瑞士乳杆菌产生的细菌素的抑菌活性研究

主要通过研究对从建昌板鸭发酵过程中分离瑞士乳杆菌产生细菌素的抑菌活性,考察不同温度,不同p H,不同种类酶作用对细菌素抑菌活性的影响。结果证明:蛋白酶能一定程度抑制细菌素的抑菌活性,且胰蛋白酶的抑制程度最强;该细菌素的抑菌活性对温度的耐受力强,即使在100℃处理后仍具有抑菌活性,在-20℃条件下保存时抑菌活性最强;该细菌素p H在1.5~4.0时具有抑菌活性,在p H为1.5时抑菌活性最强。     

乳酸片球菌细菌素的分离纯化及理化性质

将乳酸片球菌接种于MRS培养基,37℃静置培养17h产生细菌素。根据细菌素在pH6.0时与菌体的吸附力最强,pH2.0时吸附力最弱,通过调节pH和离心来分离纯化细菌素,得率为22.80%,比活为4.526×104AU/mg;细菌素的理化性质实验表明,细菌素经120℃处理20min仍保留70.08%的活性;在pH2～9范围内20℃处理3h抑菌活性稳定,当pH≥9时活性逐渐降低;经胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和蛋白酶K处理后均无抑菌活性。实验表明,该细菌素耐热、耐酸、耐碱,对蛋白酶敏感,具有开发为安全、天然的食品防腐剂的良好前景。     

藏灵菇中乳酸菌的鉴定及细菌素生物特性研究

从藏灵菇中筛选出一株具有抑菌活性的菌株,采用生理生化鉴定、16S rDNA序列分析确定菌种属性,采用硫酸铵沉淀法对该菌所产生的细菌素进行粗提取并对其抑菌活性和稳定性进行研究。结果显示,该菌为植物乳杆菌,除去有机酸和过氧化氢的影响,该菌产生的细菌素具有较好的抑菌活性。该菌所产的细菌素热稳定性较好,在100℃处理30 min抑菌活性降至54%,且对酸碱不敏感,在p H3~9的范围内都具有抑菌活性,在p H为3.82时抑菌活性最佳,对胃蛋白酶、α-凝乳酶有较强的耐受性,对蛋白酶K较敏感,在37℃下处理2 h抑菌活性为处理前活性的47.36%。对植物乳杆菌产细菌素的分析证明该菌产的细菌素在食品加工防腐中具有潜在的使用价值。     

唾液乳杆菌LH1F所产细菌素的纯化及其生物学特性研究

本文对唾液乳杆菌(Lactobacillus Salivarius)LH1F发酵液中的抑菌物质的特性进行了研究,在排除菌体细胞、有机酸、过氧化氢干扰及经胰蛋白酶、胃蛋白酶处理后,确定抑菌成分为肽类细菌素,然后经过60%硫酸按盐析及超滤初步纯化后,对其生物学特性进行了研究。结果表明,唾液乳杆菌LH1F所产的细菌素具有良好的热稳定性,121℃处理30 min仍保留75.5%的抑菌活性;在p H2.0~p H5.0条件下稳定;对胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K敏感;该细菌素具有较广的抑菌谱,对供试的多种革兰氏阳性菌(G+)及革兰氏阴性菌(G-)具有明显的抑制作用,为作为天然食品防腐剂的进一步研究奠定基础。     

戊糖乳杆菌LS1细菌素的分离纯化及性质鉴定

由酸菜水分离出的菌株LS1经16S rRNA鉴定为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)。其细菌素首先通过硫酸铵沉淀取上清液经Sephadex G-10柱色谱脱盐并纯化,然后SP Sepharose Fast Flow中度纯化,最后Superdex 30Increase精细纯化。纯化后比活力为1 238.1 AU/mg,是原始细菌素活性的110.5倍。根据液相色谱-串联质谱仪测定细菌素分子质量为1 123.8 Da,氨基酸序列为ACDFCFCGMK。戊糖乳杆菌素Pentocin LS1显示出对部分革兰氏阴性和阳性食品腐败菌的抑菌活性。此外,100℃加热15 min仍保留80.2%的抑菌活性,在pH 2.0～8.0范围内具有较强活性,对蛋白水解酶敏感,对淀粉酶、脂肪酶及过氧化氢酶不敏感,部分化学试剂也对其活性无明显影响。结果表明,戊糖乳杆菌素LS1在食品防腐方面具有潜在应用价值。     

