脱脂小麦胚芽酶解及其水解物抗氧化性研究

本文采用中性蛋白酶和flavourzyme分别水解脱脂小麦胚芽制取小麦胚芽水解物,研究两种不同酶对麦胚蛋白水解速率的影响,同时通过测定水解物清除DPPH自由基的能力和还原能力研究麦胚蛋白水解物的抗氧化性。结果表明,中性蛋白酶对麦胚蛋白的水解速率明显高于flavourzyme;种酶的水解产物均具有清除DPPH自由基活性和还原能力。     

脱脂小麦胚芽酶解及其水解物抗氧化性研究

本文采用中性蛋白酶和flavourzyme分别水解脱脂小麦胚芽制取小麦胚芽水解物,研究两种不同酶对麦胚蛋白水解速率的影响,同时通过测定水解物清除DPPH自由基的能力和还原能力研究麦胚蛋白水解物的抗氧化性.结果表明,中性蛋白酶对麦胚蛋白的水解速率明显高于flavourzyme;两种酶的水解产物均具有清除DPPH自由基活性和还原能力.     

一种筛选血管紧张素转换酶抑制肽的方法

实验建立一种从蛋白水解物中快速高效鉴别血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)的方法：先对蛋白按照酶解位点进行序列搜寻,建立一个样品肽库;在量效结构关系(QSAR)研究的基础上对样品库中的肽的ACE抑制活性进行预测,然后化学合成目标肽及测定活性;必要时用现代分析技术确证蛋白水解物中目标肽的存在。用此方法对油菜、大米、小麦蛋白水解物中三肽ACE抑制活性进行研究,发现IC50在10μmol/L以下的三肽多达34条,选择了11条活性较高的肽合成验证,最后发现潜藏在油菜Cruciferin BNC1 (P33523)蛋白序列347～349的LRL活性最高,IC50达到3.42μmol/L,且具有较好的稳定性。抑制动力学研究表明,LRL属于竞争性抑制剂;油菜蛋白胃蛋白酶水解物进行分子质量分段,取分子质量小于1000D部分进行高效液相色谱(HPLC)分析发现有LRL。     

ACE抑制活性物质分离纯化初步研究

采用超滤、凝胶过滤色谱对醋蛋酶解液进行初步分离纯化,研究结果表明,醋蛋酶解液经超滤浓缩后水解物的IC50降低了18.8%,对凝胶色谱的洗脱条件进行优化,洗脱液为去离子水、样品浓度为30%时分离效果较好,并分别对醋蛋白和醋蛋黄酶解物分离纯化,得到高活性组分C(IC50=0.102 mg/mL)和Ⅱ(IC50=0.096 mg/mL)。     

酪蛋白水解物的酶法修饰与ACE抑制活性变化

利用枯草杆菌碱性蛋白酶水解酪蛋白制备酪蛋白水解物,其水解度为11.2%,IC50为47.1μg/mL。再应用相同的酶对酪蛋白水解物进行类蛋白反应修饰,考察底物浓度、温度和酶添加量对类蛋白反应的影响,并制备5个不同的修饰产物测定其ACE抑制活性和IC50值。结果表明,修饰产物的ACE抑制活性随修饰程度(游离氨基减少量)的增加而提高,并且都高于未经修饰的酪蛋白水解物。当游离氨基减少量为154.65μmol/g(蛋白)时,修饰产物的IC50值可降至0.6μg/mL。毛细管电泳分析结果显示类蛋白修饰后水解物的多肽组成情况发生明显变化。研究结果证明酪蛋白水解物的ACE抑制活性可以通过类蛋白反应的修饰作用而提高。     

酪蛋白水锯物的酶法修饰与ACE抑制活性变化

利用枯草杆菌碱性蛋白酶水解酪蛋白制备酪蛋白水解物,其水解度为11.2%,IC50为47.1μg/mL.再应用相同的酶对酪蛋白水解物进行类蛋白反应修饰,考察底物浓度、温度和酶添加量对类蛋白反应的影响,并制备5个不同的修饰产物测定其ACE抑制活性和IC50值.结果 表明,修饰产物的ACE抑制活性随修饰程度(游离氨基减少量)的增加而提高,并且都高于未经修饰的酪蛋白水解物.当游离氨基减少量为154.65 μmol/g(蛋白)时,修饰产物的IC50值可降至0.6 μg/mL.毛细管电泳分析结果显示类蛋白修饰后水解物的多肽组成情况发生明显变化.研究结果证明酪蛋白水解物的ACE抑制活性可以通过类蛋白反应的修饰作用而提高.     

