响应面优化酶法提取虎斑乌贼肌肉多糖的工艺及抗氧化活性测定

研究胰蛋白酶提取虎斑乌贼肌肉多糖的工艺及体外抗氧化活性,并与水提法和碱提法的多糖进行比较。在单因素试验基础上以响应面法优化酶法提取多糖的工艺,结果显示最佳工艺条件为:酶解温度55℃、料液比1∶40(g/mL)、酶解时间4 h、加酶量2.5%,此时虎斑乌贼肌肉多糖得率为4.15%,优于水提法和碱提法的多糖得率。体外抗氧化活性研究表明酶法提取的多糖比碱提和水提的多糖具有更好的抗氧化活性,当多糖质量浓度为4 mg/mL时,水提、碱提和酶提虎斑乌贼肌肉多糖对·OH的清除率分别为50.15%、55.14%和89.47%,其IC50值分别为4.51、3.56 mg/mL和0.82 mg/mL;对DPPH自由基的清除率分别为28.89%、31.48%和40.80%,其IC50值分别为16.66、15.43 mg/mL和11.50 mg/mL;对O2-·的清除率分别为75.43%、81.63%和97.00%,其IC50值分别为1.15、0.69 mg/mL和0.29 mg/mL;还原力大小分别为0.134、0.156和0.193。综合分析表明,酶提法得到的多糖得率较高且具有较好的体外抗氧化活性。     

纤维素酶法提取决明子粗多糖的工艺优化及其抗氧化活性

目的:优化纤维素酶法提取决明子粗多糖的工艺,并研究决明子粗多糖的体外抗氧化活性。方法:在单因素实验的基础上,以酶解时间、酶解温度、酶用量、液料比及酶解pH为自变量,多糖得率为响应值,利用BoxBehnken响应面法进行工艺优化。以对DPPH自由基和羟自由基清除率的大小为指标考察决明子粗多糖的体外抗氧化活性。结果:纤维素酶法提取决明子粗多糖最佳工艺为酶用量1.4%、酶解时间50 min、液料比24:1 mL/g、酶解pH5.4、酶解温度48℃,此条件下决明子多糖得率为11.67%,与回归模型的理论预测值11.91%误差小于5%。决明子粗多糖对DPPH自由基和羟自由基均具有较强的清除作用,半数抑制浓度分别为1.025 mg/mL和0.894 mg/mL。结论:纤维素酶法可显著提高决明子粗多糖得率,工艺简便可行,获得的决明子粗多糖具有体外抗氧化活性。     

双酶法提取牛蒡根中水溶性膳食纤维及其抗氧化活性的研究

采用双酶法探讨牛蒡根中水溶性膳食纤维的提取工艺,并研究了其抗氧化活性.结果表明:风味蛋白酶的最佳工艺条件:加酶量10%,时间4h,pH 7.0,温度55℃;糖化酶的最佳工艺条件:加酶量1.2%,时间1h,温度60℃,水溶性膳食纤维提取率为11.05%.牛蒡根中水溶性膳食纤维对·OH和O2-·自由基均表现出较强的清除能力,其IC50分别为1.96mg/mL和0.39mg/mL.     

金耳酵母状孢子多糖双酶法提取工艺及其抗氧化性

为提高金耳酵母状孢子多糖得率，在单因素试验的基础上，通过Plackett-Burman试验和正交试验优化金耳酵母状孢子多糖的提取工艺；并通过测定金耳酵母状孢子多糖DPPH自由基和羟自由基清除率对其体外抗氧化活性进行探究。结果表明，金耳酵母状孢子多糖最佳提取工艺条件：纤维素酶200 U/g孢子粉，果胶酶50 U/g孢子粉，酶解时间80 min，酶解温度55℃，酶解pH值为4.5，料液比1∶40（g/mL），在该提取条件下，金耳酵母状孢子多糖得率为（8.41±0.36）% 。体外抗氧化试验表明，金耳酵母状孢子多糖对DPPH自由基和羟自由基的IC50值分别为7.06 mg/mL和19.33 mg/mL。     

