2株酵母菌单倍体原生质体形成与再生条件的研究

对酒精高产酿酒酵母GGFS16和GJ2008单倍体原生质体的形成与再生条件进行了研究.结果表明,在菌龄8h、o.2％p-巯基乙醇和0.1％ EDTA-Na2预处理20min、1.5％的蜗牛酶37℃处理30min以及使用浓度170g/L的蔗糖作为渗透压稳定剂的条件下,GGFS16和GJ2008单倍体原生质体的形成率和再生率均达到最大.形成率分别是98.14％和97.19％,再生率分别是17.29％和15.78％.     

酿酒酵母产孢培养基的筛选及单倍体的分离

为获得酿酒酵母1450遗传育种单倍体亲本,采用不同的培养基对酿酒酵母1450进行了生孢培养实验,通过优化得出,葡萄酒酵母1450的最适宜的产孢条件是,Mcclary培养基于25～28℃条件下培养6 d,在此条件下,酿酒酵母1450的产孢率为70%左右.子囊孢子分离得到单倍体菌株,通过测定这些单倍体菌株的发酵力和发酵性能,筛选出单倍体S-3为一株优良的酿酒酵母1450遗传育种单倍体亲本.     

醇类和营养贫乏诱导工业酿酒酵母丝状生长

研究了酿酒酵母的丝状生长。将酿酒酵母在氮源、碳源受限和醇类存在下的固态培养基上培养,用显微镜观察其细胞形态。双倍体菌株GGFS16、GJ2008和相应单倍体SC2012、SS2012菌株在丙醇、丁醇和戊醇诱导下,均有丝状生长。GJ2008和SS2012菌株在果糖、麦芽糖和乳糖作为唯一碳源时,出现侵入生长,而GGFS16和SC2012并没出现。在氮源受限培养基(SLAD)上,没有菌株出现丝状生长。结果表明,丙醇、丁醇和戊醇能诱导单双倍体酿酒酵母的丝状生长。在碳源受限培养基上,侵入生长是否存在与菌株有关。     

酿酒酵母W5单倍体的制备及其代谢水平分析

为获得遗传稳定的单倍体酵母菌株,本实验以二倍体酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae W5为出发菌株,优化单倍体制备和分离的条件,获得单倍体细胞;利用随机孢子分析法和MAT-聚合酶链式反应法对单倍体菌株进行分离和鉴定,通过连续传代培养的方式验证单倍体菌株的稳定性,并从代谢水平分析单倍体菌株的发酵性能。研究表明：S.?cerevisiae?W5在改良SPM培养基中30?℃条件下培养8?d,产孢率最高为（35.57±0.82）%。经30?mg/mL蜗牛酶液处理2?h后,菌悬液的孢子释放率达到（47.06±0.23）%。本实验共分离出7?株单倍体菌株,其中菌株S.?cerevisiae?H14（MAT-a）遗传性能最稳定。当以葡萄糖为底物,30 ℃、150?r/min发酵30?h,乙醇质量浓度达到最大,为（40.46±1.06）g/L,较S.?cerevisiae?W5发酵24?h乙醇最大质量浓度（51.65±2.39）g/L下降了21.67%,乙酸、乙偶姻的产量分别提高了12.7%和57.14%,获得理想的单倍体菌株。本实验为S. cerevisiae单倍体的制备提供了一定研究经验,也丰富了酵母遗传学研究的理论基础。     

双亲灭活原生质体融合选育高性能酒精酵母菌的研究

为了选育高性能的酒精酵母菌,利用双亲灭活和PEG诱导,对酿酒酵母GGFS16和GJ2008单倍体细胞进行了原生质体融合。从42株融合子中筛选得到了2株融合菌株RH3和RH5,分别适合于木薯粉和甘蔗汁酒精发酵,且较好的保持了亲本的特性。其中RH3在耐酸能力上,RH5在酒精耐受能力上要优于亲本,RH3的遗传稳定性要优于RH5。     

酿酒酵母单倍体制备方法的优化

研究了酿酒酵母单倍体的制备方法。对酿酒酵母BY-6的产孢条件进行了优化，产孢培养基为McClary培养基，培养时间为7d，培养温度为25-28℃，在此条件下，酿酒酵母的产孢率可达98．5％。蜗牛酶浓度及酶解时间是影响孢子释放的关键因素，最适酶浓度为3％，酶解时间为60min。酶解后，50℃热处理10min杀死营养体，有利于单倍体的检出。     

低产高级醇酿酒酵母菌株筛选及其单倍体制备

通过比较7株酿酒酵母菌株的发酵性能和高级醇生成量,筛选出发酵周期短、发酵速度快、酒精度最高和总高级醇含量较低的菌株AY-15.以AY-15为出发菌株制作单倍体,经过杜氏管发酵实验和酒精浓醪发酵实验,最终获得a-8和α-22 2株单倍体菌株,其发酵性能与AY-15基本相当,酒精度分别为15.6 %vol和15.5 %vol;高级醇含量均比AY-15高级醇生成量低,分别为302.268 mg/L和298.446 mg/L.a-8和α-22可为后续分子育种降低高级醇生成量奠定良好基础.     

