1株具有高产木二糖的产木聚糖酶马特链霉菌的鉴定

对1株具有高产木二糖的产木聚糖酶马特链霉菌进行了鉴定。从土壤中新分离得到1株具有产木聚糖酶活性的链霉菌sp.67,对该菌株进行了形态特征、培养特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析等方面的鉴定。PCR扩增得到其16s rDNA序列为1481 bp,通过在NCBI上BLAST比对,并运用ClustalX 1.8和MEGA 3.1软件绘制系统发育树,分析结果表明,sp.67与S.matensis AB 184221菌株同源性为99.52%。结合与生理生化实验结果一致,初步鉴定sp.67为马特链霉菌(Streptomyces matensis)。该菌株所产木聚糖酶水解碱处理棉籽饼的主要产物为木二糖,在生产高纯度木二糖中具有潜在的应用价值。     

沙漠生物结皮高产胞外多糖菌株的筛选与鉴定

采用传统的分离纯化方法从沙漠生物结皮中分离到27株产胞外多糖菌株,并通过苯酚-硫酸法从中复筛,筛选到一株产多糖量为7445.80mg/L的菌株XJ-27。根据菌株的形态学特征、生理生化鉴定方法初步鉴定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis);通过16S rDNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定,PCR扩增得到1452bp的序列,PCR产物序列通过Blast软件在NCBI网站中进行同源性比较,通过MEGA4.0软件绘制系统发育树,结果进一步确认了该菌的地位,XJ-27在细菌系统发育分类学上也归属为苏云金芽孢杆菌。     

产米渣蛋白水解酶菌株的筛选及鉴定

筛选产米渣蛋白水解酶菌株以促进米渣的绿色开发及充分利用。采用酪蛋白平板法从富含蛋白的样品初筛到115株产蛋白酶菌株。初筛菌株以米渣为唯一碳、氮源经发酵培养,通过复筛以分析其所产的蛋白酶,从豆豉中获得一株产米渣蛋白水解酶的目标菌株HP60。该菌株的粗酶活和对米渣蛋白的水解度分别达(263±7)U/m L和15.63%±0.30%。通过形态学、生理生化特征(API 20 NE,Biolog GP)及16S r RNA序列分析,鉴定HP60为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),并已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号:CCTCC NO.M 2014200。本研究筛选的Bacillus amyloliquefaciens HP60对米渣蛋白的微生物开发奠定了一定基础。     

新疆哈萨克族奶酪中潜在益生酵母菌的筛选

前期,从新疆哈萨克族奶酪中分离到127株酵母菌,选取其中生长状况良好18株菌进行潜在益生酵母菌筛选试验。在不同胆盐质量浓度、不同p H值、模拟人体胃液及温度的条件下进行培养,并以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为指示菌,观察其抑制有害菌的能力,同时对菌株的表面疏水性及自动聚集能力也进行测定,系统的分析了菌株的益生特性。最终,在18株酵母菌中得到4株菌(Y1、H1、Y36-6、L4)在以上条件下有较好的存活率,为潜在益生酵母菌。并对这4株酵母菌进行生理生化试验及26S r DNA序列测定,将结果同NCBI数据库中提供的酵母菌序列进行比对,以DNA Star软件进行相似性分析,得到H1菌株属于马克斯克鲁维酵母菌属(Kluyveromyces)相似度为99%,Y1菌株属于酿酒酵母属(Saccharomycete)相似度为99%,Y36-6和L4属于毕赤酵母属(Pichia kudriavzevii)相似度99%。     

一株产纳豆激酶菌株的分离筛选及鉴定

对能产生纳豆激酶的菌群进行了筛选,分离得到了1株具有较高纤溶活性的菌株N391,其纳豆激酶相当于1722.4U/mL尿激酶的酶活。利用细菌16S rDNA通用引物对其16S rRNA进行PCR扩增,得到1511bp的片段,该PCR产物序列通过Blast软件在NCBI网站中进行同源性比较,通过DNA MAN和MAGE3.1软件绘制系统发育树,结果表明,菌株N391的16S rRNA序列(DQ906100)与枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)的16S rRNA序列的同源性在99%以上,在系统发育树中,菌株N391与Bacillus subtilis在同一分支,且遗传距离最短。结合常规的形态、生理生化鉴定,N391的形态及大部分生理生化特征与Bacillus subtilis极为相似,表明菌株N391属于Bacillus subtilis的1个菌株,由此初步确定该菌在微生物系统发育学上的地位。     

