胶体金免疫层析法快速检测赭曲霉毒素A研究

该研究应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测食品和饲料中赭曲霉毒素A方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记抗赭曲霉毒素A单克隆抗体,标记胶体金抗体喷涂于玻璃纤维上,赭曲霉毒素A偶联抗原OTA-OVA和二抗兔抗鼠IgG分别喷涂于硝酸纤维膜上作为检测限和质控线,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装成试纸条并装卡。测试结果表明,赭曲霉毒素A快速检测试纸条灵敏度为5 ng/mL,检测时间为10 min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。该法简单方便,非常适于现场快速检测赭曲霉毒素A。     

应用胶体金试纸条快速检测赭曲霉毒素A的研究

本文介绍了一种快速检测赭曲霉毒素A的胶体金试纸条的研制方法，其中包括胶体金的生产、金标抗体的制备、试纸条的组装和测试等步骤。测试结果表明赭曲霉毒素A快速检测试纸条的检测限为10ng／ml，检测时间为10min，加上使用方便，经济适用，使之适合于赭曲霉毒素A现场快速检测之用。     

赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的研制及与传统胶体金试纸条的比较

本实验介绍了赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的研制方法,其中包括胶体金的生产、金标抗体的制备、无毒体系试纸条的组装等步骤。所制备的赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条和传统的胶体金试纸条进行了比较,测试结果表明,赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的检测限和检测时间与传统的胶体金试纸条相同,适合于赭曲霉毒素A现场筛查之用。     

胶体金免疫层析法快速检测T-2毒素的研究

应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测谷物和饲料中T-2毒素的方法.采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗T-2毒素单克隆抗体并喷涂于玻璃纤维上,T-2毒素偶联抗原和羊抗鼠二抗分别喷涂于硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组装成试纸条并装入检测卡中.测试结果表明,T-2毒素快速检测试纸条的检测限为0.Smg/L,检测时间为10min,假阳性率和假阴性率均为0.该法使用简单方便,非常适合现场快速检测谷物和饲料中的T-2毒素.     

赭曲霉毒素A胶体金快速检测试剂条的研制

为建立一种快速检测饲料中赭曲霉毒素A的检测方法,应用胶体金免疫层析技术,研制了一种饲料中赭曲霉毒素A的免疫胶体金快速检测试剂条.将羊抗鼠IgG、特异性结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素膜和胶体金结合垫上,包被后的硝酸纤维素膜、样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试剂条.试剂条的最低检测限为25μg/kg,与其他霉菌毒素的交叉反应率小于1％.该试剂条可用于饲料中赭曲霉毒素A的快速检测.     

量子点标记免疫层析试纸条快速检测谷物中赭曲霉毒素A

目的:根据竞争抑制免疫层析原理,构建一种基于量子点标记的免疫层析试纸条用于检测谷物中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的残留量。方法:通过活化酯法将羧基功能化的量子点(Quantum dot,QD)与赭曲霉毒素A多克隆抗体(Antibody,Ab)偶联制备量子点抗体偶联物(QD-Ab);通过分别添加不同量的QD-Ab和工作液,优化量子点标记免疫层析试纸条的工作条件;通过商品化试剂盒验证该方法的有效性。结果:当QD与Ab的摩尔比为1:10时,QD-Ab荧光特性最佳;在QD-Ab和工作液添加量分别为1、10 μL时,量子点标记免疫层析试纸条结果最佳;量子点标记免疫层析试纸条的检测限为0.5 μg/L,谷物样品中的检测限为5 μg/kg,整个检测过程不超过10 min;量子点标记免疫层析试纸条特异性良好且具有有效性。结论:该方法操作简便、检测快速、结果准确灵敏,易于判断,可以满足谷物中赭曲霉毒素A残留量现场快速检测的要求。     

农产品中赭曲霉毒素A免疫层析试纸条快速检测技术研究

基于胶体金免疫层析原理建立了一种快速检测赭曲霉毒素Ａ（ｏｃｈｒｏｔａｘｉｎＡ,ＯＴＡ）的胶体金试纸条的研制方法,包括胶体金的制备、金标记探针的制备、试纸条各条件参数的测试和优化等。试纸条检测ＯＴＡ的肉眼可视检测限为０．２５ｎｇ／ｍＬ,检测时间为１０ｍｉｎ,试纸条能特异性识别ＯＴＡ而不与赭曲霉毒素Ｂ及其他真菌毒素发生交叉反应,使用简单、方便、成本低,重复性好,保质期长,尤其适用于农产品中ＯＴＡ的现场快速筛查。     