蛹虫草多糖提取工艺优化及其抗菌、抗氧化活性

为研究蛹虫草多糖的提取工艺及其抗菌、抗氧化活性，以蛹虫草为原料，采用双频逆流聚能式超声波辅助法提取蛹虫草多糖。以蛹虫草多糖提取率为指标，在单因素试验基础上，通过响应面试验优化其提取工艺。结果表明，蛹虫草多糖最佳提取工艺条件为超声波功率420 W、超声温度60℃、提取时间50 min，该条件下蛹虫草多糖提取率为7.17% 。体外抗氧化试验结果表明，蛹虫草多糖对DPPH自由基、羟基自由基的半数抑制浓度（IC50）分别为36.05 μg/mL和0.33 mg/mL，具有较强的清除能力。体外抗菌试验结果表明，蛹虫草多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有一定的抑制作用，最低抑菌浓度分别为0.4 mg/mL和0.8 mg/mL，且随着质量浓度的增加而不断增强。     

响应面法优化松茸多糖酶法提取工艺及其体外抗氧化性分析

为确定复合酶（纤维素酶、果胶酶、中性蛋白酶）提取松茸多糖的最佳工艺,并对其体外抗氧化活性进行初步研究,在单因素试验的基础上,以料液比、pH值、酶解时间和酶解温度为影响因素,利用Box-Behnken方法进行四因素三水平试验设计,以多糖提取率为响应值,进行响应面分析;分别用邻苯三酚自氧化法和对DPPH自由基的清除作用测定松茸多糖的体外抗氧化性。结果表明：多糖提取的最佳工艺为料液比1∶40（g/mL）、pH 5、酶解温度35 ℃、酶解时间71 min,松茸多糖的提取率预测值为7.06%,验证值为6.95%,与预测值相对误差为1.56%;松茸多糖对超氧阴离子自由基和DPPH自由基具有较强的清除作用,其IC50值分别为0.565 mg/mL和0.454 mg/mL。因此,复合酶法提取松茸多糖高效、简单,可用作松茸多糖的提取工艺;松茸多糖具有明显的体外抗氧化活性。     

五种瓜类蔬菜提取物的抑菌活性研究

分别采用石油醚、乙酸乙酯、95% 乙醇和水作为提取溶剂,应用滤纸片法筛选南瓜、苦瓜、黄瓜、丝瓜和冬瓜五种瓜类蔬菜有机溶剂提取物及其粗多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性。结果表明：南瓜乙酸乙酯提取物抑菌活性最大;将其经硅胶柱层析(CC)和薄层层析(TLC)进一步分离,获得抑菌活性最强的两个组分,它们对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、四联球菌、志贺氏菌、枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌均有广谱抗性,其中以对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,其最低抑制浓度(MIC)分别为1.25mg/ml 和2.5mg/ml。     

茯苓多糖的酶解工艺及抑菌性研究

采用β-葡聚糖酶酶解茯苓多糖获得水溶性茯苓多糖,优化水溶性茯苓多糖的最佳酶解提取工艺,测定酶解产物抑菌效果。通过苯酚-硫酸法测定其含量,以水溶性茯苓多糖含量为评价指标,采用L9（34）正交试验设计,优化酶解工艺条件为酶解反应温度55 ℃,pH值5.5,时间150 min,酶用量9 000 U。在此条件下获得水溶性多糖含量达到9.20%。牛津杯法测定其抑菌活性,结果表明,酶解产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌产生较好的抑菌作用,抑菌圈直径分别为14.67 mm、8.89 mm,对枯草芽孢杆菌未见产生明显抑菌圈,为茯苓水溶性多糖深度开发提供前期研究数据。     

