利用生物素链霉亲和素放大酶联免疫方法检测猪肉中莱克多巴胺残留

以酶联免疫方法为基础.结合生物素-链霉亲和素系统的放大作用,建立直接竞争生物素链霉亲和素放大酶联免疫(BA-ELISA)检测方法,并将其用于猪肉肌肉组织中莱克多巴胺残留的检测,方法灵敏度(IC50)为(0.3±0.05)ng/mL,样品检出限为(0.3+0.1)ng/kg,平均加标回收率在84%以上.     

莱克多巴胺ELISA检测假阳性原因分析

目的对酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测莱克多巴胺假阳性结果产生的原因、影响因素和质量控制方法进行分析研究。方法应用经验证可靠的ELISA方法对进口猪肉产品进行莱克多巴胺兽药残留初筛检测,对阳性可疑样品采用液相色谱.串联质谱分析方法进行确证检测,并对两种方法的检测结果进行对比分析。结果样品在腐败变质后产生含有可以产生非特异性显色内源性辣根过氧化物酶的细菌,从而造成假阳性,干扰检测结果。结论莱克多巴胺检测中造成酶联免疫吸附(ELISA)方法假阳性结果的主要原因包括莱克多巴胺的代谢速度快,ELISA检测所用抗体与莱克多巴胺的交叉反应性高,以及样品因素的影响。     

肉及肉制品中莱克多巴胺的ELISA检测方法的建立

建立一种肉及其制品中莱克多巴胺的酶联免疫分析方法。对莱克多巴胺残留量进行选择性(交叉反应)、特异性与检测限以及回收率和精密度测试。结果显示,选择酶联免疫法来检测样品中的莱克多巴胺准确性较好,其对莱克多巴胺结构类似物的交叉反应率都小于1%,出口猪肉罐头和牛肉中的检测限(LOD)分别为(0.28±0.30)μg/kg和(0.26±0.21)μg/kg,样品平均回收率在82.9%～91.1%之间,相对标准偏差为4.3%～8.7%,经高效液相色谱(HPLC)确证假阳性率小于等于2.0%,表明酶联免疫分析定量法可快速、准确实现对食品中莱克多巴胺残留量的快速筛选。     

3种β-兴奋剂化学发光酶免疫试剂盒分析检测方法的评价

选取3种市售β-兴奋剂化学发光酶免疫分析检测试剂盒,从线性关系、灵敏度、选择性、检出限、准确度、重复性及变异性等方面进行实验,并经农业部1025号公告—18—2008中高效液相色谱—串联质谱法验证比较,初步建立了一套化学发光酶免疫分析检测试剂盒质量评价方法。结果表明:沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺3种试剂盒在测定范围内线性关系良好,灵敏度分别为0.7、1.8、1.0 ng/mL,检出限分别为0.2、0.1、0.2 ng/mL,猪肝、猪肉和牛肉的回收率在81.9%~115.2%之间,重复性变异系数为3.3%~9.7%,批间变异系数为9.9%~16.5%,交叉反应率均符合产品说明书要求,可以用于猪肝、猪肉、牛肉样品中沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺的残留检测。     

基于分子印迹聚合物的微流控化学发光传感器检测莱克多巴胺

目的制备能特异性识别莱克多巴胺(ractopamine,RCT)的分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymers,MIPs),将该印迹聚合物与微流控化学发光法结合起来,以制备高选择性的化学发光传感器。方法利用沉淀聚合法制备莱克多巴胺印迹聚合物,采用扫描电镜、红外光谱法、吸附实验对其进行表征;以该印记聚合物为识别元件,以微流控芯片为流通反应池,并以化学发光仪作为检测器,通过流动注射分析法来检测猪肝和牛肉中的莱克多巴胺。结果在最佳条件下,测得莱克多巴胺线性范围6～960 ng/mL,线性回归方程为?I=4.8777C-9.7851,r=0.9907,检出限为0.83 ng/mL,对10 ng/mL莱克多巴胺平行测定11次,其RSD(相对标准偏差)为7.1%。应用该方法成功分析了猪肝和牛肉中RCT含量,回收率可达90.3%~99.8%。结论本方法快速、准确、样品前处理简单,能很好地用于食品中莱克多巴胺残留的检测。     

