紫外分光光度法测定纳豆激酶体外纤溶活力

建立短时间、定量测定纳豆激酶体外纤溶活力的方法。在体外反应体系中制备血纤维蛋白底物,向体系中加入待测样品(纳豆激酶),进行纤溶反应。用紫外分光光度计测定纳豆激酶水解纤维蛋白后生成的可溶性产物的吸光值。由此对纳豆激酶体外纤溶活性进行定量测定并进行方法可行性分析。该方法具有较好的灵敏度、精密度和准确度,用时短,该方法适用于纳豆激酶体外纤溶活性的定量分析。     

纳豆激酶纤溶活性研究

通过制备纳豆提取液、纳豆激酶粗酶,对纳豆激酶纤溶活性进行研究。结果表明:纳豆激酶纤溶活性最适pH为8.0,pH6~10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。     

纤溶活性重组纳豆激酶在大肠杆菌中的表达

通过PCR方法扩增纳豆激酶成熟肽和纳豆激酶酶原(proNK)基因片段,并分别克隆到表达载体pET28a上,构建与His标签融合表达的重组表达质粒pET28a-NK和pET28a-proNK,转化大肠杆菌宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和纤维蛋白平板检测目的蛋白的表达及表达产物的纤溶活性.结果表明,纳豆激酶成熟肽基因在大肠杆菌中的表达产物以包涵体形式存在,表达产物没有纤溶活性;纳豆激酶酶原基因在大肠杆菌中的表达产物能自我剪切,形成有纤溶活性的纳豆激酶,但同时对宿主细胞有降解毒性.     

来源于豆豉的枯草芽孢杆菌MX-6所产纳豆激酶的稳定性研究

以中国豆豉中筛选到的1株纤溶酶高产菌株———枯草芽孢杆菌MX-6为研究对象,应用聚合酶链式反应(PCR)成功扩增到1473bp的纤溶酶编码基因aprN,系统进化树结果显示该纤溶酶为纳豆激酶。研究了纳豆激酶对热、pH、金属离子、化学物质、抑制剂和变性剂的稳定性及传代稳定性。结果表明:纳豆激酶在-20,4,30～50℃的热稳定性较好,pH在3～11之间酶活性相对稳定,Mg~(2+)、Ca~(2+)对纳豆激酶具有显著的激活作用,K~+、Fe~(2+)对纳豆激酶的稳定性基本无影响,而Mn~(2+)、Zn~(2+)、Cu~(2+)、Al ~(3+)、Ba~(2+)有显著的抑制作用,Hg~(2+)导致纳豆激酶完全失活,牛血清蛋白、明胶、蛋白胨能够显著提高纳豆激酶的稳定性,丙二醇、海藻酸钠对纳豆激酶的稳定性基本无影响,而乙醇显著降低纳豆激酶的稳定性。PMSF导致纳豆激酶的活性完全丧失,EDAT和DTT对纳豆激酶的活性基本无影响,10mmol/L的SDS显著降低纳豆激酶的稳定性,说明此纳豆激酶是一种丝氨酸蛋白酶,不是金属酶,不含二硫键,且具有良好的传代稳定性。结果显示该酶的稳定性较好,具有开发为溶栓药物的应用价值,有利于纳豆激酶的工业化应用。     

纳豆激酶的纯化及性质研究

从固态发酵培养的纳豆中提取纳豆激酶 ,采用盐析、疏水层析、离子交换层析等方法 ,对提取液进行纳豆激酶的分离纯化。经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 ,活性酶蛋白为单一组分 ,并测得其分子质量为 2 8ku。纳豆激酶在pH5 0～ 1 0 0 ,4～ 3 7℃范围内具有较好的稳定性 ,其纤溶活性可被 0 1mmol/L的PMSF完全抑制。体外溶栓实验表明 ,纳豆激酶为纤溶酶而不是纤溶酶原激活剂。     

纳豆激酶基因在酿酒酵母中的表达

目的:从纳豆芽孢杆菌基因组DNA中扩增纳豆激酶基因,以实现该基因在酿酒酵母中的表达.方法:通过PCR方法扩增纳豆激酶基因,利用DNA重组技术构建重组质粒pYES2-NK,转化酿酒酵母H158感受态细胞;经β-半乳糖诱导表达后,用纤维蛋白平板法检测纤溶酶活性.结果:克隆到大小为1192bp的纳豆激酶基因,编码397个氨基酸;活性检测表明酿酒酵母发酵液的上清液具有纤溶酶活性.结论:纳豆激酶基因在重组酿酒酵母中实现了分泌表达.     

