盐法提取菠萝蛋白酶的研究

采用正交实验,运用盐析法从菠萝皮中提取菠萝蛋白酶,对菠萝蛋白酶的提取工艺及其影响因素进行了研究,并对提取后得到的菠萝蛋白酶进行测定。     

不同金属离子对菠萝蛋白酶活性及热稳定性的影响

该试验研究表明,Mg2+、Mn2+和Ca2+对菠萝蛋白酶的酶活性均有促进作用,且在浓度分别为4mmol/L,2mmol/L和2mmol/L最明显;Zn2+对菠萝蛋白酶的活性抑制作用明显,且随浓度的增大抑制作用越大。在60℃下Ca2+、Mn2+对菠萝蛋白酶的热稳定性具有促进作用,Ca2+浓度为3mmol/L时菠萝蛋白酶的半衰期延长了55min,增加了原菠萝蛋白酶的59.5%。Mn2+浓度为1mmol/L时半衰期延长了19.78min,增加了原菠萝蛋白酶的29%。Mg2+、Zn2+对菠萝蛋白酶的热稳定性没有明显的促进作用。     

微生物酸性蛋白酶(3350)处理羊毛染色新工艺在提花毛毯上的应用

银川毛纺厂和宁夏工业设计研究所继应用菠萝蛋白酶处理羊毛新工艺染色成功的基础上,又进而采用微生物酸性蛋白酶(3350)来代替价格昂贵,来源较困难的菠萝蛋白酶。迄今已进行了几十批小试验,并对一些色号进行了大车试验,试验结果表明微生物酸性蛋白酶 (3350)完全可以代替植物性的菠萝蛋白酶。每公斤羊毛所耗的酶制费用从0.11元下降到0.013元。采用新工艺后成品质量也有所提高,并节约了煤电和提高了劳动生产率。 采用酸性蛋白酶预处理染色的色毛上色情况,有些色号虽稍差于菠萝蛋白酶预处理染色的色毛,但大多数色号能超过原工艺染色的色毛,如250…     

动态高压微射流对茎菠萝蛋白酶性质和构象的影响

以茎菠萝蛋白酶为原料,研究动态高压微射流(DHPM)对其活性、稳定性和构象的影响。结果显示：DHPM 对茎菠萝蛋白酶具有钝化作用,但活力并不随着压力的升高而降低。压力为60、80、100、120MPa 时,茎菠萝蛋白酶的相对酶活力分别是94%、93%、98% 及92%。DHPM 不同压力对茎菠萝蛋白酶的最适反应温度的影响不同,但对最适pH 值几乎没有影响。然而经DHPM 60、120MPa 处理后,茎菠萝蛋白酶在pH8.0 的稳定性显著增强。在pH8.0 保温40min 后,60、120MPa 处理的茎菠萝蛋白酶相对酶活力分别为85% 和82%,分别比未经处理的高14% 和11%。可见,DHPM 60、120MPa 处理极大地提高了茎菠萝蛋白酶在pH8.0 时的稳定性。此外,紫外光谱和荧光光谱的结果表明：DHPM 导致茎菠萝蛋白酶部分去折叠,分子中赖氨酸和色氨酸残基所处的微环境发生了变化;红外光谱结果显示：DHPM 处理后茎菠萝蛋白酶二级或三级结构发生了变化。     

茶多酚对菠萝蛋白酶的回收及其特性的影响

研究了茶多酚对菠萝蛋白酶特性的影响。采用不同茶多酚浓度、温度、pH、保温时间及冷存时间对菠萝蛋白酶进行络合、沉淀及回收,并研究其对络合效果的影响。结果表明,茶多酚对菠萝蛋白酶无抑制作用,两者具有起混活性;最佳络合条件为:茶多酚浓度0.8%,温浴温度30℃,pH5,温浴时间0.5h,冷存时间0.5h,此时获得最大的菠萝蛋白酶活性回收率(约82.1%);菠萝蛋白酶与TP络合后,最适反应温度及最适pH无明显改变但范围变窄,均为55℃与pH7左右;Lineweaver-Burk图表明,络合后的菠萝蛋白酶Km值由0.06%变为0.14%。     