基于分子印迹聚合物的微流控化学发光传感器 检测莱克多巴胺

目的 制备能特异性识别莱克多巴胺(ractopamine, RCT)的分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymers, MIPs), 将该印迹聚合物与微流控化学发光法结合起来, 以制备高选择性的化学发光传感器。方法 利用沉淀聚合法制备莱克多巴胺印迹聚合物, 采用扫描电镜、红外光谱法、吸附实验对其进行表征; 以该印记聚合物为识别元件, 以微流控芯片为流通反应池, 并以化学发光仪作为检测器, 通过流动注射分析法来检测猪肝和牛肉中的莱克多巴胺。结果 在最佳条件下, 测得莱克多巴胺线性范围6?960 ng/mL, 线性回归方程为?I=4.8777C-9.7851, r=0.9907, 检出限为0.83 ng/mL, 对10 ng/mL莱克多巴胺平行测定11次, 其RSD(相对标准偏差)为7.1%。应用该方法成功分析了猪肝和牛肉中RCT含量, 回收率可达90.3%~99.8%。结论 本方法快速、准确、样品前处理简单, 能很好地用于食品中莱克多巴胺残留的检测。     

基于多壁碳纳米管免疫传感器法快速测定食品中的莱克多巴胺

以改性壳聚糖包埋固定羧基化多壁碳纳米管和莱克多巴胺抗体,构建免疫传感器用于莱克多巴胺的检测。以K3[Fe(CN)6]为探针,利用循环伏安法表征传感器构建过程和差分脉冲伏安法探究莱克多巴胺抗体/抗原间免疫反应对电流的影响。结果表明,在优化条件下,免疫响应电流与溶液中莱克多巴胺质量浓度的立方根在0.05～4.05 ng/mL范围内呈线性关系,其线性方程为Ip=－4.524 4CRAC1/3＋14.259（R2= 0.990 4 ）,最低检测限为0.08 ng/mL（RSN=3）;所构建的免疫传感器的特异性、稳定性和重复性良好。该法对猪肉、羊肉等样品进行检测,其检测结果与国标方法高效液相色谱法一致,检测快捷方便,可用于食品中莱克多巴胺的快速检测。     

铂纳米粒子/(聚乙烯醇/聚乙烯亚胺)杂化材料的制备及应用

以聚乙烯醇(PVA)和聚乙烯亚胺(PEI)的混合液为纺丝前驱体,通过静电纺丝技术制备了PVA/PEI超细纤维膜。然后依次利用戊二醛(GA)将其交联和3-巯丙基三乙氧基硅烷(MPTES)功能化处理后成功地在其上负载了铂纳米颗粒(Pt NPs),得到了Pt NPs/(PVA/PEI)杂化材料。通过场发射扫描电镜(FE-SEM)、透射电镜(TEM)、X射线衍射图谱(XRD)及傅里叶转换红外光谱(FT-IR)等表征手段对制备的Pt NPs/(PVA/PEI)杂化材料进行表征。结果表明制备了Pt NPs均匀分散的Pt NPs/(PVA/PEI)杂化材料。将制备的杂化材料用于罗丹明B的催化降解,结果表明Pt NPs/(PVA/PEI)杂化材料对罗丹明B具有优异的催化降解效果。     

莱克多巴胺荧光微球免疫层析检测方法的建立

以荧光微球作为新型标记物,采用EDC法进行偶联,制备莱克多巴胺抗体荧光微球复合物,复合物粒度均一、性质稳定,并以之为探针建立莱克多巴胺荧光微球免疫层析检测方法,检测限为2.5ng/mL,且特异性强、检测范围宽。与胶体金免疫层析方法相比,荧光微球免疫层析方法的灵敏度更高,新型的荧光微球可以提高免疫层析方法的灵敏度。     

莱克多巴胺抗体的制备与评价

本文以RAC-linker-BSA为免疫抗原获得了莱克多巴胺的多克隆抗体,用混合酸酐法合成包被抗原,建立了莱克多巴胺的间接竞争酶联免疫检测方法(ELISA),并对抗体性质进行了评价.结果表明,制备出的莱克多巴胺抗体具有较高的灵敏度,IC50为0.9 ng/mL,检出限(IC15)为0.1 ng/mL,低于同类文献的报道结果;除了与多巴酚丁胺的交叉反应为7.5 %外,与克伦特罗、沙丁胺醇、特步他林、异丙肾上腺素和异奎胍均无交叉现象,说明抗体特异性较高;此外,抗体具有很好的稳定性,可在4 ℃冰箱中储存半年以上.为建立酶联免疫快速检测方法,实现对莱克多巴胺的有效监控奠定了良好的基础.     