纳豆激酶分离纯化及纤溶活性研究

经过生理盐水浸提、(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析等纯化步骤,从纳豆中获得层析纯的纳豆激酶,纯化倍数15.6,回收率10.2%,SDS-PAGE电泳显示为二个组分,分子量在29000左右。对其纤溶性质研究表明:纳豆激酶活性的最适pH为8.0,pH6～10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆生理盐水浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。     

纳豆冻干粉中纳豆激酶的活性测定

建立纳豆冻干粉中纳豆激酶的活性测定方法。采用甲苯磺酰-L-精氨酸甲脂法(以下简称为TAME法)测定,以TAME为底物,通过纳豆激酶对其的切割作用及变色等反应,在576nm波长处测定其吸光度,并对其进行方法学考察。该法操作简便,灵敏度高,方法学考察结果显示良好,可作为纳豆冻干粉中纳豆激酶的活性测定方法。     

纳豆激酶液体发酵技术研究进展

纳豆激酶是一种由纳豆菌产生的具有强烈纤溶作用的丝氨酸蛋白酶,与传统的一些溶栓剂相比,其具有安全性好、成本低、经口服后可迅速入血,纤溶活性强,作用时间长等优点。有望被开发为新一代的口服抗血栓药物。现就纳豆激酶的结构、性质、功能以及开发现状和应用前景等方面进行了综述。     

纳豆激酶高产菌的快速筛选及其发酵纳豆特性

通过纤溶活性筛选法和纳豆激酶基因筛选法,快速、准确筛选到一株纳豆激酶高产菌株MJ-1,经16S rRNA基因序列分析,该菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌。以黄豆为原料进行固体发酵制备纳豆食品,考察了纳豆食品的纳豆激酶活力、抗凝活性和抗氧化活性。在初始含水量60%、发酵温度37 ℃的条件下,纳豆激酶发酵活力在20 h达到最大值（90.18 FU/g,以干质量计）,达到了商业化纳豆的酶活力水平。抗凝活性分析显示该菌株可合成抗凝成分,赋予纳豆食品抗凝活性,在提取物质量浓度为3 mg/mL时,抗凝效率达91%。同时,与未发酵黄豆相比,发酵过程显著提高了其抗氧化活性。     

服装用织物屏蔽效能测试方法—屏蔽箱法的探讨

基于电磁波的屏蔽原理,采用一种新的测试织物电磁屏蔽效能的方法-屏蔽箱法,对增重率不同的化学镀银聚酰胺6织物进行测试.结果表明:发射源与人的距离可以用发射源与屏蔽材料的距离来模拟;织物屏蔽效能随着镀层增重率的增加而提高,提高到一定程度后屏蔽效能值趋于稳定;材料性能的变化可以用屏蔽箱法测试的数据直接反映;这种测试织物屏蔽效能的方法经济有效,且测试结果具有较好的重复性.     

碱法和超声辅助酶法分离燕麦淀粉的比较研究

比较碱法和超声辅助酶法两种不同的分离方法对燕麦淀粉的提取效果影响.结果表明,碱法最佳工艺条件为pH值为10、料液比1∶6(m∶V)、搅拌时间为90min,该条件下燕麦淀粉的提取率为85.62％.超声辅助酶法分离燕麦淀粉的最佳工艺条件为:酶添加量为1.0％、酶解温度为40℃、酶解时间1h,超声处理20min,酶解pH值为7.0,该务件下燕麦淀粉的提取率为88.91％.试验结果显示超声辅助酶法提取率高,反应时间短,节约能耗,环境污染少.     

传统微生物法测试乳粉中生物素与试剂盒法方法比较

目的 微生物法和试剂盒法测试配方奶粉中生物素含量比较。方法 用国标方法GB5009.259-2016和试剂盒方法测试标准参考物质和不同配方奶粉中生物素含量,对结果进行精密度和相对偏差比较。 结果 微生物方法测得标准参考物质生物素平均值为173.6 μg/100g,试剂盒方法标准参考物质生物素平均值为199.4μg/100g,与标准物质指定值(189 μg/100g)相对偏差分别为8.49%,5.34%;对不同配方奶粉生物素检测,两种方法的相对偏差<10%。 结论 微生物法与试剂盒法测试配方奶粉中生物素结果接近,可综合实验室人员和经济条件选择适当的方法进行测试。     

