固定化脂肪酶催化合成富含共轭亚油酸的甘油酯

选择3种大孔树脂AB-8、HZ-802、HZ-841吸附固定化Thermomyces lanuginosus脂肪酶液,用AB-8树脂固定化的脂肪酶比酶活最高,达到37451U／g。用此脂肪酶催化生产CLA甘油酯,发现其对底物甘油酯种类没有特异选择性。在CLA乙酯与食用油（甘油酯）摩尔比为3：1,酶加量为7％,反应温度为60℃的条件下催化酯交换反应,CLA转酯化率可以达到47％以上。以AB-8弱极性大孔树脂固定化的脂肪酶有较高稳定性,连续反应8批以后,CLA转酯化率仍可以达到42％。     

催化大豆油脱臭馏出物甲酯化的脂肪酶固定化研究

大豆油脱臭馏出物酶法酯化提取天然VE技术绿色经济,具有理想应用前景。为此,开展了针对催化脱臭馏出物脂肪酸酯化的国产树脂吸附固定化脂肪酶的研究。选用弱极性大孔树脂AB-8作为载体,固定的脂肪酶具有较强的酯化活性与较低的水解活性。在固定化条件单因素试验的基础上,应用Plackett-Burman试验筛选出缓冲液pH值、固定化温度和时间为显著影响因素,通过响应面法优化,AB-8树脂固定化脂肪酶的适宜工艺为：缓冲液pH 7.3、固定化温度25 ℃、时间4 h、酶量50 mg/g树脂、吸附振荡速率150 r/min,得到的固定化酶水解活力为112.4 U/g。应用于催化大豆油脱臭馏出物脂肪酸甲酯化试验,固定化酶催化效果优于游离酶,游离脂肪酸酸值降低88.3%,重复利用3次,酸值降低仍达85%以上,具有实际应用价值。     

脂肪酶固定化工艺优化及其酶学性质研究

以D-101、AB-8和S-8三种大孔树脂为载体,进行黑曲霉脂肪酶的固定化研究。根据脂肪酶的固定化率及活力回收率,确定D-101为固定化载体。经响应曲面法优化得脂肪酶的固定化工艺:以5 g经预处理的D-101为载体,加入9.0 m L酶液(20 mg/m L),p H 7.6,39℃下吸附4.3 h,脂肪酶固定化率为95.11%,固定化脂肪酶活力回收率为101.36%。固定化酶最适反应温度升高2℃,最适p H不变,固定化脂肪酶的酸碱稳定性和热稳定性均优于游离酶。     

两种常见固定化脂肪酶的酶学性质和微观结构比较

分别对游离脂肪酶、大孔树脂吸附-交联固定化脂肪酶和海藻酸钠固定化脂肪酶的热稳定性、pH稳定性和操作稳定性等方面进行研究。结果显示,固定化脂肪酶在热稳定性、pH稳定性和重复利用次数上均有明显提高。对大孔树脂吸附-交联和海藻酸钠固定化微球进行了表观结构的考察。从SEM图片可以看出:海藻酸钠固定化微球表面和内部为均匀的蜂窝状多孔性结构,孔径较大,约0.1mm;而大孔树脂吸附-交联固定化微球内部具有规则蜂窝状通孔结构,孔径都在几微米以下。说明大孔树脂吸附-交联固定化脂肪酶效果比较理想。     

固定化脂肪酶的制备及其酶学性质的研究

以大孔树脂为载体进行脂肪酶的固定化,通过优化固定化条件得到高活性固定化脂肪酶并对其酶学性质进行研究。结果表明:弱碱性大孔阴离子交换树脂D301R是最佳的固定化载体;最优固定化条件为加酶量10%(以大孔树脂质量计),加水量30%(以大孔树脂质量计),4℃下在异辛烷中固定5 h。与游离脂肪酶相比,固定化脂肪酶具有良好的热稳定性、储存稳定性、吸附稳定性和对有机溶剂的抗逆性,循环使用6次,水解橄榄油的酶活回收率仍可达到50%。     