蓝莓多糖的抗氧化性与抑菌作用

利用水提醇沉法从蓝莓中提取多糖,再经初步纯化后,进行多糖的抗氧化性及抑菌作用实验。结果表明,蓝莓多糖对羟自由基和DPPH 自由基有较强的清除作用,且清除率50% 所对应的质量浓度IC50 分别为2mg/mL 和7mg/mL。但蓝莓多糖对超氧阴离子自由基几乎没有作用效果。蓝莓多糖对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母均有一定的抑制作用,最小抑制浓度MIC 在50～75mg/mL 之间,对热带假丝酵母、青霉和黑曲霉无抑制作用。     

响应面法优化鹿骨多肽酶解工艺及其体外抗氧化活性

目的:筛选鹿骨蛋白最适提取温度和最佳酶解工艺并检测其抗氧化活性。方法:根据鹿骨蛋白的蛋白浓度筛选出最适提取温度,根据水解度（DH）通过单因素及响应面实验设计筛选鹿骨多肽的最佳酶解工艺,并通过测定鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基的清除能力来评价鹿骨多肽的抗氧化活性。结果:最佳提取温度为95 ℃,通过响应面法优化及实际验证确定了胃蛋白酶和胰蛋白酶最佳酶解工艺分别为胃蛋白酶酶用量6200 U/g,温度37.3 ℃,pH2.0,时间3.2 h,此时的水解度为11.23%;胰蛋白酶酶用量6300 U/g,温度37.2 ℃,pH8.1,时间4.0 h,此时的水解度为23.09%。鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基具有清除能力,其IC₅₀值分别为:3.72、2.24 mg/mL。结论:本实验得到了鹿骨蛋白最佳提取温度并确定鹿骨多肽最佳酶解工艺,且鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基具有良好的清除能力,说明鹿骨多肽具有良好的抗氧化活性。     

决明子水溶性多糖的纯化及抗氧化活性研究

本研究采用水提醇沉法提取决明子粗多糖,并通过二次醇析和H2O2氧化脱色对其进行了精制,H2O2氧化脱色能有效地去除决明子粗多糖中的蛋白性杂质。决明子多糖抗氧化实验表明:决明子多糖清除Smirnoff反应产生羟自由基(·OH)具有一定的清除作用;决明子多糖体系浓度达到0.022mg/ml时对邻苯三酚自氧化产生超氧阴离子自由基(O2·)产生明显抑制作用。     

酶法水解荞麦球蛋白制备抗氧化活性肽的研究

分别采用3 种蛋白酶水解荞麦球蛋白,以酶解液水解度和对O2·的清除率为指标,研究酶解荞麦球蛋白的最佳工艺。并进一步对酶解产物进行Sephadex G-25 凝胶柱层析分离,然后对其各分离组分清除O2·、·OH 和DPPH·的能力及分子量分布进行研究。结果显示：采用碱性蛋白酶水解荞麦球蛋白效果优于胰蛋白酶和木瓜蛋白酶,最佳酶解工艺条件为：加酶量20000U/g,温度55℃,pH9,底物浓度5%,反应时间2h;经柱层析分离得到的分子量小于1000D 的组分Ⅲ显示了较强的抗氧化能力。其清除O2·、·OH 与DPPH·的IC50 分别为0.75、0.897、0.38mg/ml,高于分子量较大的组分Ⅰ和未经分离的荞麦球蛋白酶解液。     

天麻多糖分离、结构分析与自由基清除作用研究

目的：研究活性天麻多糖的提取、结构分析与自由基清除作用。方法：以水提醇沉法制备天麻粗多糖,CTAB 季铵盐络合法、凝胶过滤柱层析进一步纯化;通过IR、NMR 等分析天麻多糖结构;利用Feton 体系和邻苯三酚自氧化反应,采用比色法测定天麻多糖对·OH 及O2·的清除作用。结果：通过正交试验获得天麻多糖提取工艺为：料水比1:40,浸提温度80℃,提取次数2 次,75% 乙醇沉淀;红外光谱和1H-NMR 分析天麻多糖为α- 吡喃己糖,单糖分析结果显示它为单一葡萄糖残基组成,13C-NMR 分析表明天麻多糖为带1 → 6 键接支链的α-(1 → 4)-D- 葡聚糖;在相同的实验体系浓度下,天麻粗多糖及纯化多糖对·OH 的IC50 分别为1.18、1.62mg/ml;对O2·的IC50 分别为0.81、1.03mg/ml。结论：天麻多糖为1 → 6 键接支链的α-(1 → 4)-D- 葡聚糖,对O2·具有一定清除能力。     

