2种微孔板试剂盒测定奶粉中3种水溶性维生素的对比研究

目的 采用自主研发的微孔板试剂盒A和进口微孔板试剂盒B,就测定奶粉中生物素、叶酸、维生素B12 3种水溶性维生素,进行了比对研究。方法 通过绘制标准曲线、准确性实验、重复性实验及加标回收实验对2个品牌维生素检测试剂盒进行评价。结果 2个品牌试剂盒的相关系数均在0.99以上;试剂盒A和试剂盒B的生物素、叶酸及维生素B12的样品检测结果间的RSD分别为0.08%~7.25%、0.43%~9.25%和0.7%~13.91%;试剂盒A的精密度和回收率分别为1.97%~9.26%和73.67%~110.48%;试剂盒B的精密度和回收率分别为1.17%~5.4%和72.67%~120%。结论 2种试剂盒的性能均满足检测要求,试剂盒A操作较简便,可替代进口微孔板试剂盒,用于奶粉中生物素、叶酸、维生素B12 3种水溶性维生素的测定。     

微生物法与试剂盒法测定婴幼儿配方奶粉中叶酸含量的方法比较

目的比较GB 5413.16-2010与试剂盒法测定的配方乳粉质控样品的叶酸含量。方法通过国标和试剂盒法各检测10组质控样品,得到20个检测数据,从检出限和相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)对2种方法进行方法学考察。结果国标法和试剂盒法叶酸测试结果平均值分别为231μg/100 g和228μg/100 g,RSD分别为8.36%和8.01%。2个方法测定结果的平均值偏差为1.16%,RSD值偏差为2.14%。结论国标法与试剂盒法测定婴幼儿配方奶粉中叶酸含量的结果相近,实验室可以根据自身实际情况选择适合的检测方法。     

婴幼儿乳粉叶酸含量两种测定方法的研究

目的:对比婴幼儿乳粉中叶酸含量检测的两种方法,探究其准确性及更方便快捷的检测流程。方法:分别采用GB5009.211-2014与试剂盒法测定乳粉质控样品及市售的30批次婴幼儿乳粉样品中叶酸含量。结果:国标法和试剂盒法对质控乳粉样品中叶酸含量的测定值分别为147.6±5.8μg/100g、146.4±2.9μg/100g,RSD分别为3.93%和1.98%;两种方法的回收率分别为110.38%±3.39%、98.03±8.62%。对使用国标法和试剂盒法测定30批次婴幼儿乳粉样品叶酸含量的两组数据进行配对t检验,t=1.881,P=0.070,P>0.05说明两组检测结果无显著性差异。结论:国标法及试剂盒法均能对婴幼儿乳粉中叶酸含量进行有效测定且结果接近,均可作为检验方法及质控方式用于实际检验工作当中。     

酶联免疫法快速检测奶粉中的叶酸

建立一种检测奶粉中叶酸质量分数的酶联免疫分析方法。奶粉样本经纯水溶解提取,再做1∶4稀释,通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定奶粉中的叶酸。结果表明,当加标质量分数为20,40μg/kg和80μg/kg时,空白基质奶粉中叶酸的提取回收率为93.5%~118.0%;非空白基质样品中叶酸的加标回收率为88%~92%;方法检出限为4μg/kg;与高效液相色谱法结果的相对偏差小于10%。酶联免疫法能够快速、准确检测奶粉中的叶酸。     

酶联免疫吸附法快速检测婴儿配方奶粉中乳铁蛋白含量

目的采用乳铁蛋白快速检测试剂盒,通过酶联免疫吸附法定量测定婴儿配方奶粉中的乳铁蛋白含量,并验证该方法的准确性、稳定性和可靠性。方法按照试剂盒操作说明制作标准曲线,选取乳铁蛋白阴性样品进行添加回收实验,验证方法的准确性;选取一个乳铁蛋白阳性样品,重复检测6次,计算结果偏差,验证方法的稳定性;选取12个乳铁蛋白阳性样品,分别采用试剂盒方法和高效液相色谱法进行检测,对比2种方法的检测结果,验证试剂盒方法的可靠性。结果试剂盒检出限为2 mg/100 g;试剂盒检测方法回收率在101.6%~109%;相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为5.34%;试剂盒方法检测结果与标签值的偏差为-6.90%~6.45%,和高效液相色谱法检测结果的偏差为-6.45%~6.9%,说明试剂盒方法具有很好的可靠性。结论乳铁蛋白试剂盒检测方法灵敏度高、操作简单,能快速准确地测定婴儿配方奶粉中的乳铁蛋白含量。     

