3+和Fe3+7种金属离子对PPO活性的影响。结果表明:Cu2+、Mn2+和Mg2+3种金属离子对PPO的活性有不同程度的促进作用,而Ca2+、Na+、Al3+和Fe3+对PPO的活性有抑制作用。其中,Cu2+浓度为3mmol/L时对PPO有激活作用,此时茶黄素总量达到7.45mg;Fe3+浓度为5mmol/L对PPO有显著抑制作用,此时茶黄素总量降低至0.26mg。     

茶提取物和纳米表没食子儿茶素没食子酸酯对6-羟基多巴胺诱导的SH-SY5Y细胞保护作用

以6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）诱导的SH-SY5Y细胞系作为帕金森病（Parkinson’sdisease,PD）体外细胞模型,探究茶提取物（L-茶氨酸、咖啡碱、茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）、茶黄素、茶色素）和两种纳米EGCG对SH-SY5Y细胞的毒性和对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞保护作用的差异,综合评价茶提取物治疗PD的潜力。结果表明：茶提取物毒性作用由弱到强为茶多酚＜L-茶氨酸＜茶色素＜咖啡碱＜茶黄素＜EGCG;保护作用由强到弱为茶黄素＞EGCG＞茶多酚＞茶色素＞咖啡碱＞L-茶氨酸;茶黄素（0.2 μg/mL）和EGCG（0.9 μg/mL）预处理6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞,细胞存活率分别为（99.59±2.24）%和（95.84±2.50）%,保护作用明显强于其他茶提取物;相较于EGCG,纳米EGCG具有毒性作用更弱和保护作用更强的特点。由此可知,茶作为一种日常饮品,具有较好地治疗PD的潜力。     

ENZYMATIC SYNTHESIS OF THEAFLAVINS AND EPITHEAFLAVIC ACID FROM TEA CATECHINS AND THEIR ANTIOXIDANT ACTIVITY

A number of in vitro and in vivo studies have demonstrated that black tea polyphenols have significant biological activities, including antioxidant, antiinflammatory and anticancer activity. The theaflavins have received attention as one of responsible components for biological activities of black tea. However, little information is available for the biological activity of individual theaflavins and minor components in black tea. In the present study, theaflavins and epitheqflavic acid were synthesized from their parent flavan-3-ols catechins using an enzymatic oxidation method and employing crude polyphenol oxidase from banana fruit. The compounds were isolated using column chromatographic methods, and their structures confirmed by ¹H-NMR and APCI-MS. The peroxyl radical scavenging activities of theaflavins and epitheaflavic acids were measured using a modified ORAC method. The results indicated that theaflavins have higher peroxyl radical scavenging activity than EGCG. The hierarchy of radical scavenging activity of theaflavins, epitheaflavic acid and related compounds were in the order of: theaflavin-3, 3'-digallate ∼ theflavin-3-gallate ∼ theaflavin-3'-gallate ∼ theaflavin > epitheaflavic acid > EGCG > purpurogallin.     

植物源多酚氧化酶氧化儿茶素形成茶黄素和聚酯型儿茶素的研究

目的:筛选出催化儿茶素氧化形成TFs和TSs的最佳酶源。方法:以丰水梨、贡梨、香梨、红富士苹果、茶鲜叶、漆酶等作为试验材料,研究不同来源PPO酶活性,并比较其对TFs和TSs合成的影响。结果:丰水梨PPO酶活性最高,为621.4 U/(min·g),是茶鲜叶酶活性的2.8倍。PPO合成TFs能力及质量浓度从大到小依次为丰水梨(0.228 mg/mL)、红富士苹果(0.011 mg/mL)、漆酶(0.008 mg/mL),其中丰水梨PPO有利于TF-3'-G和TFDG的合成,而其他PPO则有利于TF的合成;PPO合成TSs能力及质量浓度从大到小依次为:丰水梨(0.958 mg/mL)、漆酶(0.158 mg/mL)、红富士苹果(0.100 mg/mL),丰水梨PPO有利于TSA和TSB的合成,红富士苹果PPO、漆酶则有利于TSA和TSC的合成;在丰水梨、红富士苹果、漆酶这3种酶的催化作用下,TSs的合成量均高于TFs。结论:丰水梨PPO具有比红富士苹果、漆酶更强的合成TFs和TSs的能力。     

六堡茶发酵前后多酚氧化酶的分离及酶学性质

为探索六堡茶发酵过程中多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)的来源及其酶学活性,采用不同pH值缓冲液、保护剂和液料比对发酵前后六堡茶PPO进行提取,通过(NH4)2SO4沉淀、透析和Sephadex?G-100凝胶过滤层析纯化PPO.结果表明:从六堡茶中分离纯化得到2个PPO同工酶,分子质量分别为5...