固定化脂肪酶Lipase G 50催化合成甘油二酯的研究

以D380、CAT600、AB-8三种大孔树脂为载体,采用物理吸附法,对偏甘油酯脂肪酶LipaseG50进行了固定化,并利用其催化脂肪酸和甘油酯化合成甘油二酯。结果表明,采用D380固定的脂肪酶酶活最高,用此固定化酶催化反应的最佳条件为:甘油和脂肪酸的摩尔比5∶1,固定化酶酶加量为底物总质量的7.5%,反应温度35℃,在此条件下经过96h的反应,酯化率为76.39%,甘油二酯的含量为43.89%,没有甘油三酯生成。固定化酶重复使用5个批次后酯化率可达65.76%,甘油二酯的含量达到38.45%,具有良好的重复使用稳定性。     

白地霉脂肪酶固定化及其催化光皮树油合成生物柴油的研究

本文采用响应面分析法对树脂NKA-Ⅱ固定脂肪酶的条件进行优化,并对其酶学性质和在催化光皮树油合成生物柴油中的操作稳定性进行了简单的探讨。首先通过单因素试验研究酶液/载体比、温度、缓冲液pH值等条件对固定化脂肪酶酶活力的影响,在此基础上,利用响应面试验设计对树脂NKA-Ⅱ固定化脂肪酶的条件进行优化,用制备的固定脂肪酶催化光皮树油和甲醇反应合成生物柴油。结果表明：酶液/载体比、温度和缓冲液pH值对固定化酶的活力都有影响,树脂NKA-Ⅱ固定化脂肪酶的最佳固定条件是：酶液/载体比为4∶1、温度为39℃、缓冲液pH值为7.5,固定化脂肪酶湿重活力高达216.2±4.5U/g,生物柴油转化率达90%以上。将响应面法应用于树脂NKA-Ⅱ固定化脂肪酶条件的优化是可行的,制备的固定脂肪酶具有工业化生产的潜力。     

Lipozyme TL 100L的固定化及其催化甘油解制备甘油二酯的研究

利用4种常用大孔树脂(NKA-9,AB-8,D301R,D4020)对Lipozyme TL 100L进行固定化,并比较了固定化效果及4种固定化脂肪酶对甘油解反应制备甘油二酯的影响。结果表明:以弱极性大孔吸附树脂AB-8为载体固定化的Lipozyme TL 100L在无溶剂体系中催化大豆油甘油解反应制备甘油二酯的效率最高;当底物(精炼大豆油与甘油)摩尔比为1∶2,反应温度为50℃,AB-8大孔树脂固定化的Lipozyme TL 100L加酶量为600 U/g时,在甘油解反应6 h后产物中甘油二酯含量基本达到平衡,为54.39%,其中1,2-甘油二酯含量为33.87%,1,3-甘油二酯含量为20.52%。     

海洋脂肪酶YS2071的固定化及酶学性质研究

为提高脂肪酶的利用效率,更好应用于工业化生产,研究了脂肪酶YS2071的固定化技术,筛选最优载体,通过单因素实验法对脂肪酶固定化的条件进行优化,并对其性质进行了研究。采用MI-BSI伯胺功能基吸附树脂为载体,京尼平为交联剂,吸附-交联的方法,分析了加酶量、吸附时间、吸附温度、初始pH、交联剂的浓度、交联时间等因素对脂肪酶固定化效果的影响,并通过PB实验和响应面实验,确定了最佳固定化条件:加酶量为8 mg,吸附时间8 h,吸附温度为20℃,初始pH 8.6,交联剂质量浓度为0.48 g/L,交联时间为1 h时,固定化效率最高,酶活回收率达到60%以上。     