利用不确定度比对乳粉中叶酸含量的快速检测方法

目的 利用不确定度比对乳粉中叶酸含量的快速检测方法。方法 分别用进口和国产的微生物法和酶联免疫法的试剂盒对代表性乳粉样品进行3 d 3平行检测, 对检测数据做正态分布分析及不确定度计算。结果 各方法检测结果正态分布检验值(anderson-darling, AD)均小于临界值0.725(95%置信区间), 服从正态分布; 微生物快速检测方法不确定度范围为13.3%~27.4%; 酶联免疫方法不确定度范围为9.6%~ 31.3%。结论 微生物试剂盒快速检测方法, 具有稳定性较好, 品牌差异较小的特点, 适合质控品的长期监测, 质控图的建立。酶联免疫检测方法, 具有简单、快速的特点, 适合样品中叶酸的快速检测。     

国标法和新型试剂盒法测定乳粉中生物素含量

国标法和新型试剂盒法利用植物乳杆菌对生物素的高度特异性和敏感性,定量测出乳粉样品中生物素的含量。通过对标准乳粉质控样品的检测,测得国标法标准曲线在0.00～1.00 ng范围内线性关系良好(R~2=0.999 0),方法检出限为2.0μg/100 g,所测样品RSD为3.22%(n=6);测得试剂盒法标准曲线在0.00～0.52μg/100 g范围内线性关系良好(R~2=0.992 3),方法检出限为0.02μg/100 g,所测样品RSD为3.18%(n=6);两种方法生物素测定值均在给定值范围内,且差异不显著(p0.05)。在50%, 100%和200%添加水平下,生物素回收率均在90%～110%之间(RSD10%),样品重复性试验结果RSD小于5%。两种方法对标准质控样检测结果稳定准确、重复性好,适用于乳粉中生物素含量的检测。     

SPR技术对奶粉中维生素B_(12)检测方法的建立

目的利用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术,建立快速定量测定牛奶中维生素B12的方法。方法将钴胺素共价偶联到表面等离子共振芯片CM5表面,并对竞争结合的维生素B12结合蛋白的结合浓度及芯片的再生条件进行优化,检测芯片的稳定性。在无抗生素牛奶中添加系列质量浓度的维生素B12,利用免疫竞争抑制原理构建标准曲线,并对市售10个奶粉样品进行检测。结果制备的芯片稳定,50个循环相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)小于10%。日间批内同一样品差异为0.54%,该方法的检测限为0.006μg/100 g,回收率为92.1%~104.1%。测得的10个牛奶产品中维生素B12含量与对应商品标签值全部在标准规定的范围内。结论所建立的方法可以在6 h内完成样品的前处理和检测,是一种简便、快捷的定量检测方法。     

SPR技术对奶粉中维生素B12检测方法的建立

目的 利用表面等离子共振(surface plasmon resonance, SPR)技术, 建立快速定量测定牛奶中维生素B12的方法。方法 将钴胺素共价偶联到表面等离子共振芯片CM5表面, 并对竞争结合的维生素B12结合蛋白的结合浓度及芯片的再生条件进行优化, 检测芯片的稳定性。在无抗生素牛奶中添加系列质量浓度的维生素B12, 利用免疫竞争抑制原理构建标准曲线, 并对市售10个奶粉样品进行检测。结果 制备的芯片稳定, 50个循环相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)小于10%。日间批内同一样品差异为0.54%, 该方法的检测限为0.006 μg/100 g, 回收率为92.1%~104.1%。测得的10个牛奶产品中维生素B12含量与对应商品标签值全部在标准规定的范围内。结论 所建立的方法可以在6 h内完成样品的前处理和检测, 是一种简便、快捷的定量检测方法。     

试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉中叶酸含量

目的 建立试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉中叶酸的含量。方法 以Tris缓冲液稀释样品, 加入冻干的干酪乳杆菌测试菌球, 采用Costar 3599细胞培养板培养, 使用酶标仪测定结果。并同时检测了28批次婴幼儿乳粉叶酸的含量。结果 本试剂盒方法回收率为95%~105%, 定量检测限为0.050 ng/mL, 日间精密度为0.6%, 日内精密度为0.7%。采用试剂盒方法与GB 5413.16-2010试管法同时检测28批次婴幼儿乳粉中叶酸的含量, 检测结果无显著性差异(P=0.598), 乳粉中叶酸含量的合格率为100%。结论 该方法操作简单, 灵敏度高, 重现性好, 可用于测定婴幼儿乳粉中叶酸的含量。     