基于响应面法优化的秘鲁鱿鱼肌肉嫩化工艺研究

探索菠萝蛋白酶嫩化处理对秘鲁鱿鱼肌肉组织质构特性的影响情况。将秘鲁鱿鱼置于菠萝蛋白酶溶液中,调控蛋白酶浓度、体系pH值及嫩化时间。嫩化处理后,评价生、熟鱿鱼肌肉组织的硬度及剪切力特性。进而依据BoxBehnken试验原理,以菠萝蛋白酶浓度、嫩化时间及溶液pH值为影响因素,以鱿鱼肌肉硬度及剪切力作响应值,进行响应面优化分析。通过试验数据分析,获得秘鲁鱿鱼肌肉嫩化最佳工艺:菠萝蛋白酶浓度为210 U/100 mL,30℃水浴,嫩化时间为40 min,酶解溶液pH值为6.42。此时,嫩化后秘鲁鱿鱼硬度和剪切力值为0.97 N和2.98 N,与模型预测值基本相符。     

浸泡条件对即食菠萝中蛋白酶活性及营养物质的影响

通过研究氯化钠浓度和浸泡时间对即食菠萝中蛋白酶活和Vc含量的影响,确定了即食菠萝最佳浸泡条件。研究发现即食菠萝中外部蛋白酶活力比内部高54.40%。氯化钠浓度为3%、浸泡时间大于60 min时,菠萝蛋白酶粗酶可得到有效抑制。当氯化钠浓度为7%,浸泡时间大于30 min时,即食菠萝中蛋白酶活性明显下降。随着浸泡时间的延长,菠萝中Vc的含量逐渐下降。当氯化钠浓度为7%、浸泡时间为10 min时,即食菠萝的口感较好,蛋白酶活性得到有效抑制;营养物质流失较少。因此,即食菠萝的最佳浸泡条件为氯化钠浓度7%、浸泡时间10 min。     

菠萝蛋白酶软膏对豚鼠三度烧伤酶溶痂作用的观察

目的观察菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度实验性烧伤的酶溶痂作用。方法用豚鼠造成三度烧伤模型,以湿润烧伤膏为阳性对照,菠萝蛋白酶软膏基质为阴性对照,观察菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度烧伤的平均脱痂时间,并对脱痂组织进行病理学检查。结果菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度烧伤的平均脱痂时间同阳性对照组,明显少于阴性对照组(P<0.01)。光镜下显示菠萝蛋白酶软膏组的病理结果与阳性对照组相同。结论菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度烧伤具有良好的酶溶痂作用。     

食品加工业中菠萝蛋白酶的热稳定性

运用动力学的方法研究了菠萝蛋白酶的热稳定性，发现某些多羟基、多羟基化合物能明星延长菠萝蛋白酶在较高温度下的半寿期。这些物质无毒无害，能安全有效的提高食品加工业中菠萝蛋白酶的贮藏期和使用期。     

菠萝蛋白酶软膏对豚鼠三度烧伤酶溶痂作用的观察

目的观察菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度实验性烧伤的酶溶痂作用。方法用豚鼠造成三度烧伤模型,以湿润烧伤膏为阳性对照,菠萝蛋白酶软膏基质为阴性对照,观察菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度烧伤的平均脱痂时间,并对脱痂组织进行病理学检查。结果菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度烧伤的平均脱痂时间同阳性对照组,明显少于阴性对照组（P〈0．01）。光镜下显示菠萝蛋白酶软膏组的病理结果与阳性对照组相同。结论菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度烧伤具有良好的酶溶痂作用。     