双酶水解小麦胚芽及水解物的抗氧化活性研究

本文研究双酶相继水解脱脂小麦胚芽及对水解物抗氧化活性的影响。实验结果表明,与碱性蛋白酶和Protamex组合及碱性蛋白酶和风味蛋白酶组合相继水解得到的水解物相比,用碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)和胰蛋白酶相继水解得到的水解物的清除DPPH自由基能力和还原能力最大。上述三组不同酶组合的水解物的抗氧化活性均高于碱性蛋白酶单酶水解脱脂小麦胚芽的水解物。小麦胚芽双酶水解物的抗氧化活性与水解物浓度有关,增加水解物浓度可有效提高其清除DPPH自由基能力和还原能力。     

分离纯化醋蛋水解物制备降血压肽的研究

经胃蛋白酶-胰酶复合酶体系水解醋蛋液得到的水解物对血管紧张素转化酶有较强的抑制活性(IC50=0.125mg/mL),醋蛋水解物经Bio-gelP-2纯化、半制备型RP-HPLC分离,得到对ACE有强烈抑制作用的组分Y,Y经电喷雾质谱、保温后确定其序列为Arg-Gly-Ala-Ala-Gly-Ala-Phe的多肽类物质。     

从麦胚蛋白质中制备降血压肽的研究

用超临界CO2对小麦胚芽脱脂，碱溶酸沉淀法提取麦胚蛋白，用8种蛋白酶分别进行单一酶和复合酶水解麦胚蛋白生产降血压肽，用高效毛细管电泳(HPCE)测定其活性。碱性蛋白酶生产水解物的活性最大，其对麦胚蛋白作用的最适pH为9，温度为50～55℃，加酶量为24AU／kg，水解度为16．5％时所得水解物对ACE有强烈抑制用。     

两种蛋白水解物的Fenton反应修饰与抗氧化活性变化

利用碱性蛋白酶分别水解大豆分离蛋白、酪蛋白,对两种水解物进行Fenton反应修饰.用紫外吸收及Lowry法评价修饰反应对两种水解物的影响,结果表明,修饰后产物与原水解物显著不同,表明修饰反应对水解物组成产生影响.抗氧化活性分析发现,大豆分离蛋白水解物的修饰产物的IC50从2.92mg/mL降低至1.36～2.28mg/mL,酪蛋白水解物的修饰产物的IC50从2.80mg/mL降低至0.89～2.12mg/mL,表明Fenton反应可提高修饰产物对DPPH自由基的清除能力.     

杨梅素及其类似物抗氧化与乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

目的:探讨杨梅素、杨梅苷及二氢杨梅素的抗氧化和乙酰胆碱酯酶抑制活性。方法:采用DPPH自由基清除和乙酰胆碱酯酶抑制高通量筛选模型进行研究。结果:杨梅素、杨梅苷和二氢杨梅素清除DPPH自由基的IC50值分别为18.34、28.89、10.70μg/mL,三种化合物的抗氧化活性均强于阳性药芦丁(IC50=31.32μg/mL),其中二氢杨梅素还强于VC(IC50=14.69μg/mL);在质量浓度为0.25mg/mL时,杨梅素、杨梅苷和二氢杨梅素对乙酰胆碱酯酶的抑制率分别为:30.66%±4.05%、38.48%±1.98%、78.81%±2.23%,其中二氢杨梅素对乙酰胆碱酯酶抑制作用较显著,其IC50值为1546±47.05μmol/L。结论:杨梅素、杨梅苷、二氢杨梅素均具有显著的DPPH自由基清除能力,本文首次报道二氢杨梅素具有较好的乙酰胆碱酯酶抑制活性,值得进一步深入研究。     

Inhibitory Effects of 150 Plant Extracts on Elastase Activity, and Their Anti-inflammatory Effects