戊糖乳杆菌素pentocin LPEM818的初步纯化及特性研究

对戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPEM818所产戊糖乳杆菌素(pentocin)LPEM818进行了初步纯化,并对其生物学特性进行了研究。结果表明,采用80%硫酸铵沉淀和Sephadex G-25凝胶层析分离纯化后,细菌素的纯化倍数为11.09倍,回收率为6.4%;该细菌素在pH 2.0～8.0条件下稳定,121℃加热15 min保留84.52%的抑菌活性;对胰蛋白酶和蛋白酶K敏感;该细菌素的作用方式为杀菌;对供试的部分革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)具有较强抑制作用,因其抑菌谱较广,对多数致病菌和食品腐败菌有较好抑菌作用,所以具有作为食品生物防腐剂的潜在应用价值。     

嗜酸乳杆菌产细菌素的提取及其生物特性研究

以嗜酸乳杆菌为研究对象,通过响应面实验和生物学方法,对该菌细菌素产生条件、细菌素定位和稳定性进行研究。结果表明:该菌产生细菌素的最适培养条件为:培养温度38℃、初始p H7.0、培养时间18 h;在嗜酸乳杆菌发酵液中提取的细菌素具有抑制大肠杆菌生长的作用,主要存在于细胞外;该菌产生的细菌素在40~70℃保持较高的活性;在蛋白酶K、胃蛋白酶和胰蛋白酶处理后,抑菌活性显著下降;在p H3.0~10.0之间具有抑菌活性;在紫外照射时间0.25~1 h之间,活性较稳定。此研究结果对该菌产细菌素的分离鉴定及应用提供了重要参考。     

植物乳杆菌JLA-9产细菌素的分离纯化

将来源于东北传统发酵酸菜中的植物乳杆菌JLA-9产的细菌素进行分离纯化,首先利用饱和度为80%的硫酸铵溶液对发酵上清液进行沉淀粗分离。复溶后利用Sephadex LH-20进行凝胶层析纯化,之后采用Hitrap QFF进一步进行离子交换层析纯化,利用反相高效液相色谱(Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography,RP-HPLC)C_(18)柱进行最终纯化,得到单一活性抑菌组分,说明细菌素得到基本纯化,经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF/MS)确定该细菌素的分子质量约为0.9 kDa左右。采用琼脂扩散法测定了细菌素对常见的食源性致病菌和腐败菌的抑菌效果,结果显示该细菌素具有较好的抑制作用。     

产Ⅱa类细菌素乳酸菌的筛选、鉴定与生物学特性的研究

使用牛津杯筛选法从发酵泡菜中筛选到1株对大肠杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌和米曲霉具有抑制作用的乳酸菌BC-3,排除有机酸、H2O2干扰及蛋白酶处理失活,确定了抑菌物质为细菌素,发现该细菌素在pH5.0～12.0的条件下都有抑菌活性;在100℃热处理20min后活性基本不变。通过生理生化试验对该菌株进行了初步鉴定,结果显示,BC-3菌株归属为屎肠球菌(Entorococcus faecium),根据细菌素的一般分类原则将该细菌归类为IIa类细菌素。     

产类细菌素乳酸菌筛选及类细菌素的特性

从泡菜中分离到一株产生类细菌素的乳酸菌,通过双层平板扩散试验测试这种类细菌素的抑菌活性,并且研究其部分生物学特性.经形态特征、生理生化特征和API试剂条鉴定,该菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum).产生的类细菌素对所试菌株具有明显的抑制作用,排除有机酸、过氧化氢和糖类的干扰后,仍有抑菌活性.这种类细菌素对热、酸碱稳定,微量的K+,Mn2+,Mg2+能增强其抑菌活性,Fe2+和Cu2+能减弱活性;可被4种蛋白酶失活,表明这种类细菌素是一种蛋白质活性物质.该类细菌素的作用方式是杀菌,抑菌谱广,可抑制多种革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和真菌的生长.     