基于智能手机同时检测4 种兽药残留的免疫芯片技术

建立一种基于智能手机同时检测猪尿中莱克多巴胺、盐酸克仑特罗、氯霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多种兽药残留的免疫蛋白芯片方法。以硝酸纤维素膜（NC膜）为固相载体固定4 种药物抗原,基于分析物与固相抗原竞争抗体的反应,利用不同质量浓度的药物标准品与芯片显色斑点检测强度作标准曲线,建立智能手机检测方法。该方法对莱克多巴胺、盐酸克仑特罗、氯霉素、氟苯尼考的检出限分别为0.146、0.137、0.035、3.73 ng/mL,线性范围分别为0.353～1.017、0.309～0.897、0.082～0.249、9.424～35.594 ng/mL,与氟苯尼考胺的交叉反应率为81.5%。同时将本方法与胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附法进行对比,检测结果基本一致。本方法具有低成本、高通量、操作方便等特点,适用于现场快速大量筛选。     

基于广谱性单克隆抗体免疫分析有机磷农药残留

目的制备和筛选出一种能识别一类或几类具有结构相似的有机磷杀虫剂的广谱性鼠单克隆抗体(m Ab)以对多农药残留同时进行检测。方法制备抗有机磷组特异性单克隆抗体,利用间接竞争性ELISA法对几种有机磷农药的标准品进行检测。结果对乙基毒死蜱检测灵敏度较高,最低检测限(LOD)为4 ng/m L,对甲基对硫磷的LOD为63 ng/m L;辛硫磷和三唑磷的检测敏感度低、一致性差。结论根据农药化学结构的不同,检测灵敏度有一定的差别,对乙基毒死蜱和甲基对硫磷检测效果较好。     

直接竞争化学发光酶免疫法检测猪肉中磺胺嘧啶

建立一种检测猪肉中磺胺嘧啶的简便、快速、高特异性的直接竞争化学发光酶免疫法。采用改良的过碘酸钠法制备酶标抗体,以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢作为化学发光体系。经优化该方法检测条件为：利用柠檬酸缓冲液稀释抗原包被质量浓度为0.8μg/mL,酶标抗体2000倍稀释,竞争反应25min;所建立的方法分析灵敏度为2.96ng/mL,批内变异系数小于8.32%,批间变异系数小于13.4%,以猪肉为样品的分析回收率为75.6%～103.7%,与其他结构类似物未见明显交叉,所建立的标准曲线相关系数为0.9922、检测线性范围为4.14～244ng/mL、检测时间为25min,可在实际生产中应用。     

Development of an Ultrasensitive Immunochromatographic Assay (ICA) Strip for the Rapid Detection of Phenylethanolamine A in Urine and Pork Samples

In this study a one‐step immunochromatographic assay based on competitive format was developed for the rapid detection of phenylethanolamine A (PEAA) residues in urine and pork samples. A monoclonal antibody against PEAA was produced from BALB/c mice immunized with the PEAA‐BSA conjugate. The results of this qualitative test strip were to be interpreted visually. The visual detection limit (VDL) and threshold level of the optimized immunochromatographic assay for PEAA were 0.1 ng/mL and 0.5 ng/mL, respectively. Cross‐reactions with other β‐agonists were not significant inhibitions to the performance of the test strip assay. The results from the test strip were in a good agreement with those obtained using a high performance liquid chromatography‐tandem mass spectrometry (HPLC‐MS/MS) assay. The immunochromatographic assay developed here was a useful on‐site screening tool that is rapid to use, low in cost, and extremely convenient for the detection of PEAA in urine samples and pork samples.     