The inhibitory effects of 150 medicinal plants on elastase activity were investigated. Among the 150 plants, six plant extracts (final concentration 1 mg/ml in methanol) exhibited more than 65% of inhibition of elastase activity. The inhibitory effects of six active plants, including Areca catechu (IC50, 42.4 mug/ml), Cinnamonum cassia (IC50, 208.7 mug/ml), Myristica fragrans (IC50, 284.1 mug/ml), Curcuma longa (IC50, 398.4 mug/ml), Alpinia katsumadai (IC50, 465.7 mug/ml) and Dryopteris cassirrhizoma (IC50, 714.4 mug/ml) on the activity of human leukocyte elastase, hyaluronidase and lipid peroxidation were examined. In the lipid peroxidation assay, using the TBA method, three of the six plants, including Curcuma longa (IC50, 45.5 mug/ml), Areca catechu (IC50, 51.0 mug/ml) and Alpinia katsumadai (IC50, 116.3 mug/ml) exhibited more than 70% inhibition at the concentration of 1 mug/ml, but only one plant, Areca catechu (IC50, 563 mug/ml) showed high inhibitory effect on hyaluronidase activity. The results suggest that medicinal plants showing several biological activities may be potent inhibitors of the anti-ageing process in skin. This property might be useful for application in cosmetics.     

猪股骨头胶原蛋白降血压肽的分离纯化

依次采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对猪股骨头胶原蛋白进行酶解,制备降血压肽。为了得到高活性、高纯度的降血压肽,依次采用超滤、离子交换层析、凝胶层析对酶解液进行分离纯化,采用体外检测方法测定各分离产物对血管紧张素转化酶活性的半抑制浓度（IC50值）。结果显示：猪骨酶解液经超滤分离获得分子质量小于5 ku的组分对血管紧张素转化酶的抑制活性最高,IC50值为1.400 2 mg/mL;该组分进行离子交换层析分离得4个组分,其中组分2的活性最高,IC50值为0.488 4 mg/mL;再将组分2进行凝胶层析分离得4 个组分,其中组分2-2的活性最高,IC50值为0.195 3 mg/mL。     

大果榕果实乙醇提取物抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶和乙酰胆碱酯酶抑制活性

研究大果榕果实的多酚含量及其抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶和乙酰胆碱酯酶抑制活性,为其进一步开发利用奠定基础。以采自海南保亭七仙岭的大果榕果实为实验材料,用体积分数65%的乙醇提取大果榕果实多酚,采用Folin-酚法测定总酚含量。对获得的大果榕果实多酚进行1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS)自由基、羟自由基(·OH)清除率以及α-葡萄糖苷酶抑制活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性测定。结果表明:大果榕果实多酚含量较高,达1.92 mg/g(以干质量计),其对DPPH自由基、ABTS+·和·OH均具有显著的清除活性,且呈质量浓度依赖性,IC50值分别为141.25、91.20、45.71μg/m L;大果榕果实多酚对α-葡萄糖苷酶抑制活性强于阳性对照阿卡波糖,且呈现明显的质量浓度依赖性,IC50值为102.33μg/m L;同时大果榕果实多酚对乙酰胆碱酯酶也具有一定的抑制活性,IC50值为4.9 mg/m L。研究结果表明大果榕果实多酚具有良好的抗氧化性、α-葡萄糖苷酶抑制活性和一定的乙酰胆碱酯酶抑制活性。     

从醋蛋水解物中分离纯化ACE抑制活性物质

经胃蛋白酶-胰酶复合酶体系水解醋蛋液得到的水解物对血管紧张素转化酶有较强的抑制活性(IC_(50)= 0.125 mg/mL),醋蛋水解物经Bio-gel P-2纯化、半制备型RP-HPLC分离,得到对ACE有强烈抑制作用的组分X,X经电喷雾质谱、保温后,确定其是序列为Trp-Ala-Ala-Gly-Trp的多肽类物质。     