拮抗阪崎肠杆菌乳酸菌的筛选鉴定及抑菌特性

阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）是引起新生儿败血症、脑膜炎和坏死性小肠结肠炎的条件致病菌,感染后死亡率高达80%。实验采用双层琼脂扩散法从淡水鱼肠道（19 株）和泡菜（7 株）中筛选出1 株来源于鲤鱼肠道的对Enterobacter sakazakii（106 CFU/mL）具有较强拮抗作用的乳酸菌菌株LY-4。结果表明,抑菌活性物质存在于乳酸菌无细胞上清液（cell free supermatant,CFS）中,抑菌最佳培养时间为28 h。CFS经胃蛋白酶处理可完全丧失抑菌活性,中性蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后抑菌活性降至76.44%和54.38%,对α-淀粉酶不敏感;在pH 3.0～4.5范围内保持抗菌活性稳定;经40～80 ℃范围内处理2 h后其拮抗活性基本不变,100 ℃和121 ℃处理2 h后活性降至79.57%和75.71%。初步判定菌株LY-4产生的抑菌物质为非糖基化类细菌素,并筛选出初步纯化抑菌物质的最佳萃取剂为乙酸乙酯,粗提物的最小抑菌浓度为6.0 mg/mL。经生理生化和16S rDNA鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。     

源自泡菜的植物乳杆菌产新型广谱抑菌细菌素的特性分析

筛选对食源性致病菌和腐败菌有特异性抑制作用的产细菌素乳酸菌菌株,并研究细菌素的特性,为其在食品防腐中的应用提供参考。从分离自泡菜的112 株乳酸菌中反复筛选得到1 株产细菌素（BacH32）菌株（Hlh32）,经鉴定菌株Hlh32为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,其在35 ℃ MRS培养基中发酵至稳定期即18～24 h达到最大BacH32产量（对金黄色葡萄球菌的抑菌活性达到1 850 AU/mL）。通过硫酸铵盐析、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-15凝胶过滤层析、制备型高效液相色谱等方法进行纯化。Trinice十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳结果显示BacH32分子质量为6.7 kDa,与文献报道的植物乳杆菌细菌素分子质量有显著差异。细菌素BacH32对蛋白酶敏感,而脂肪酶、α-淀粉酶和β-淀粉酶对其无影响,表明BacH32为蛋白质。BacH32在pH 2～9的环境下孵育4 h,在37、60、80、100 ℃保持30 min或121 ℃保持15 min仍能保持较好抑菌活性。细菌素BacH32对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有广谱抑菌活性,对真菌也有一定的抑菌活性。向培养至对数初期的金黄色葡萄球菌中添加BacH32,菌体生长完全受到抑制。以上特性表明植物乳杆菌Hlh32合成的细菌素BacH32有潜力作为天然食品防腐剂在食品中使用。     

乳酸乳球菌乳亚种NCU036018细菌素的分离纯化及其抗菌机制

从自然发酵泡菜中筛选到1 株对金黄色葡萄球菌具有抑制作用的乳酸菌,经16S rDNA和生理生化实验鉴定其为乳酸乳球菌乳亚种（Lactococcus lactis subsp. lactis）并命名为NCU036018。NCU036018发酵上清液中的抑菌物质对胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K、α-糜蛋白酶敏感,而对胃蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶以及过氧化氢酶不敏感,在pH 2.0～10.0、温度50～100 ℃的范围内分别保留了70%和90%以上的抑菌活性。随后通过硫酸铵盐析、超滤、阳离子交换层析对发酵上清液抑菌成分进行分离纯化,将得到的细菌素命名为乳球菌素036018,其分子质量在14.4～20 kDa之间,最小抑菌浓度为0.50 mg/mL。乳球菌素036018能有效降低金黄色葡萄球菌生物膜的形成率,损坏细胞表面形态、破坏细胞膜的通透性,从而抑制甚至杀死细胞。将乳球菌素036018添加至牛奶中,发现其具有显著抑制金黄色葡萄球菌生长的效果,具有良好的食品防腐保鲜的应用前景。     

Potential of lactic acid bacteria isolated from specific natural niches in food production and preservation