一株牛蒡表面产纤维素酶细菌的分离鉴定

从牛蒡表面获得的多株产纤维素酶细菌中筛选到一株产酶活性较高的菌株NP10。使用生物技术方法获得了NP10长度为1419bp的16S rDNA序列。利用生物信息学方法在美国国立生物技术信息中心NCBI基因库比对分析了该序列,通过分析初步确定该菌为Bacillus sp.。本文为食品科学中进行细菌鉴定提供了方法参考,并为开发新型纤维素酶提供了资料。     

新疆哈萨克族传统发酵酸马奶中酵母菌的分离鉴定

从新疆南山、水西沟、伊犁昭苏采集的哈萨克族传统发酵酸马奶中共分离得到酵母菌34株。采用传统形态学、生理生化特性方法对酵母菌进行鉴定,鉴定结果为Schizosaccharomyces 1株、Sehizoblastosporion 1株、Torulopsis 1株、Saccharomycodes 1株、Kloechera 9株、Kluveromyces 5株、Dekker 8株、Trichosporon 3株、Hansenula 2株、Brettanomyces 3株。利用5.8S rDNA序列同源性分析和系统发育树对菌株12号进行分子生物学鉴定,鉴定结果为:菌株12与标准菌株HQ396523.1同源性达到96%,为Kluveromyces的Kluveromyces marxianus,与传统鉴定结果一致,表明5.8S rDNA序列分析在酵母菌鉴定上的准确性。     

酒石酸降解菌的筛选及鉴定

从含酒石酸的环境中分离得到10株可降解酒石酸的菌株,通过测定各菌株对酒石酸的降解率,从中筛选得到一株降解率高达70%的菌株,命名为F1。依据微生物学分类鉴定方法,对该菌株进行形态学、生理生化特性鉴定及rDNA-ITS序列分析,鉴定该菌株为黑曲霉(Aspergillus niger)。经毒素检测和动物毒性实验未见毒性。     

耐受高体积分数丁醇乳酸菌的筛选及其鉴定

从不同样品中分离和筛选在较高丁醇体积分数下生长的菌株,通过不断提高培养基中的丁醇添加量测定菌株的相对生长率,经过初测和复测,选择相对生长率较高的菌株绘制其耐受曲线,分析其能够耐受丁醇的体积分数。对菌株进行常规生理生化鉴定和16S rDNA序列分析,结合菌体形态及菌落特征确立菌株的种属。筛选得到2株耐受丁醇的体积分数均达到了3%的菌株,分别为A37和A50。经鉴定,序列分析与生理生化实验结果是一致的,A37为Enterococcus faecalis,A50为Lactobacillus fermentum。结果表明两株菌具有较高的丁醇耐受性。     

一株产谷氨酰胺转氨酶菌株的分离、鉴定及其tgl的克隆表达

用稀释平板法从土壤样品中分离到166株细菌菌株,通过凝胶法初筛和Folk比色法复筛,得到一株产谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase)的菌株,通过形态学、生理生化特征和16S r DNA序列比对证明该菌株是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),命名为TGase1318。克隆了该菌株TGase的编码基因tgl,序列长738bp,编码由245个氨基酸组成的蛋白质;TGase的氨基酸序列与NCBI公布的B.subtilis的TGase相似性达94%~100%。用B.subtilis表达载体p TZ和E.coli表达载体p ET21b分别构建了含tgl的重组质粒,转化B.subtilis WB800和E.coli BL21,tgl基因表达产物在70℃下可催化BSA交联,表明tgl在B.subtilis和E.coli中获得了表达且表现出TGase活性,这为其在食品工业上的开发利用打下基础。     

Inactivation kinetics of avirulent Bacillus anthracis spores in milk with a combination of heat and hydrogen peroxide

The combined effect of heat and hydrogen peroxide (HP) on the inactivation of avirulent Bacillus anthracis spores (Sterne strain 7702; strain ANR-1, an avirulent Ames derivative lacking the pXO2 plasmid; and strain 9131, a plasmid-less Sterne strain) was evaluated in milk. The study temperature ranged from 90 to 95 degrees C, and the concentration of added HP varied from 0.05 to 0.5%. Decimal reduction times (D-values) were determined using a sealed capillary tube technique. The mean D- and z-values of hydrated freeze-dried spores of all three strains in milk ranged from 550 s at 90 degrees C to 180 s at 94 degrees C and from 8.6 to 9.0 degrees C, respectively. When 0.05% HP was added to the milk, the D-values were decreased at least threefold, and at 0.5% HP the D-values ranged from 1 to 10 s. At 90 degrees C, all three strains had similar D-values when 0.05% HP was added. Increasing the concentration of HP to 0.5% had a greater reducing effect on the D-value for strain 7702 than on the values for strains ANR-1 and 9131. The rate of inactivation of each strain followed first-order reaction kinetics at each temperature-peroxide combination. Equations in the form of D = Constant x (HP concentration)n had R2 values greater than 0.97 for strains ANR-1 and 7702 and of at least 0.7 for strain 9131. This study suggests that a combination of high temperature (from 90 to 95 degrees C) and HP could be used for inactivation of B. anthracis spores in the event of deliberate contamination of milk such that the contaminated milk could be disposed of safely.     