澳洲坚果青皮不同极性溶剂分步提取物功能成分与抗氧化活性及其相关性分析

采用80%（体积分数,下同）乙醇超声提取澳洲坚果青皮,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇4 种不同极性溶剂对其提取物进行分步萃取,剩余为水溶解物,分别得到80%乙醇提取物、石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物与水溶解物6 种溶剂提取物,测定其总酚、黄酮、多糖等主要功能成分质量分数与抗氧化活性,并分析其相关性。结果表明：总酚和黄酮质量分数在澳洲坚果青皮乙酸乙酯提取物中均最高,分别为（40.36±0.48）%与（41.68±0.93）%,多糖质量分数在正丁醇提取物中最高,为（22.08±2.09）%。澳洲坚果青皮不同极性溶剂分步提取物具有较强的2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）阳离子自由基清除能力与较高的还原力,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基与超氧阴离子自由基拥有一定的清除能力。其中,乙酸乙酯提取物对DPPH自由基、ABTS阳离子自由基的清除能力最强,还原力最高,其半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）分别为0.67、0.05、0.09 mg/mL。正丁醇提取物对超氧阴离子自由基的清除能力最强,其IC50为0.08 mg/mL,相同质量浓度下优于芦丁。通过对各指标进行皮尔逊相关性分析得出,澳洲坚果青皮不同极性溶剂分步提取物对DPPH自由基清除能力、ABTS阳离子自由基清除能力与还原力均与其总酚、黄酮、多糖质量分数呈极显著正相关（P＜0.01）,对超氧阴离子自由基的清除能力与其多糖质量分数呈极显著正相关（P＜0.01）。应用多元回归分析建立了澳洲坚果青皮不同极性溶剂分步提取物DPPH自由基清除能力（Y1）、超氧阴离子自由基清除能力（Y2）、ABTS阳离子自由基清除清除能力（Y3）、还原力（Y4）与其功能成分（总酚（X1）、黄酮（X2）、多糖（X3）与皂苷及其他成分（X4））质量分数之间的线性回归方程,分别为Y1＝7.634 4－0.071 0X1＋0.170 2X2＋0.227 6X3－0.013 3X4、Y2＝29.024 5－0.405 0X1＋0.320 0X2＋0.597 2X3、Y3＝40.305 6＋0.188 8X1＋0.030 4X4与Y4＝0.298 2＋0.004 5X2＋0.006 0X3。结论：研究为开发利用澳洲坚果青皮资源提供一定的技术依据。     

新霉素的直接竞争酶联免疫分析法

首先用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),合成包被原OVA-NEO,SDS-PAGE 进行鉴定;用高碘酸钠法连接辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),制备酶标抗原NEO-HRP并建立直接ELISA检测方法。通过一系列参数的优化,包括包被溶液、封闭溶液、竞争时间、抗体稀释液、pH值、反应温度、显色时间等,最终得到其IC20(抑制率为20%时的标准溶液质量浓度)＜1ng/mL、半数抑制量(IC50)为7.6ng/mL,线性方程为y =－0.2798x＋0.7456,R2=0.991。直接ELISA总耗时只需大约1h。     

酪朊酸钠制备ACE抑制肽的研究

采用商业化的胰蛋白酶对底物浓度为10％的酪朊酸钠进行可控酶解，将酶解液的上清液经截留分子量为10ku的超滤膜分离后利川紫外分光光度法测定各组分ACE体外抑制活性，结果表明酪朊酸钠的胰蛋白酶酶解液具有较强的ACE抑制活性，超滤分离可提高产品的ACE体外抑制活性，为开发新一代降血压保健食品提供广阔的前景。     

Angiotensin I-converting enzyme inhibitory activity of peptides derived from egg white proteins by enzymatic hydrolysis

The hydrolysis of crude egg white with pepsin, trypsin, and chymotrypsin produced peptides with angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitory properties. These peptides were mainly derived from the proteolysis of ovalbumin. The most active hydrolysates were obtained after treatment with pepsin (50% inhibitory concentration [IC50], 55.3 microg/ml), with the fraction having a molecular mass lower than 3,000 Da giving the highest ACE inhibitory activity (IC50, 34.5 microg/ml). Nine subfractions were collected from the fraction with a molecular mass lower than 3,000 Da using semipreparative reversed-phase high-performance liquid chromatography. Considerable ACE inhibitory activity (IC50 < 40 microg/ml) was found in three of them. These subfractions were analyzed by reversed-phase high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, and 14 peptides were identified. These sequences were synthesized, and their ACE inhibitory activities were measured. Among the identified peptides, two novel sequences with potent ACE inhibitory activity were found. The amino acid sequences of these inhibitors were identified as Arg-Ala-Asp-His-Pro-Phe-Leu and Tyr-Ala-Glu-Glu-Arg-Tyr-Pro-Ile-Leu and showed IC50 values of 6.2 and 4.7 microM, respectively.     

酶解-膜分离组合制备ACE抑制肽

测试了膜分离操作压力、温度、pH值、料液体积浓度等操作参数对酶活力、血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽分离的影响,并建立分段酶解、分级膜分离组合模式实现从扇贝裙边酶解产物中分离ACE抑制肽.结果表明:膜分离操作操作参数对酶活力、ACE抑制肽分离均有较大影响;二段酶解-二级膜分离组合模式制备及分离ACE抑制肽的得率最高,为5.73%,其IC50为0.088mg/ml;一段酶解-二级膜分离组合模式制备及分离ACE抑制肽的得率为3.19%,其IC50为0.081mg/ml;一段酶解-单级膜分离组合模式制备及分离ACE抑制肽的得率只有2.31%,其IC50为0.078mg/ml.