婴幼儿乳品中叶酸的微生物测定方法

按照GB 5413.16-2010、GB/T 5009.211-2008及Biostest叶酸检测试剂盒等不同方法,对同一乳制品样品叶酸含量进行测定,同时进行加标回收试验。结果表明,依据GB 5413.16-2010,在制备标准测试管时,使用两种浓度的含抗坏血酸的磷酸缓冲液稀释获得的叶酸标准工作液,同时样品测试液也由抗坏血酸的磷酸缓冲液稀释获得,测得叶酸质量分数为40.45μg/hg,回收率为71%。而参照GB/T 5009.211-2008,只使用一种浓度的用水稀释获得的叶酸标准工作液,同时样品测试液也由水稀释获得,测得同一样品的叶酸质量分数为70.5μg/hg,回收率为92.6%。使用Biostest叶酸检测试剂盒测得同一样品的叶酸质量分数为73.71μg/hg,回收率为99%。不采用含抗坏血酸的磷酸缓冲液而是用水稀释获得标准工作液和样品测试液,测试婴幼儿乳制品叶酸含量,加标回收率较高,测试结果可以接受。     

阿维菌素、埃比菌素的残留检测

为验证阿维菌素"三合一"酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒对白菜、胡萝卜、干洋葱及高淀粉含量食物的检测效果,用酶联免疫检测法和国标中的液相色谱-质谱/质谱法对白菜、胡萝卜、干洋葱以及土豆4个样品中阿维菌素、埃比菌素残留量进行检测,比对两种方法试验结果间的差异。结果表明:ELISA检测试剂盒特异性强、灵敏度高,阿维菌素测定时4种样品平均回收率在92.0%~99.6%之间,埃比菌素测定时4种样品平均回收率在91.3%~100.1%之间,变异系数均小于10%,最低检测限为3μg/kg。该方法与国标液相色谱-质谱/质谱法检测样品的阴、阳性结果一致,检测结果稳定。     

高效液相色谱法测定奶粉质控样品中三聚氰胺的含量及其不确定度分析

目的 采用高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography, HPLC)测定奶粉质控样品中三聚氰胺的含量并进行不确定度的分析。方法 以GB/T 22388-2008 《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》第一法为基础, 在实验过程中进行2次提取改良前处理方法测定奶粉质控样品中三聚氰胺含量, 建立数学模型, 分析实验过程中所产生的不确定度的来源, 并进行不确定度的评定分析。结果 通过改进前处理方法, 回收率提高到80%~90%, 稳定性相对标准偏差为1.96%。当k=2(95%置信度)时, 奶粉质控样品中三聚氰胺含量为(0.61±0.021) mg/kg, 质控样品的测试结果为满意。结论 在实验操作过程中, 实验人员应熟练掌握分析技能, 严格按照操作规程进行检测, 以减少检测结果的不确定度, 从而保证检测结果的可靠性。     

日落黄酶联免疫试剂盒的制备及应用

为了快速准确检测食品中的日落黄,本研究通过羰基二咪唑法,将日落黄与载体蛋白偶联,并使用紫外光谱进行鉴定,结果显示日落黄检测抗原和免疫抗原成功合成;通过免疫小鼠制备了效价高达1:64000以上的抗日落黄单克隆抗体,研制了日落黄ELISA检测试剂盒。试剂盒性能检测分析结果显示,试剂盒标准曲线的线性检测范围为62.50～1000 ng/mL,检测限为1.50 ng/mL,检测灵敏度IC_(50)值为6.50 ng/mL;试剂盒中,用于检测的单克隆抗体对日落黄的交叉反应率为100%,对诱惑红有弱交叉反应,反应率为2%,与其他2种色素添加剂未见交叉反应;检测市售果汁、水果罐头和果冻类样品的批内、批间回收率分别为89.18%～101.13%、87.69%～97.90%,且批内、批间试验的相对标准偏差均小于10%,说明试剂盒具有良好的灵敏度和准确性,且操作方便快捷。本研究应用免疫学方法成功地制备了日落黄酶联免疫试剂盒,并检测了水果类制品中添加的日落黄,为大批量测定食品中日落黄含量提供了高效准确的实验方法。     

生牛乳中乳铁蛋白的蛋白质芯片检测平台的评价研究

目的对本研究前期建立的用于乳铁蛋白的蛋白质芯片检测平台进行评价。方法使用3份生牛乳样品,批内重复8次检测,计算批内精密度;另对3份生牛乳分别重复8个批次检测,计算批间精密度。对高浓度标准品稀释3个浓度后,进行稀释回收率试验;另对3个浓度基础液分别进行加标回收率试验;取10份生牛乳样品,分别用蛋白质芯片检测平台与商用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒进行检测并对结果进行方法学比较。结果用于生牛乳中乳铁蛋白的蛋白质芯片检测平台的批内精密度在9.79%~15.90%之间,批间精密度在11.63%~23.38%之间;稀释回收率在79.8%~129.7%之间,加标回收率在105.7%~133.9%之间;经比较,两种方法的相关系数r=0.825 2,差异有统计学意义(t=4.132,P0.05),配对比较t检验结果显示两种方法差异无统计学意义(t=1.282,P0.05)。结论本研究建立的用于乳铁蛋白的蛋白质芯片检测平台能够满足实验室检测需要,尚有操作偏倚需进一步优化。     

