转谷氨酰胺酶的膜固定化研究

以臭氧活化后的聚丙烯微孔膜为载体,并以丙烯酸为单体、戊二醛为交联剂固定转谷氨酰胺酶。研究了臭氧活化时间、接枝反应时间、温度、单体浓度、莫尔盐浓度对接枝率的影响,并对固定化条件进行研究。确定了最佳固定化条件为：己二胺浓度15%,胺烷基化温度50℃、时间120min,戊二醛浓度3%,交联温度30℃、45min,酶浓度10mg/mL,固定化时间20h。此条件下载酶量为30.23mg/g膜,酶活力可达16.9U/g膜。     

聚丙烯膜固定化转谷氨酰胺酶的条件优化

研究了转谷氨酰胺酶在聚丙烯微孔膜上固定化的影响因素。采用响应面分析方法对紫外接枝反应条件进行优化,确定了最佳的膜固定化方法。结果表明,照射距离为10.1 cm,单体浓度为18.85%,二次照射时间为21.4 min时,接枝率可达34.62%。转谷氨酰胺酶固定化的条件为:己二胺质量分数为20%,胺烷基化时间90 min,胺烷基化温度50℃;戊二醛浓度2%,戊二醛作用时间40 min;酶晶体溶液质量浓度15 mg/mL,4℃条件下固定化时间为24 h。     

聚丙烯膜固定化转谷氨酰胺酶的条件优化

研究了转谷氨酰胺酶在聚丙烯微孔膜上固定化的影响因素。采用响应面分析方法对紫外接枝反应条件进行优化,确定了最佳的膜固定化方法。结果表明,照射距离为10.1 cm,单体浓度为18.85%,二次照射时间为21.4 min时,接枝率可达34.62%。转谷氨酰胺酶固定化的条件为:己二胺质量分数为20%,胺烷基化时间90 min,胺烷基化温度50℃;戊二醛浓度2%,戊二醛作用时间40 min;酶晶体溶液质量浓度15 mg/mL,4℃条件下固定化时间为24 h。     

高碘酸钠氧化法固定化磷脂酶A1的研究

研究了高碘酸钠氧化法在纤维素滤纸膜载体上固定化磷脂酶A₁的最佳条件。结果表明,以固定化酶活力为指标,当高碘酸钠浓度为0.15mol/L,活化80min,与浓度为0.05g/mL酶的磷酸盐缓冲溶液（pH为5.8）于戊二醛浓度0.4%、温度4℃交联4h,获得的固定化磷脂酶A₁酶活最高为4.8U/cm²。固定化酶膜的酶学性质为:最适温度35℃;最适pH为9.0。与游离酶相比,pH向碱性偏移1.0;经7次重复使用后,固定化酶膜活力为原酶活的65%以上。SEM结果显示,经高碘酸钠氧化后的纤维素滤纸膜能较好地固定磷脂酶A₁。     

高碘酸钠氧化法固定化脂肪酶的研究

研究了以醋酸纤维素/聚丙烯复合膜为载体的高碘酸钠氧化法固定化脂肪酶的固定化条件,采用响应面分析法对固定化条件进一步优化,并对固定化酶膜的酶学性质进行了讨论。结果表明,以固定化酶活力为指标,当高碘酸钠浓度为0.15 mol/L,活化为60 min时,浓度为0.013 g/mL的酶液与pH 8.0的磷酸盐缓冲溶液于戊二醛质量分数0.24%,温度4℃下,进行交联反应,反应3.1 h后,获得的固定化酶活最高,为0.52 U/cm2。固定化酶膜的酶学性质为:固定化酶最适温度35℃,最适pH为9.0。     

介孔分子筛SBA-15固定糖化酶的研究

以介孔分子筛SBA-15为载体,戊二醛为交联剂,对糖化酶进行了固定化.考察固定化温度、时间、给酶量、pH值以及戊二醛浓度等因素对固定化效果的影响,并对固定化酶的酶学性质进行了研究.结果表明,糖化酶最佳固定化条件是:酶与载体比例50mg/g、固定化温度25℃、固定化时间4h、pH 5.1、戊二醛体积分数7.5%,此条件下固定化酶活力回收率为56%.固定化酶的最适作用温度为70℃,比游离酶高10℃.最适作用pH 4.1,比游离酶降低0.5个单位.米氏常数Km由原来的0.032mol/L降为0.022mol/L.用超声波对固定化酶进行处理,其酶活力提高了18%.所得最佳超声参数是:超声功率100W,温度70℃,时间5min.     

共固定化酶的制备及其在奶香基料制备中的应用

研究了共固定化条件对共固定化酶活力的影响。结果表明,共固定化的最佳条件是:磷酸缓冲液p H 6.5,海藻酸钠浓度1.5%,总加酶量30 mg/g海藻酸钠,CaCl_2浓度4.0%,共固定化温度30℃,共固定化时间30 min。此时共固定化酶的固定化率为98.0%,操作稳定性良好。     

戊二醛交联法固定扩展青霉脂肪酶的研究

以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂,采用交联吸附法固定扩展青霉脂肪酶。通过单因素试验和正交试验考察固定化主要因素对固定化酶活力的影响,优化固定化条件。结果表明,海藻酸钠浓度为3%、氯化钙为1%、戊二醛浓度为2.5%的条件下,酶浓度为0.03g/mL,pH为10.0,固定温度为40℃,固定时间为30min,该条件下固定化酶活最高为22895u/g,酶活回收率达到67.57%。在有机体系中,固定化脂肪酶的酯化能力明显高于游离态脂肪酶。在重复利用9次后,固定化脂肪酶的酶活降为初始状态的50%。     

柔性固定化木瓜蛋白酶的制备及在酶解波纹巴非蛤中的应用

在壳聚糖膜的表面接上分子链较长的双醛淀粉作为柔性固定化酶的载体,将木瓜蛋白酶固定在该载体上制成柔性固定化木瓜蛋白酶,并应用于酶解波纹巴非蛤制备小分子肽。通过考察温度、pH 值、加酶量和固定化时间等条件对柔性固定化木瓜蛋白酶的酶活、酶活回收率的影响,确定最优固定化条件。结果表明：双醛淀粉用量0.8mg/g 壳聚糖、柔性固定化酶温度25℃、柔性固定化酶时间20h、加酶量40mg/g 壳聚糖、pH8.0 条件下所得的固定化酶酶活最高,酶活回收率63.35%。将该柔性固定化酶在酶解温度40℃、pH7.0、加酶量1.0%、酶解时间4h条件下制备波纹巴非蛤小分子肽,产率为3.4055%。     

羧甲基纤维素固定化胰凝乳蛋白酶的稳定性研究

研究以羧甲基纤维素作为载体,通过接枝后与胰凝乳蛋白酶进行偶联,通过正交实验测得酶固定化特性的最佳方案为:接枝温度50℃,接枝时间10min,酶偶联温度20%,酶偶联时间4h.所得固定化酶的热稳定性提高5℃,最适pH提高到8-9,具有连续操作性,在2℃贮存放置20d后酶活仍在75%以上.