Autochthonous strains of lactic acid bacteria (LAB) have been isolated from traditionally homemade cheeses collected from specific ecological localities across Serbia and Montenegro. Genetic and biochemical analysis of this LAB revealed that they produce bacteriocins, proteinases and exopolysaccharides. LAB produces a variety of antimicrobial substances with potential importance for food fermentation and preservation. Apart from the metabolic end products, some strains also secrete antimicrobial substances known as bacteriocins. Among the natural isolates of LAB from homemade cheeses, bacteriocin producers were found in both lactococci and lactobacilli. Lactococcus lactis subsp. lactis BGMN1-5 was found to produce three narrow spectrum class II heat-stable bacteriocins. In addition to bacteriocin production, BGMN1-5 synthesized a cell envelope-associated proteinase (CEP) and shows an aggregation phenotype. Another isolate, L. lactis subsp. lactis BGSM1-19 produces low molecular mass (7 kDa) bacteriocin SM19 that showed antimicrobial activity against Staphylococcus aureus, Micrococcus flavus and partially against Salmonella paratyphi. Production of bacteriocin reaches a plateau after 8 h of BGSM1-19 growth. Bacteriocin SM19 retained activity within the wide pH range from 1 to 12 and after the treatment at 100 degrees C for 15 min. Among collection of lactobacilli, the isolate Lactobacillus paracasei subsp. paracasei BGSJ2-8 produces heat-stable bacteriocin SJ (approx. 5 kDa) polypeptide. It retained activity after treatment for 1 h at 100 degrees C, and in the pH range from 2 to 11. In addition to isolates from cheeses, bacteriocin-producing human oral lactobacilli were detected. Most of them showed antimicrobial activity against streptococci, staphylococci and micrococci, but not against Candida. Isolate BGHO1 that showed the highest antimicrobial activity was determined as L. paracasei. Interestingly, Lactobacillus helveticus BGRA43, which was isolated from the human intestine showed strong activity against Clostridium sporogenes, but it was not possible to detect any bacteriocin production in this isolate by using standard procedures. Further analysis of antimicrobial activity revealed that BGRA43 has a relatively broad spectrum. Lactobacilli resistant to nisin were also detected among natural isolates. They produce bacteriocins, which have no activity against nisin producing lactococci.     

根霉胞内α-半乳糖苷酶的分离及其酶学性质

根霉Rhizopus sp.A01的菌丝体破碎液依次经过三相分离、Sephadex G-100凝胶过滤获得了电泳纯的α-半乳糖苷酶,纯化了54.8倍,总酶活回收率达到27.3%,在SDS-PAGE上显示相对分子质量为85.6 ku的单一条带,凝胶过滤表明该酶表观相对分子质量为302 ku。该酶水解对硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷的最适pH值为4.5,最适温度为55℃,表观Km值为(0.242±0.027)mmol/L,表观kcat/Km值为4.089×105L/(mol.s);对蜜二糖和棉子糖有弱的水解作用,水解速度依次为138.3μmol/(h.mg)、19.7μmol/(h.mg)。水解活性受Fe2+和Fe3+的显著激活,但受Mn2+、Cu2+、Hg+和Mg2+等离子的强烈抑制。该酶活性在pH4.0～8.2保持稳定,在50℃时保温90 min,残余酶活达到了48%。     

产抑菌物质乳酸菌的筛选及其抑菌特性研究

目的 本文旨在筛选具有广谱抑菌活性的乳酸菌,为其在食品保鲜中的应用奠定基础。方法 以MRS和M17为培养基,对韩国传统泡菜中乳酸菌进行分离鉴定,通过琼脂孔扩散法筛选具有广谱抑菌活性的乳酸菌,并分析它的耐酸、耐胆盐能力,以及对温度、pH、发酵时间的敏感性。结果 以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、枯草芽孢杆菌为指示菌进行抑菌活性筛选,获得一株抑菌效果最佳的植物乳杆菌PC4-5。植物乳杆菌PC4-5在酸性条件（pH=2）处理2 h后存活率达到43.79%,0.5%胆盐处理2 h后存活率达到21.02%,说明植物乳杆菌PC4-5具有较好的耐酸、耐胆盐能力。经排酸排过氧化氢试验后,发酵上清依然保留抑菌活性,蛋白酶处理后抑菌活性丧失,表明该抑菌物质为细菌素。该细菌素在pH为2-6的范围有抑菌能力,且有较好热稳定性。结论 植物乳杆菌PC4-5适用于酸性食品的防腐保存,在食品保鲜中的应用有较大的潜力。     