牛奶中黄曲霉毒素M1胶体金试纸条的研究

应用胶体金免疫层析技术,建立一种快速检测牛奶中黄曲霉毒素M1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,单克隆抗体胶体金标记物的制备并冻干成微孔试剂,样品吸收垫和反应膜的制备,试纸条的组装。所研制的黄曲霉毒素M1快速检测试纸条的检测限为0.3μg/L,检测时间为10 min,假阳性率和假阴性率为0。试纸条使用简单方便,适合进行现场快速检测牛奶中残留的黄曲霉毒素M1。     

一种快速检测呕吐毒素的胶体金试纸条

利用胶体金免疫层析法,研制了一种能够快速检测黄豆中呕吐毒素含量的试纸条。通过试验,胶体金试纸条对呕吐毒素的检测限是1μg/g,对玉米赤霉烯酮毒素、黄曲霉毒素B1、赭曲毒素A等无交叉反应,假阳性率和假阴性率均为0,检测时间为10min。试纸条能够准确、可靠、简便、快速地检测黄豆中残留的呕吐毒素,适合大量样品的现场检测。     

高效液相色谱法同时测定谷物中的赭曲霉毒素和玉米赤霉烯酮

采用反相高效液相色谱法同时测定谷物中的赭曲霉毒素和玉米赤霉烯酮.以ODS C18(250mmx4.6mm,5μm)为色谱柱,乙腈-2%乙酸(两者体积比40:60)为流动相,荧光检测器检测, Ex 325nm, Em 455 nm.赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的线性范围分别为1～100μg/L和10～100)μg/L,检出限分别为0.025 ng和0.26 ng.5种样品的检测中两种生物毒素的加标回收率在75%～110%之间.该方法灵敏、准确,适用于谷物中赭曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的栓测.     

高效液相色谱-串联质谱法检测茶叶中的 赭曲霉毒素A

目的建立高效液相色谱-串联质谱联用技术检测茶叶中赭曲霉毒素A(OTA)的方法。方法用甲醇-2%Na HCO3溶液(60:40,V:V)提取样品中的赭曲霉毒素A,采用免疫亲和柱对茶叶中的赭曲霉毒素A净化,使用甲醇-5 mmol/L乙酸铵(含0.1%乙酸)为流动相,检测赭曲霉毒素A,采用正离子模式。结果本方法中赭曲霉毒素A在0.5~10 ng/m L质量浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.996),回收率在83.6%~92.5%之间,相对标准偏差在6.5%~9.1%之间,检出限为0.1μg/kg。结论该方法准确性好、灵敏度高,适用于茶叶样品的检测。     

胶体金免疫层析法快速检测黄曲霉毒素B1的研究

本文应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测食品中黄曲霉毒素B1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,黄曲霉毒素B1偶联抗原和二抗鼠抗驴分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条并装入检测卡中。测试结果表明黄曲霉毒素B1快速检测试纸条的灵敏度为5ng/ml,检测时间为10min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。使用简单方便,非常适合现场快速检测黄曲霉毒素B1。     

动物组织中呋喃它酮代谢物快速检测试纸条的研制

介绍了检测动物组织中呋喃它酮代谢物的胶体金试纸条的研制方法,主要包括胶体金标记物的制备并冻干成微孔试剂,样品吸收垫和反应膜的制备,试纸条的组装等研究步骤,所研制出的呋喃它酮代谢物快速检测胶体金试纸条对动物组织的最低检测限为1.0μg/kg,检测时间短,试纸条特异性好、假阳性率不高于5%、假阴性率为0,可应用于动物组织中呋喃它酮代谢物的快速检测和现场筛查,具有较高的市场应用前景。     

基质分散固相萃取净化液相色谱检测谷物中赭曲霉毒素A

建立了经基质分散固相萃取(MSPD)净化,使用液相色谱仪配荧光检测器分析谷物中赭曲霉毒素A含量的方法.C18固定相与粉碎后的样品置于研钵中,使用研棒轻柔的充分混合,将研磨后的混合物置于带有筛板的玻璃注射器管中,用10 ml甲醇淋洗、定容,收集淋洗液经过0.45 μm滤膜过滤.滤液直接使用配有荧光检测器(FLD)液相色谱仪分析.结果显示,在选定色谱条件下,方法对谷物中含有的赭曲霉毒素A可以有效分离.回收率为80.0％～93.65％,最低检测限为0.5μg/kg.表明该方法能够快速、准确地检测谷物中赭曲霉毒素A的含量.     