不同添加物对菠萝蛋白酶酶活稳定性和抑制作用的影响

选择几种添加物于菠萝蛋白酶酶液中,并在不同pH值缓冲液中保存,定期测定其酶活力,研究添加物及缓冲液对菠萝蛋白酶的稳定性和抑制作用的影响。结果显示:VB1、L-半胱氨酸、异抗坏血酸钠、NaCl对菠萝蛋白酶酶活均有促进作用。保存的第1天,添加0.100g/100mL VB1的酶活比对照组提高了22%。添加0.2g/100mLL-半胱氨酸、0.005g/100mL异抗坏血酸钠的酶活比对照组分别提高了60%、37%。而NaNO2、乙酸锌、ZnCl2对菠萝蛋白酶酶活都有一定的抑制作用。随着NaNO2浓度的升高,抑制作用逐渐增强。乙酸锌、ZnCl2能将菠萝蛋白酶酶活分别降低到原酶活力的11%、1%。而KCl和NaNO3对菠萝蛋白酶活力影响不显著。     

改性菠萝皮渣纤维素固定化菠萝蛋白酶研究

为了探究改性纤维素作为固定化酶载体的可行性,在离子液体中用L-丝氨酸对提取的菠萝皮渣纤维素进行均相改性,并将改性菠萝皮渣纤维素用于固定化菠萝蛋白酶。采用傅里叶变换红外光谱仪、热重分析仪以及X射线衍射光谱仪对菠萝皮渣纤维素、改性菠萝皮渣纤维素以及固定化酶进行了表征。结果表明,菠萝皮渣纤维素被成功改性,晶体结构从纤维素Ⅰ型转变为纤维素Ⅱ型;菠萝蛋白酶成功地固定在改性菠萝皮渣纤维素上,且固定化酶较改性菠萝皮渣纤维素的热稳定性得到提升。对酶的固定化工艺和酶学特性进行研究,结果表明,固定化酶的优化制备工艺为菠萝皮渣纤维素与离子液体的质量比为3∶100,L-丝氨酸与菠萝皮渣纤维素的质量比为1∶1,戊二醛溶液体积分数为1%,交联时间为1.0 h。与游离菠萝蛋白酶相比,固定化菠萝蛋白酶具有更好的温度稳定性和酸环境稳定性。     

Ca2+对菠萝蛋白酶热稳定性和二级结构的影响

研究了Ca2+对菠萝蛋白酶活性及远紫外圆二色谱的变化.在37℃下,Ca2+与酶作用1h后,5～10mmol/L Ca2+对酶的活性均有促进作用,其中当Ca2+浓度为2mmoL/L时.促进作用最明显.在60℃下,Ca2+浓度为3mmol/L时,对菠萝蛋白酶的热稳定化效果最好,处理100min后仍然能保留68%的活性;菠萝蛋白酶在60℃下活性的半衰期为86min,除Ca2+浓度为1mmoVL外,其他浓度(2、3、4、5mmol/L)的Ca2+与菠萝蛋白酶作用后,酶的半衰期均有所延长.由圆二色谱曲线发现,菠萝蛋白酶在波长209nm与221am处有明显的负峰.与Ca2+作用后菠萝蛋白酶的α-螺旋、β-转角和无规则卷曲均有所变化,其中,在37℃下加入Ca2+后,菠萝蛋白酶的α-螺旋均减少,而β-转角有所增加.在70℃下处理1h,Ca2+对菠萝蛋白酶二级结构也有所影响.无Ca2+处理的菠萝蛋白酶和加入4mmol/L Ca2+的菠萝蛋白酶的α-螺旋分别减少为34.90%和35.60%,而β-转角则有所增加,分别为26.30%和25.10%.圆二色谱结果表明,α-螺旋结构对菠萝蛋白酶的稳定性起关键作用.     

多种蛋白酶对羊毛防毡缩整理效果的比较

采用胃蛋白酶、酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶对羊毛进行防毡缩整理,测试并分析了5种蛋白酶对羊毛纤维断裂强力和毡缩性能的影响,以及溴Allworden反应。将其中效果最好的菠萝蛋白酶协同H2O2和壳聚糖进行防毡缩处理。结果表明,这5种蛋白酶中菠萝蛋白酶处理效果最佳,羊毛毡缩球密度减少31.54%,强力保留率达95.7%;溴Allworden反应验证了对羊毛鳞片层的剥蚀作用;采用H2O2+蛋白酶+壳聚糖的协同处理工艺可在保持羊毛纤维较高强力的情况下,大大降低毡缩球密度。     