胀袋红烧肉和酱料包中产气微生物的分离与鉴定

为解决红烧肉和酱料包的胀袋和腐败问题,该研究对胀袋红烧肉、牛排酱与番茄酱的微生物进行分离鉴定,并通过16S rDNA鉴定和产气验证试验确定导致产品胀袋的主要产气微生物。结果显示,从3种胀袋产品中共分离出9株优势菌,编号为1~9。其中菌株1号和5号为革兰氏阳性球菌,经鉴定1号菌株为枝状葡萄球菌（Staphylococcus edaphicus）、5号菌株为戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）;4号和8号菌为革兰氏阴性杆菌,经鉴定4号菌株为巴氏柠檬酸杆菌（Citrobacter braakii）、8号菌株为弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii）;2号、3号、6号、7号和9号为革兰氏阳性杆菌,经鉴定2号菌株为魏斯氏菌（Weissella cibaria）、3号菌株为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）、6号菌株为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）、7号菌株为太平洋芽孢杆菌（Bacillus pacificus）、9号菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。经产气验证试验,可以确定Bacillus velezensis、Citrobacter braakii、Bacillus cereus、Bacillus pacificus和Citrobacter freundii为产气微生物,是引起红烧肉和酱料包胀袋的主要污染微生物。综合分析,芽孢杆菌是导致包装食品胀袋的主要产气微生物之一,有效控制芽孢及芽孢杆菌的污染是解决食品胀袋问题的关键。     

芽孢杆菌LWM1的分离鉴定及其对蜡样芽孢杆菌的抑制作用

从土壤样品中分离出10株芽孢杆菌（Bacillus spp.）,以蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）为指示菌株,采用牛津杯扩散法筛选出一株具有较强抑菌活性的菌株LWM1。综合形态学、生理生化试验、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）及16S rDNA基因序列同源性分析,菌株LWM1被初步鉴定为一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,并研究了其在马铃薯葡萄糖水（PDW）和营养肉汤培养基（NB）中发酵上清液对蜡样芽孢杆菌的抑制效果。结果表明,PDW培养基更有利于菌株LWM1生长和抑菌物质产生。因此,可利用PDW培养基为主要底物大规模发酵制备菌株LWM1的抑菌物质。     

白酒黄水中纤维素降解菌的分离鉴定及产酶活性研究

为拓展纤维素降解菌资源,以羧甲基纤维素钠（CMC-Na）为唯一碳源作初筛培养基,从浓香型白酒发酵副产物黄水中分离得到18株具有产纤维素酶能力的菌株进行纯培养。形态学、生理生化和系统发育鉴定结果显示,菌株XH01、XH04、XH05、XH18为Bacillus cereus,菌株XH34为Bacillus circulans,菌株SW01、SW05为Bacillus megaterium,菌株SW02为Bacillus endophyticus,菌株SW03、SW04为Bacillus simplex,菌株SW09、SW13为Bacillus bataviensis。菌株ZL08为Penicillium camemberti,菌株ZL13为Aspergillus fumigatus,菌株ZL04和ZL25为Penicillium chrysogenum,菌株ZL15和ZL17为Alternaria tenuissima。利用二硝基水杨酸法对菌株发酵液纤维素酶活进行研究,结果表明,菌株SW02的产酶活性较高,其羧甲基纤维素酶活为153.36 U/mL,β-葡萄糖苷酶活为126.00 U/mL,微晶纤维素酶活为17.64 U/mL,滤纸酶活为30.48 U/mL。     