高灵敏黄曲霉毒素B1免疫层析定量检测法的建立

以胶体金为标记物,借助于胶体金读取仪,建立了高灵敏的定量检测黄曲霉毒素B_1的胶体金免疫层析方法。试纸条制备时,当标记溶液pH为6.0,检测线全抗原的使用浓度为1.5mg/mL,金标抗体浓度为4μg/mL、用量为1.2μL时,所建立方法的灵敏度为5.7ng/L。通过加速保存试验,结果显示该试纸条的保存期大于1年。该试纸条应用于实际谷物及酱油加标样本检测,证明该方法可满足食品快速检测的需要。     

谷物类食品中赭曲霉毒素A分析方法的研究进展

赭曲霉毒素A是由真菌产生的次级代谢产物,由于其具有极强的肾脏毒性、致癌性、致畸性,且对食品污染的范围广泛,许多国家对其制定了严格的限量标准。目前对谷物中赭曲霉毒素A的检测方法主要有薄层色谱分析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、毛细管电泳法和胶体金试纸条法等。随着检测水平的提高,对食品中的赭曲霉毒素A限量标准的要求也在不断地提高。建立安全、准确、灵敏度高、重现性好的检测体系将成为今后研究的重点。     

原料乳中玉米赤霉烯酮胶体金免疫试纸条检测方法的建立

采用柠檬酸三钠法合成胶体金,与抗玉米赤霉烯酮单抗(ZEA-m Ab)制成抗体-胶体金标记物,包被于胶体金结合垫上。玉米赤霉烯酮半抗原和蛋白的偶联物(ZEA-BSA)和羊抗鼠Ig G分别喷涂于硝酸纤维素膜作为检测线(T线)和质控线(C线),建立原料乳中玉米赤霉烯酮(ZEA)的胶体金免疫试纸条检测法。结果显示,试纸条的灵敏度为30n g/m L,与其他毒素无交叉反应,10 min内即可肉眼观察结果。检测添加有玉米赤霉烯酮的原料乳样品,该试纸条的检测限为50 ng/m L。方法可用于原料乳中玉米赤霉烯酮的快速检测。     

全自动免疫亲和在线净化—高效液相色谱法快速测定粮食中赭曲霉毒素A

建立了全自动免疫亲和在线净化-高效液相色谱法快速测定粮食中赭曲霉毒素A(Ochtatoxin A,OTA)的方法。玉米、小麦样品经乙腈-水(60:40,V:V)提取,3%Tween-20(m/V)水溶液10倍稀释后,用自动进样器注入RIDA~? REST在线固相萃取系统,经赭曲霉毒素A免疫亲和小柱净化后,以乙腈-2%乙酸水(50:50,V:V)为流动相,流速为1.0 mL/min,C18色谱柱(150 mm×3.5 mm,3.5μm)分离,荧光检测器测定。根据3倍信噪比的峰响应值,确定赭曲霉毒素A的检出限为0.24μg/kg,在0.012 5～0.5μg/L范围内呈线性相关,R~2值为0.999 8;在玉米、小麦样品中加标回收率为80.1%～106.9%,变异系数为2.4%～8.2%。本方法一次装柱可检测60个样品,24 h可检测100个样品,满足谷物中赭曲霉毒素A快速准确定量检测的需要。     

新型高灵敏赭曲霉毒素A间接竞争化学发光免疫分析法

建立了一种测定赭曲霉毒素A的新型高灵敏化学发光间接竞争酶联免疫分析方法。以酶标赭曲霉毒素A二抗上的辣根过氧化物酶催化过氧化脲氧化3-(4-羟苯基)丙酸,生成具有荧光的3-(4-羟苯基)丙酸二聚体。并利用乙腈介质中双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯和过氧化脲在增强剂咪唑的作用下反应产生强化学发光,以发光强度确定待检物中赭曲霉毒素A含量。结果表明,在最佳条件下IC50为0. 55 ng/m L,在0. 05～6. 08 ng/m L范围内有良好的线性关系,最低检出限为0. 01 ng/m L。样品加标回收实验显示葡萄干和葡萄汁样品的平均回收率分别为84. 55%～91. 36%和73. 32%～87. 64%,批内与批间变异系数均小于10%,精密度良好。该新型化学发光方法检测赭曲霉毒素A时发光强度更大、发光时间更长,可用于食品中赭曲霉毒素A的高灵敏度痕量检测。     

胶体金免疫层析法快速检测动物组织中残留的喹乙醇

研制胶体金免疫层析法试纸条,用于动物源食品中喹乙醇药物残留的快速检测。将已制备纯化过的喹乙醇多克隆抗体与胶体金结合产生的金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,并将包被抗原OLA-OVA和羊抗鼠二抗分别结合在硝酸纤维素膜上,组装成免疫层析快速检测试纸条,并检测试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性。将制备的试纸条用于检测猪肉和猪肝样品,结果表明本研究制备的试纸条可以在10min内完成检测,肉眼观察的最低检测限为0.05μg/m L,与其结构类似物卡巴氧、乙酰甲喹、3-甲基-喹噁啉-2-羟酸的反应交叉性小,该试纸条假阳性率小于5%,假阴性率为0,在干燥常温条件下保存6个月仍然有效。本实验研究的检测方法可应用于动物组织中喹乙醇的快速检测和现场筛查。