乳糖法与LST法检测大肠菌群的差异性研究

目的:为了解乳糖法与LST法检测大肠菌群的差异,帮助产品标准的更改。方法:乳糖法与LST法分别对大肠杆菌标准菌液和8类食品进行检测。结果:对大肠杆菌标准菌液的检测,乳糖法和LST法在MPN95%可信限内都是准确的、可靠的。LST法比乳糖法的平均检出率高出143%。对8类食品的检测,2种方法总体上存在显著性差异,LST法比乳糖法的平均不合格率高82.41%。就个体来讲,当食品中含有较多大肠菌群时,两者的结果有显著差异;当样品中含有极少或者不含有大肠菌群时,两者的结果没有显著差异。结论:LST法比乳糖法的检出率高,修订产品标准时,对易被大肠菌群污染的产品应依据LST法的结果重新修订标准值。     

一种基于预处理共轭梯度法的给水管网水力计算方法

提出了一种新的给水管网水力计算方法.该方法对给水管网系统的节点流量连续性方程进行重新构造,用改进的Cholesky分解方法对重新构造的矩阵进行三角分解,然后使用预处理共轭梯度法求解.经用供水管网模型进行验证并与EPANET软件的计算结果进行比较,结果表明:该算法共迭代5次,用时0.102 s,与EPANET混合节点-环方法的求解精度和速度非常接近,且弥补了EPANET软件的应用缺陷,可用于求解大型城市的给水管网系统.     

基于最优最劣和熵值法的肉制品中重金属污染程度综合评价模型

提出一种基于最优最劣和熵值法的肉制品中重金属污染综合评价模型,该方法首先从毒性、含量2个方面构建评价体系,然后用最优最劣法评价各类肉制品的重金属污染程度,用熵值法对各地区肉制品中重金属污染程度进行综合评价。以某省5个城市4类肉制品重金属检测数据为例进行案例研究,对4类肉制品重金属污染程度排序发现,按内梅罗指数法和超标率两种评价方法计算的结果分别为熟肉干制品>腌腊肉制品>酱卤肉制品>熏煮香肠火腿制品和腌腊肉制品>酱卤肉制品>熟肉干制品>熏煮香肠火腿制品;而用文中综合评价方法计算的结果为酱卤肉制品>腌腊肉制品>熟肉干制品>熏煮香肠火腿制品。对5市肉制品重金属污染程度进行排序发现,按内梅罗指数法和超标率两种评价方法进行计算的结果均为A市>C市>B市>E市>D市,与文中方法的排序结果一致。对比方法和文中综合评价方法排序结果既有联系又有差异,造成差异的原因是对比方法考虑因素单一,而文中所提模型能较全面客观反映重金属污染情况,并可以有效突出不同地区重金属污染程度的差距。     

UHT产品三聚氰胺检测方法中前处理改进方法

研究TUHT产品三聚氰胺检测过程中前处理的检测方法,样品前处理利用透析纸或透析袋的热熔性和透析度,通过分子隔断筛选,使三聚氰胺分子自由穿入并溶于水中。此方法与国标方法比较：透析方法的前处理省时省事,并且所用消耗品较少,总体成本较现用方法便宜,但是在使用透析纸密封样品时必须小心包扎,不能漏样。     

氯仿-甲醇法和酸水解法测定禽蛋中脂肪的方法比较

目的 对比富含磷脂等结合态脂肪的蛋制品中脂肪含量测定的方法,弥补目前国标中规定的酸水解检测方法无法准确地测定富含磷脂等结合态脂肪样品的不足。方法 采用氯仿－甲醇提取法对比国标中规定的蛋制品脂肪测定方法-酸水解法,测定蛋制品中的脂肪含量, 考察了两种方法测定不同蛋制品的提取结果、提取时间、精密度和重复性。结果 采用氯仿－甲醇法对比酸水解法提取蛋制品中的脂肪含量,结果表明,氯仿-甲醇提取法可以有效的提取蛋制品的磷脂等结合态脂肪,对蛋制品脂肪的测定具有较高的精密度和较好的重复性,相对标准偏差在0.91%-1.62%之间,且测定周期短,测定次数少。结论 氯仿－甲醇法弥补了酸水解法水解磷脂的不足且测定快速、准确,适合测定蛋制品中的脂肪含量。     

酒精工厂改良湿法与半干法玉米处理工艺的对比

介绍了酒精生产过程中几种玉米处理工艺,重点从工艺、设备、公用工程消耗、提胚效率和经济效益等方面对改良湿法和半干法进行了对比,得出改良湿法是综合效益最优的玉米处理方法。     

淋饭法、摊饭法在半甜型绍兴黄酒生产中的应用比较

淋饭法、摊饭法是半甜型绍兴黄酒生产中最常用的生产工艺，虽然2种工艺生产半甜型黄酒的机理基本一致，但生产过程具有较大的芹异。该文从工艺操作和对半甜型黄酒生产过程中感官指标和理化指标的分析，指出了2种工艺生产半甜型黄酒的优缺点。