酶-超声辅助提取苦荞秆中总黄酮及抗氧化活性研究

以秦巴山区苦荞秆为原料,通过单因素结合正交试验研究了纤维素酶-超声辅助提取苦荞秆中总黄酮的工艺条件,并考察其对羟基自由基、超氧阴离子自由基和ABTS自由基正离子的清除活性及还原能力。结果表明,苦荞杆总黄酮的最佳提取工艺为：纤维素酶10 mg/g,乙醇体积分数40%,超声温度40 ℃,超声时间30 min,料液比为1∶40（g∶mL）,该条件下总黄酮的得率为2.30%,苦荞秆总黄酮对羟基自由基、超氧阴离子自由基和ABTS自由基正离子的半抑制浓度IC50值分别为0.18 mg/mL、0.24 mg/mL和2.24 μg/mL,强于同浓度条件下天然抗氧化剂维生素C。     

鸡骨胶原蛋白肽抗氧化性的研究

选取具有代表性的·OH、DPPH·、O2·三种自由基体系和铁离子还原体系,以不同浓度鸡骨胶原蛋白肽的抗氧化作用作为指标,评价鸡骨胶原蛋白肽的抗氧化性能。结果显示：鸡骨胶原蛋白肽对三种自由基都具有明显的清除作用,在相应浓度范围内,·OH 最大清除率为99.74%,半抑制浓度IC50 为 4.85mg/ml;DPPH·最大清除率为80.24%,IC50= 32.06μg/ml;O2·最大清除率为53.71%,IC50=16.48μg/ml。同时,对铁离子还具有显著的还原能力。     

灵芝菌液体发酵玉竹产水溶性多糖的工艺优化和抗氧化性研究

为探究灵芝菌发酵玉竹产水溶性多糖工艺及多糖的抗氧化能力,该研究利用灵芝菌液体发酵玉竹,以多糖提高率为评价指标,通过单因素试验及响应面试验对其发酵工艺进行优化,并测定发酵前后多糖的抗氧化能力。结果表明,最佳发酵条件为玉竹添加量6%、豆粕添加量为2%、KH2PO4添加量0.15%、MgSO4·7H2O添加量0.15%、接种量8.7%、发酵时间4 d及发酵温度30 ℃。在此优化条件下,发酵液多糖含量达到5.91 mg/mL,较未发酵的培养基（3.41 mg/mL）提高了73.48%。抗氧化试验表明,在相同浓度下,发酵后多糖（PAF）对比发酵前多糖（PBF）的ABTS+·、DPPH·、OH·清除率均有所提高。其中,PAF对DPPH和OH·的半抑制浓度（IC50）值分别为2.77 mg/mL、0.54 mg/mL,PBF对DPPH·和OH·的IC50值分别为7.94 mg/mL、1.57 mg/mL。结果表明,PAF具有更强的体外抗氧化能力。     