固定化米黑根毛霉脂肪酶的制备工艺优化及其酶学性质北大核心CSCD

以海藻酸钠-羧甲基纤维素钠(CMC)为复合载体,戊二醛为交联剂,探究了包埋-交联法制备固定化米黑根毛霉脂肪酶的最佳工艺条件,并对固定化米黑根毛霉脂肪酶的酶学性质进行分析。结果表明,制备固定化米黑根毛霉脂肪酶的最佳工艺条件为海藻酸钠质量分数2.5%、CMC质量分数1.5%、脂肪酶液浓度800 U/mL、CaCl_(2)质量分数5%、戊二醛质量分数0.03%、交联固定化时间30 min,在此条件下固定化米黑根毛霉脂肪酶的酶活力为245.58 U/g,与游离脂肪酶相比,固定化脂肪酶热稳定性和pH稳定性均有所提高。交联剂戊二醛的添加可以提高固定化脂肪酶的操作稳定性和储存稳定性,在重复使用7次后相对酶活力保持在57.39%,在4℃下存放7周后相对酶活力为61.89%。包埋-交联法制备的固定化米黑根毛霉脂肪酶具有更好的稳定性和适应性,为实现植物油酶法酯化脱酸工业化生产提供参考。     

响应面法优化脂肪酶的固定化条件及其水解橄榄油的特性研究

采用Sepharose CL-4B和7种大孔树脂为载体固定Palatase 20000L脂肪酶,对载体进行筛选,以酶活力为指标,采用响应面法优化固定化条件,并考察所制得固定化酶的稳定性和水解橄榄油的酶学性质。结果表明：以大孔树脂HPD-600为载体制得的固定化酶具有较高的活性和良好的稳定性。其最优的固定化条件为：pH3.9,酶与载体比例为9.1mg/g,吸附时间1.8h。在最优条件下制得固定化酶在最适合条件下测得的酶活力达到1440U/g,酶活回收率大于50%。固定化酶最适作用温度为50℃,最适作用pH值为8.0。固定化酶的Km值为0.130g/mL,高于游离酶的Km(0.069g/mL)。固定化酶的热稳定性有一定程度的提高,其重复操作5次后相对酶活力仍保持在58%以上。     

Preparation and Properties of Rhizopus oryzae Lipase Immobilized Using an Adsorption-Crosslinking Method

The aim was to develop an enzyme immobilization method for Rhizopus oryzae lipase to improve its acidolysis activity and stability. Lipase was adsorbed into NKA-9 resin and then crosslinked with glutaraldehyde as a crosslinker. The optimum conditions obtained using the response surface methodology were as follows: 34.6 mg lipase/100 mg support, 4.1 h of adsorption time, 45°C, pH 6.8, 0.5% glutaraldehyde concentration, and 2.5 h of crosslinking time. The acidolysis activity of the immobilized lipase was 31.78%, the free lipase activity was only 11.02%. The immobilized lipase showed better performance, such as higher acidolysis activity, better pH tolerance and temperature stability, enhanced storage stability, and improved reusability.     

磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶研究

以磁性壳聚糖微球为载体,通过戊二醛交联进行脂肪酶固定化,对影响脂肪酶固定化各种因素进行考察,确定最佳条件,并比较游离酶与固定化酶pH和热稳定性。结果表明,固定化适宜条件为:脂肪酶加入量5.0 mg/100 mg载体、温度40℃、时间5 h、pH 8.04、戊二醛浓度10%、最高固载率可达90.56%,酶活4034 U/g载体;与游离酶相比,固定化酶pH和热稳定性都有较宽适用范围。     