菠萝蛋白酶对干白葡萄酒蛋白质稳定性的影响

研究菠萝蛋白酶对干白葡萄酒蛋白质稳定性的影响,以新鲜干白葡萄酒为试验材料,添加菠萝蛋白酶,通过测定葡萄酒的浊度、蛋白质稳定性、蛋白质含量,确定其最适添加量、作用温度和作用时间。结果表明,菠萝蛋白酶对两款酒样澄清的最佳添加量分别为2.0 mg/L、2.5 mg/L,温度均为22 ℃,作用时间为24 h。菠萝蛋白酶可澄清干白葡萄酒,明显提高其蛋白质稳定性。     

菠萝蛋白酶冻干保护剂研究

针对菠萝蛋白酶在冻干过程中的失活问题,研究了几种保护剂对菠萝蛋白酶的冻干保护效果,使用单因素筛选和正交实验方法,确定了菠萝蛋白酶保护剂最优配方为:脱脂乳0.1%、糊精0.1%、海藻糖0.05%、蔗糖0.1%,使冻干酶活得率达到99.8%,常温贮藏90d后贮藏酶活得率达到97.3%。     

菠萝蛋白酶结合滚揉嫩化马肉工艺的优化

以系水力、蒸煮损失率、剪切力和感官评定为评价指标,通过注射菠萝蛋白酶液,结合滚揉处理,研究菠萝蛋白酶在不同的添加量、处理温度、处理时间和p H条件下对马肉(半腱肌)嫩度的影响,采用L9(34)正交试验对嫩化条件进行优化。试验结果表明:蛋白酶添加量、处理温度和处理时间对马肉的嫩度有显著影响。菠萝蛋白酶的最佳嫩化条件是:菠萝蛋白酶添加量12 U/g,处理温度60℃,处理时间1.5 h,p H7.0;或者菠萝蛋白酶添加量16 U/g,处理温度60℃,处理时间2 h,p H7.0。     

不同抑制剂和激活剂对菠萝茎蛋白酶酶学特性的影响

菠萝蛋白酶作为一种典型的巯基类蛋白酶,具有稳定性差、易失活的特性.本文通过研究多种抑制剂和激活剂对菠萝茎蛋白酶活力、动力学参数及光谱特性等的影响,总结其构效变化规律,试图解释菠萝蛋白酶失活及激活机理.结果表明:抑制剂与激活剂作用下菠萝茎蛋白酶的CD图谱均表现为o-螺旋度降低,β-折叠、β-转角以及无规卷曲含量不同程度提高,但抑制剂作用下螺旋降低,折叠与卷曲的升高程度更明显.此外,抑制剂与激活剂作用下菠萝茎蛋白酶的紫外差吸收光谱也显示差异,激活剂作用下主要表现为230nm以下的二级结构变化,而抑制剂除上述变化外,还显示生色基团Trp、Tyr、Phe的暴露吸收,表明抑制剂作用下酶分子构象变化更剧烈.本文可为菠萝茎蛋白酶的改性研究提供理论基础.     

影响菠萝蛋白酶活力因素的研究进展

菠萝蛋白酶作为一种典型的巯基类蛋白酶,具有稳定性差、易失活的特性。本文主要从物理因素、化学因素及生物学因素等几个方面对影响菠萝蛋白酶的活力作一概述。     

介孔二氧化硅制备固定化菠萝蛋白酶的研究

采用经扫描电镜和透射电镜表征的介孔二氧化硅制备固定化菠萝蛋白酶,具有工艺简便、条件温和及操作方便的特点.考察了给酶量、pH和时间对固定化菠萝蛋白酶活力的影响,在酶量25mg/mL、pH5.0、固定化时间22h时,固定化酶的酶活为603 U/g.介孔二氧化硅固定的菠萝蛋白酶在50℃水浴60min后,固定化酶的活力保持在92％以上,说明固定化酶的热稳定性较高.该固定酶持续操作三次后,使用活性逐渐衰减,但第3次相对酶活仍然达38.5％,反映了菠萝蛋白酶分子与载体有较强的物理吸附作用而且固定的菠萝蛋白酶有一定的可重复使用性.