高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉及猪肉制品中牛磺酸含量

建立猪肉及猪肉制品中牛磺酸含量的高效液相色谱-串联质谱（high performance liquid chromatographytandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS）检测方法。样品经水超声提取后,经乙腈沉淀蛋白,正己烷除脂肪,采用HPLC-MS/MS法定量测定。结果表明：在1～1 000 ng/mL线性范围内,牛磺酸的回归方程呈良好的线性关系,R2＞ 0 . 9 98, 在猪肉和猪肉制品阳性样品中加标水平为20～50 mg/ 1 0 0 g时, 牛磺酸的加标回收率为92.78%～104.96%,相对标准偏差为1.39%～3.80%;该方法的仪器检出限为0.3 ng/mL,仪器定量限为1 ng/mL,方法检出限为0.1 mg/100 g,方法定量限为0.5 mg/100 g;该方法检出限低,回收率、灵敏度、准确度和精密度均较高,且操作简便、快捷,适用于猪肉及猪肉制品中牛磺酸含量的准确定性定量。     

Development of an Immunochromatographic Test Strip for Rapid Simultaneous Detection of Enrofloxacin and Ofloxacin in Tissue of Chicken Muscle and Pork

ENR and OFL are the most consumed quinolones on livestock in China. In this work, we developed a rapid immunochromatographic lateral flow test strip for simultaneous detection of the residues of enrofloxacin and ofloxacin in chicken muscle and pork. We screened an anti-ENR and OFL monoclonal antibody. The IC₅₀ of anti-ENR and anti-OFL were 6.67 and 7.13 ng/ml, respectively. The present immunochromatographic lateral flow test strip is a one-step assay and required much less professional personnel and experimental instruments. In the present study, the decision limit (CCα) of the test strip was calculated to be 0.089 ng/mL and detection capability (CCβ) was 0.217 ng/mL with the scanner. The limit of detection was estimated to be 10 ng/mL. According to parallel HPLC analysis with 47 blind samples, coincidence rate is 100 % when the contents of ENR and OFL were more than 10 ng/mL. Results indicated that the strip test we developed had good reliability, and the strip test gave neither false positive nor false negative results. It will provide results within 20 min without special equipment. Therefore, the test strip is very useful as a screening method for semi-quantitative or qualitative detection of enrofloxacin and ofloxacin in chicken muscle and pork.     

直接竞争ELISA法检测动物源食品中利巴韦林残留

本研究针对动物源食品中利巴韦林残留的问题,建立了直接竞争酶联免疫分析方法,快速高效地检测利巴韦林残留。采用活泼酯法将利巴韦林(RBV)与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联制备利巴韦林完全抗原(KLH-RBV),通过免疫新西兰大耳白兔得到多抗血清,经Protein A-Sepharose 4B凝胶柱纯化后得到纯化抗体,在此基础上建立直接竞争ELISA检测方法。该方法的IC₅₀为10.84 ng/mL,最低检测限达0.002 ng/mL,对鸡肉、鸡肝、猪肉、猪肝等实际样品进行检测,加标回收率为80.23%~90.07%。采用高效液相色谱法进行验证,两种方法测定结果呈现良好的线性关系(R2≥0.99)。本文建立的方法灵敏度高,简便快速,适合现场大批量快速检测动物源食品中利巴韦林残留。     

特布他林残留的酶联免疫检测方法的建立

采用自主制备的特布他林特异性抗体建立特布他林残留的间接竞争酶联免疫(ELISA)检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性进行测定,并将该检测方法与高效液相色谱(HPLC)法进行对比分析。结果表明：特布他林残留检测体系的检测范围为1～100ng/mL,灵敏度为0.47ng/mL,检测限为1ng/mL,回收率80%～99%,与盐酸克伦特罗、硫酸沙丁胺醇的交叉反应率分别为94.9%、93.9%,与盐酸莱克多巴胺及肾上腺素的交叉反应率小于0.01%。采用HPLC 法进行沙丁胺醇残留的检测时,其检测范围为10～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为79.2%～94.8%。ELISA 法与HPLC 法相比,灵敏度较高、特异性强、检测结果准确度相近,但在检测结果稳定性方面逊于HPLC 法。