客家黄酒的抗氧化作用研究

以绍兴黄酒作为对照,对不同品牌的客家黄酒中的化学成分进行测定,并对其清除DPPH自由基、超氧自由基、ABTS自由基、羟自由基的能力进行研究。结果表明,不同品牌黄酒的酒精度、可溶性固形物、总黄酮、多酚、总酚酸含量依次分别为：珍珠红娘酒16.31%vol、103.42 g/L、0.89 mg/L、11.98 mg/L、0.19 mg/L;梅州娘酒15.63%vol、101.72 g/L、1.86 mg/L、10.3 mg/L、0.42 mg/L;月子酒13.42%vol、91.90 g/L、1.61 mg/L、12.13 mg/L、0.56 mg/L。三种客家黄酒均对DPPH自由基、超氧自由基、羟自由基、ABTS自由基有一定的清除能力：珍珠红娘酒对四种自由基的IC50值依次为68.05 μL/mL、388.11 μL/mL、405.71 μL/mL、438.54 μL/mL,梅州娘酒的IC50值为55.94 μL/mL、378.09 μL/mL、387.90 μL/mL、440.80 μL/mL,月子酒的IC50值为98.63 μL/mL、871.65 μL/mL、345.42 μL/mL、935.20 μL/mL。综合比较可知,珍珠红娘酒、梅州娘酒的抗氧化性高于月子酒和绍兴黄酒。     

核桃饼粕多酚纯化工艺及其抗氧化活性的研究

研究大孔树脂纯化核桃饼粕多酚的工艺,比较AB-8、HPD-100、D101、X-5、NKA-9五种大孔树脂对核桃饼粕多酚的分离纯化效果。结果表明,HPD-100为分离纯化核桃饼粕多酚的最佳大孔树脂,其最佳纯化工艺为上样液pH值为4.0,质量浓度4.0 mg/mL,流速2 BV/h,体积1.8 BV,以体积分数为75%乙醇洗脱,洗脱流速4 BV/h,洗脱体积3 BV。用该工艺纯化后,核桃饼粕多酚的纯度从26.63%提高到81.10%,回收率为87.33%。纯化后的核桃饼粕多酚对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、羟基自由基（·OH）、过氧化氢（H2O2）和超氧阴离子自由基（O-2·）清除作用均呈现量效关系,半数抑制浓度IC50分别为481.18 μg/mL、151.43 μg/mL、8.19 μg/mL和202.83 μg/mL,对DPPH和·OH清除能力较VC强,具有深入研究的价值。     

金氏真蛇尾多糖的抗氧化和抑菌活性研究

以黄海产金氏真蛇尾为原材料,采用碱提法,经脱脂、脱蛋白后得金氏真蛇尾多糖,通过Fenton反应和邻苯三酚自氧化法来测定多糖溶液对自由基的清除能力,采用滤纸片法测定金氏真蛇尾多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母菌和灰绿青霉的抑制作用。结果显示：金氏真蛇尾多糖对羟基自由基(·OH)和超氧阴离子(O2-·)具有较好的清除作用,并且清除率与多糖溶液呈现量效关系,多糖对羟基自由基(·OH)和超氧阴离子(O2-·)的最大清除率分别为45.68%和40.47%,表明蛇尾多糖具有一定的抗氧化活性,但是仍小于同质量浓度的VC溶液;金氏真蛇尾多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和啤酒酵母的抑菌圈大小分别为13.46 mm、14.12 mm和14.73 mm,具有较好的抑菌作用,但对灰绿青霉则没有抑制作用。通过抗氧化和抑菌活性的研究,表明黄海产金氏真蛇尾多糖具有较好的抗氧化及抑菌活性。     

鲍鱼壳水溶性基质抗氧化活性研究

考察鲍鱼壳水溶性基质(WSMA)抗氧化活性。利用DEAE-Sephadex A-25 离子交换层析法(IEC)对WSMA进行纯化。以珍珠水溶性基质(WSMP)及VC 为对照,通过对二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)、羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2·)的清除能力和Fe3+ 还原能力的研究考察其抗氧化作用。结果表明,WSMA 与WSMP 具有相似的Fe3+ 还原能力和O2·清除能力,而对DPPH·和·OH 无清除作用。通过IEC 纯化得到的AⅡ组分为主要活性成分,当质量浓度为1.0mg/mL 时,对O2·清除率达80%,与0.1mg/mL 的VC 相当。