动物双歧杆菌细菌素bifidocin A群体感应合成调控行为分析

bifidocin A是由Bifidobacterium animalis BB04代谢合成的一种新型广谱高效细菌素。为探讨该细菌素的群体感应合成调控行为,本研究通过监测发酵过程中菌体生长及细菌素抑菌活性变化规律,分析菌体密度和细菌素合成的相关性;基于低产细菌素培养模型体系的构建,检测发酵上清液中是否存在群体感应自诱导肽,判断是否存在细菌素合成相关群体感应系统;并通过对发酵上清液中自诱导肽进行提纯和分子质量测定,初步明确其分子特性。结果表明,当菌体细胞达到活菌数为7.31（lg（CFU/mL））时,细菌素才开始合成;发酵过程中,菌体密度与细菌素的合成呈现正相关性;成功构建了低产细菌素培养模型体系,其培养条件为培养温度37?℃、培养基起始pH?5、培养基浓度1/10改良MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基、接种量1%、培养时间24?h;基于此模型体系,确定发酵上清液中确实存在可以诱导细菌素合成的自诱导肽,细菌素bifidocin?A的合成是受群体感应系统调控的;通过对发酵上清液进行超滤管筛分、葡聚糖凝胶柱层析及高效液相色谱层析提纯,获得了高纯度自诱导肽样品;采用基质辅助激光解析电离飞行质谱测定其分子质量为3?587.253?Da。     

枯草芽孢杆菌产细菌素发酵条件的优化

通过响应面法优化枯草芽孢杆菌HJD.A32产细菌素的发酵条件,得出最优发酵条件为发酵时间30 h、摇床转速147 r/min、发酵pH 5.3、发酵温度30 ℃、接种量4%、接种菌龄24 h。在优化发酵条件下经过氧化氢酶处理的细菌素效价比优化前提高了100%,优化后发酵条件下未经过氧化氢酶处理所得细菌素的效价比优化之前提高了300%。     

Purification and partial characterization of psychrotrophic Serratia marcescens lipase

Serratia marcescens isolated from raw milk was found to produce extracellular lipase. The growth of this organism could contribute to flavor defects in milk and dairy products. Serratia marcescens was streaked onto spirit blue agar medium, and lipolytic activity was detected after 6 h at 30 degrees C and after 12 h at 6 degrees C. The extracellular crude lipase was collected after inoculation of the organism into nutrient broth and then into skim milk. The crude lipase was purified to homogeneity by ion-exchange chromatography and gel filtration. The purified lipase had a final recovered activity of 45.42%. Its molecular mass was estimated by SDS-PAGE assay to be 52 kDa. The purified lipase was characterized; the optimum pH was likely between 8 and 9 and showed about 70% of its activity at pH 6.6. The enzyme was very stable at pH 8 and lost about 30% of its activity after holding for 24 h at 4 degrees C in buffer of pH 6.6. The optimum temperature was observed at 37 degrees C and exhibited high activity at 5 degrees C. The thermal inactivation of S. marcescens lipase was more obvious at 80 degrees C; it retained about 15% of its original activity at 80 degrees C and was completely inactivated after heating at 90 degrees C for 5 min. Under optimum conditions, activity of the enzyme was maximum after 6 min. The Michaelis-Menten constant was 1.35 mM on tributyrin. The enzyme was inhibited by a concentration more than 6.25mM. Purified lipase was not as heat-stable as other lipases from psychrotrophs, but it retained high activity at 5 degrees C. At pH 6.6, the pH of milk, purified lipase showed some activity and stability. Also, the organism demonstrated lipolytic activity at 6 degrees C after 12 h. Therefore, S. marcescens and its lipase were considered to cause flavor impairment during cold storage of milk and dairy products.     

大菱鲆肠道中广谱拮抗活性乳酸菌的筛选及其细菌素鉴定

应用牛津杯法从大菱鲆肠道分离的乳酸菌中筛选出对革兰氏阳性和阴性细菌均具有抑制作用的菌株LP1-4,经生理生化反应和16S rRNA鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。通过温度、pH值和蛋白酶等因素分析,结果表明菌株LP1-4无细胞上清液（cell-free supernatant,CFS）中抑菌物质具有良好的热稳定性,在pH 2.5～5.0具有抑菌活性,且对蛋白酶敏感,初步判断为细菌素类抑菌物质。菌株LP1-4在最佳培养时间24 h时抑菌活性达到峰值,应用乙酸乙酯萃取后抑菌圈直径达25.42 mm。采用Labscale TFF System超滤分离和Sephadex G-25凝胶层析获得小于1.0 ku分子质量的细菌素。经高效液相色谱纯化分析,抑菌物质在液相分离条件下目标峰的保留时间为5.0 min。采用基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱确定细菌素分子质量为0.854 ku,其氨基酸排列顺序为谷氨酸-天冬酰胺-赖氨酸-脯氨酸-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-赖氨酸（ENKPAAPK）。本研究从大菱鲆肠道筛选具有广谱抗菌活性的菌株LP1-4,对研发控制水产品腐败菌和致病菌的乳酸菌生物防腐保鲜制剂具有潜在的应用价值。