清香型白酒酒醅发酵菌株分离鉴定及细菌群落结构分析

采用纯培养技术对清香型白酒酒醅中的乳酸菌和芽孢杆菌进行分离鉴定,同时通过Illumina MiSeq高通量测序技术解析清香型白酒酒醅细菌群落结构。结果表明,所有酒醅样品共分离得到13株乳酸菌,分别鉴定为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）4株、副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）3株、短乳杆菌（Lactobacillus brevis）3株、粪肠球菌（Enterococcus faecium）2株以及希尔氏乳杆菌（Lactobacillus hilgardii）1株。从酒醅中分离得到的17株芽孢杆菌菌株分别鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）9株、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）2株、短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus）2株、澳洲芽孢杆菌（Bacillus australimaris）2株、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）1株以及蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）1株。Illumina MiSeq高通量测序技术结果显示,酒醅中优势菌门分别为厚壁菌门（Firmicutes）（97.96%）、放线菌门（Actinobacteria）（1.24%）和变形菌门（Proteobacteria）（0.76%）;优势细菌属为乳酸杆菌属（Lactobacillus）（97.42%）、栖热嗜油菌属（Thermoleophilum）（1.22%）和假单胞菌属（Pseudomonas）（0.72%）。     

中高温大曲中芽孢杆菌多样性及代谢特征研究

为探究大曲中芽孢杆菌的代谢特征和功能性,首先采用传统培养法结合分子生物学技术从中高温大曲中分离、鉴定芽孢杆菌,对其微生物多样性进行分析;然后通过耐受性分析从中筛选优势菌,最后利用代谢组学方法分析其代谢特性。结果表明,共分离、鉴定得到49株芽孢杆菌,其中3株芽孢杆菌耐受性较好,分别为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）BA-5、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BS-7和贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）BV-10。从单菌株及混合菌株发酵后的发酵液中共检测到23种挥发性代谢物和52种非挥发性代谢物,其中,愈创木酚以菌株BS-7单独培养时含量最高,为8.56 mg/L。同时芽孢杆菌混合发酵会增加4-乙烯基愈创木酚的生成量,在菌株BV-10和BA-5混合培养后,达到104.47 mg/L,说明芽孢杆菌单菌株及种间协同作用对白酒酿造中的特征物质形成具有重要影响。     

传统发酵豆瓣酱中益生芽孢杆菌的分离筛选与初步鉴定

以临江寺未发酵成熟的豆瓣酱为研究对象,对豆瓣酱中的益生芽孢杆菌进行分离纯化,筛选出产香能力强,发酵所产风味物质种类多,相对含量多的菌株X1为目的菌株,最后通过对菌株形态及生理生化鉴定,初步确定该菌株为枯草芽孢杆菌.     

芽孢杆菌B15的分子生物学鉴定及高产蛋白酶菌株选育

利用16S rDNA序列分析法,对分离自土壤产蛋白酶和淀粉酶及拮抗物质的芽孢杆菌B15进行菌种鉴定.通过序列比对及构建系统发育树,表明菌株B15与Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum AS43.3相似性达99％,鉴定为解淀粉芽孢杆菌植物亚种.菌株B15经过2次紫外线诱变,蛋白酶产量提高到初始菌株的147.1％.试验发现诱变株的淀粉酶产量与蛋白酶产量呈正相关.     

细菌型豆豉发酵菌株的鉴定

为了明确细菌型豆豉发酵菌株的身份,首先采用形态及生理生化方法进行鉴定,接着提取该菌株的基因组DNA,并根据芽孢杆菌属16S rDNA序列两端的保守性片段设计引物,然后用PCR方法扩增出16S rDNA部分序列,纯化、测序,最后经BLAST搜索进行序列比对和构建系统进化树.结果表明,菌株BBDC3为革兰氏阳性芽孢杆菌,生理生化特征与枯草芽孢杆菌相符;扩增出的16S rDNA部分序列长为1344bp,与序列号为EF488171的枯草芽孢杆菌16SrDNA序列的相似度最高,为99%;系统进化树中,菌株BBDC3与枯草芽孢杆菌AB018487在同一分支.因此,菌株BBI)C3属于枯草芽孢杆菌.     

降解呕吐毒素微生物的筛选鉴定及其应用

目的 筛选高效降解呕吐毒素（Deoxynivalenol,DON）的微生物并鉴定其种类。方法 分离培养出高效降解DON的微生物,鉴定该微生物种类,分析微生物各组分降解DON的效率,并在DON超标的小麦麸皮中开展应用。结果 筛选到高效降解DON的菌株MB-1,该菌株能降解82.3%的DON。鉴定结果表明菌株MB-1被命名为Bacillus aryabhattai MB-1,中文名为阿氏芽孢杆菌MB-1。各组分降解DON的结果表明菌株MB-1产生至胞外的活性物质主导DON的生物降解。菌株MB-1可降解小麦麸皮中80.4%的DON。结论 本研究筛选到降解DON的阿氏芽孢杆菌MB-1,这是首次报道阿氏芽孢杆菌可高效降解DON,为降解去除小麦等谷物中的DON提供了菌种资源。