新型交联剂三羟甲基磷固定化脂肪酶的研究

本试验研究了一种新型交联剂三羟甲基磷（THP）用于以纯棉浴巾载体、聚乙烯亚胺（PEI）为吸附剂的固定化脂肪酶制备新方法。通过单因子实验获得了固定化条件为：0.2 g浴巾使用0.5 mLPEI（浓度3.37 mg/mL,pH 7.0）、2 mLTHP（浓度为0.10%,V/V）、固定化温度为40℃、交联时间为20 min。制备的固定化脂肪酶催化正丁酸乙烯酯与戊醇酯交换反应,1 h底物转化率达92.1%,酶比活力达到15.80 U/g固定化酶。与戊二醛（GA）交联法制备的固定化酶相比,本固定化酶具有良好的重复使用稳定性、温度稳定性和高比活力,本试验采用的方法是一种低成本、实用性强的脂肪酶固定化新方法。     

棉织物上SESA活化法固定化脂肪酶工艺的研究

研究了对-β-硫酸酯乙砜基苯胺活化法在棉织物上固定化脂肪酶的工艺条件,并考察了固定化酶的最适作用温度和pH及间歇操作稳定性。最佳固定化条件为醚化pH为10.0,偶联pH为7.0,脂肪酶的浓度为6mg/ml,偶联时间为12h,所得固定化脂肪酶的最大活力为35U/g(棉)·min。固定化酶的最适作用温度为35℃,最适pH为8.0,半衰期为6d。     

D-塔格糖3-差向异构酶的固定化研究

从14种离子交换树脂和吸附树脂中,筛选出固定化效果较好的大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D301-Ⅲ为载体,以戊二醛为交联剂,通过先吸附后交联的方法对D-塔格糖3-差向异构酶的固定化进行研究。结果表明,最佳固定化条件为：加酶量为2.00mL/g（粗酶液/树脂）,吸附pH7.5,吸附时间为8h,吸附温度为30℃,戊二醛浓度为0.05%,交联时间为3h,固定化酶活回收率可达50%以上。固定化酶重复使用10次,酶活仍能稳定保持在初始酶活的65%以上,具有良好的操作稳定性。     

ZIF-8原位合成法固定化脂肪酶CRL

以ZIF-8为固定化载体,通过原位合成法固定褶皱假丝酵母脂肪酶(CRL),研究了不同固定化条件对固定化酶活力的影响以及固定化酶的稳定性,并对固定化酶进行了结构表征。结果表明:在10 m L 40 mmol/L硝酸锌溶液、10 m L 160 mmol/L 2-甲基咪唑溶液、2-甲基咪唑溶液初始p H8、酶添加量2.75 mg、-48℃冷冻干燥条件下,获得的固定化酶CRL@ZIF-8蛋白回收率为93%,比活力为1.08 U/mg;底物的分子大小对固定化酶的催化性能有明显影响,在以相对小分子的乙酸对硝基苯酯为底物时,重复使用9次后固定化酶仍保持72.8%的相对活力;通过对固定化酶进行场发射扫描电镜和氮气吸附脱附表征,表明脂肪酶CRL在载体表面和内部均有分布,固定化酶颗粒粒径约400 nm。     

ECR-1030M树脂固定化单宁酶

制备了一种新型固定化单宁酶并优化了固定化工艺。用米曲霉固态发酵单宁酶,然后分别用不同类型树脂以戊二醛交联法固定单宁酶并筛选出最佳树脂载体;通过均匀试验和统计分析优化了单宁酶固定化工艺条件;对固定化单宁酶的保藏稳定性和循环使用次数进行了测定。结果显示:二苯乙烯/丙烯酸酯基型大孔吸附树脂ECR-1030M固定化单宁酶性能最佳。最优固定化工艺条件为:戊二醛浓度3.5%、固定化时间5.5 h、料酶比1︰16(g/m L)。此条件下制备的固定化单宁酶活力最高,为1480.5±32.6 U/g,酶活回收率为64.5%。固定化单宁酶在4℃下保藏20 d,以及循环使用6次后,仍可保留超过80%的酶活力。由此可见,ECR-1030M树脂固定化单宁酶是一种酶活力高、稳定性好、可多次高效使用的酶制剂。