三聚氰胺ELISA试剂盒在食品检测中的检测效果研究

目的为验证本公司生产的三聚氰胺ELISA检测试剂盒的检测效果。方法用酶联免疫法对牛奶、奶粉、鸡肉和鸡蛋等4种样品中三聚氰胺的残留量进行检测,并与高效液相色谱法进行对照。结果结果表明:该试剂盒对4种样品的最低检测限分别为19.22、46.86、51.64、21.38μg/kg,试剂盒板内板间变异系数均小于10%;对4种样品做加标回收试验,其回收率均在95%~120%之间,变异系数均小于10%;该方法与高效液相色谱法检测实际样品的阴、阳性判断结果一致。结论该方法稳定、可靠,可满足食品中三聚氰胺残留快速检测的需要。     

微孔板法检测婴幼儿配方乳粉中维生素B12的含量

目的 建立用微孔板检测婴幼儿配方乳粉中维生素B12的方法。方法 基于微生物原理的检测方法, 缩小样品的培养体积。样品经提取后, 分装到96孔细胞培养板中, 在培养基中加入0.05%的菌悬液, 混匀后分配到含有样品和标准品的微孔中, 培养后直接用酶标仪测定吸光度值。结果 本方法标准曲线相关系数0.9987, 加标回收实验回收率在92.7%~98.7%之间, 重复性实验相对标准偏差在1.03%~1.73%之间, 6种不同含量的样品同时用GB 5413.14-2010方法和本方法检测维生素B12, 检测结果无显著性差异。结论 该方法快速, 操作简单, 稳定性高, 检测成本低, 可大批量样品同时检测, 适合测定婴幼儿配方乳粉中维生素B12的含量。     

2种微生物试剂盒法快速检测乳粉中叶酸含量

目的 对2种商业化试剂盒法检测婴幼儿配斱乳粉中叶酸含量的结果迚行对比研究。方法 通过制作标准曲线,加标回收试验及样品重复性试验对2种试剂盒迚行比对。结果 研究表明2种试剂盒的叶酸标准曲线相关系数均在0.999以上;样品加标回收试验的加标回收率均在90%～100%之间,符合试剂盒加标回收要求;样品重复性试验结果相对标准偏差均小于5%。结论 2种商业化叶酸试剂盒具有操作简单、实验周期短、重复性较好等特点,可快速检测婴幼儿配斱乳粉中叶酸的含量。     

黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒的检测效果研究

目的为验证本公司生产的黄曲霉毒素M1酶联免疫法(ELISA)检测试剂盒的检测效果。方法用ELISA检测试剂盒对牛奶、酸奶、奶粉和干酪等4种样品中黄曲霉毒素M_1的残留量进行检测,并与高效液相色谱荧光检测法进行对照。结果该试剂盒对4种样品的最低检测限分别为0.039、0.192、0.306、0.199μg/kg(L),试剂盒板内板间变异系数均小于5%;对4种样品做加标回收试验,其回收率均在93%~120%之间,变异系数均小于10%;该方法与高效液相色谱法检测实际样品的阴、阳性判断结果一致。结论该方法稳定、可靠、灵敏,可满足食品中黄曲霉毒素M_1残留快速检测的需要。     

超级微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定婴幼儿奶粉中钙和磷的含量

建立超级微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定婴幼儿奶粉中钙和磷含量的方法。样品采用超级微波消解前处理,利用碰撞反应技术和在线内标法优化检测方法,通过标准物质、加标回收试验和方法比对等手段进行方法学验证。结果表明,钙的线性范围为0～150 mg/L,磷的线性范围为0～100 mg/L,相关系数均大于0.9995,钙和磷的方法检出限分别为0.527 mg/kg和0.232 mg/kg,方法定量限分别为1.75 mg/kg和0.774 mg/kg,相对标准偏差分别为1.17%和0.67%;质控样品钙和磷的测定结果均在特定值区间内,且加标回收率的范围为96.3%～104.4%;并对市售的多个奶粉进行方法比对,结果不存在显著性差异。试验表明该方法能减少基质干扰,能简单、快速、准确、稳定地同时检测婴幼儿奶粉中钙和磷的含量,为今后婴幼儿奶粉中钙和磷含量同时测定提供方法参考。