半乳糖发酵优良酿酒酵母单倍体的筛选

筛选半乳糖发酵优良酿酒酵母单倍体,对酿酒酵母AY5进行了单倍体的分离、鉴定,并以酿酒酵母AY5和克鲁维酵母匈3为对照,通过产气性能、耐酒精性能以及半乳糖发酵性能的分析,筛选出性能优良的单倍体菌株10株,其中4株a型、6株α型.筛选的优良单倍体菌株发酵半乳糖速度快,发酵液酒度高,还原糖含量低.     

酿酒酵母单倍体的分离及其产高级醇和乙酯类化合物的特性

为了获得低产高级醇和高产乙酯类化合物的单倍体酿酒酵母。对5株野生二倍体酿酒酵母菌株进行随机孢子分离获得单倍体后代,并通过Triple M模拟汁发酵,对其单倍体的高级醇和乙酯类物质产量进行研究。结果表明:5株野生酿酒酵母在KAc产孢培养基上的产孢率均高于50%。与二倍体亲本相比,单倍体菌株的高级醇和乙酯类化合物的产量发生显著改变,产高级醇和乙酯类化合物特性在单倍体后代中发生性状分离。单倍体酿酒酵母中,31y3-15高级醇产量最低,为135.3 mg/L,31y3-29和174y1-26的乙酯类物质生成量均高于650mg/L。研究获得的单倍体酿酒酵母,为研究酿酒酵母产高级醇和产酯特性的遗传基础,以及杂交育种提供了重要材料。     

优良黄酒酵母单倍体的分离筛选

对黄酒酵母进行生孢培养,获得黄酒酵母遗传育种单倍体亲本,分离获得单倍体后确定单倍体配型(a/α).通过单倍体菌株发酵力的测定,研究单倍体在胁迫条件下(高浓度酒精、高浓度糖和高浓度乳酸)的耐受能力,并进行了黄酒发酵实验.通过不同单倍体茵株耐受能力的比较和黄酒发酵酒样中残糖、酒精度以及乙酸乙酯和异戊醇含量的分析,筛选出优良的黄酒酵母遗传育种单倍体亲本a-3和α-1.     

苯乙酸对烟草单倍体植株叶脉组织培养一步成苗的效应研究

本研究探明了苯乙酸(PAA)对烟草单倍体植株叶脉切段培养一步成苗的效应,发现PAA与NAA、6-BA配合使用能有效促进一步成苗的发生。试验证明PAA对一步成苗的促进效应与各种激素浓度配比和基本培养基的种类有关,与基因型的关系不明显。烟草单倍体植株叶脉切段培养一步成苗的最佳培养基配方为MS+PAA 20 mg/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+谷氨酰胺50 mg/L+麦芽糖30 g/L。试验还证明,与2,4-D诱导产生愈伤组织途径的多级成苗培养相比,本研究建立的PAA一步成苗培养具有以下优点:1)显著提高愈伤组织的诱导率;2)显著提高愈伤组织的质量,有效提高愈伤组织分化率;3)成苗率显著高于多级成苗;4)再生植株具有更好的幼苗素质;5)再生植株的染色体数目变异率也显著低于多级成苗;6)获得双单倍体植株的频率显著高于多级成苗;7)能有效缩短培养周期、节约成本。      

利用抗原标记选育酵母融合子

利用动物免疫方法制备了啤酒酵母(Saccharomyees cerevisiae)和毕赤氏酵母(Pichia pastois)的免疫血清.将啤酒酵母和毕赤氏酵母单倍体化、通过原生质体融合技术促使其融合.融合后再生菌落分别和双亲免疫血清做玻片凝集反应,呈现双阳性的即为双亲融合子.     

毕赤酵母单倍体制备方法的研究

毕赤酵母(Pichia pastoris)是子囊孢子型的出芽酵母,以单倍体或二倍体形式存在,能够进行无性繁殖和有性繁殖,在酵母育种或基因功能研究方面,单倍体细胞起着重要的作用.本研究以P.pastoris X33二倍体细胞为研究材料,探讨了子囊孢子诱导、单倍体制备方法.结果表明,P pastoris X33二倍体细胞在氮源限制培养基上能够诱导形成子囊.随后可经2种方法获得单倍体:(1)3％蜗牛酶30℃处理2h,58℃处理12min,单倍体获得率为60％;(2)50％乙醚涡旋处理5min,单倍体获得率为37％.     

利用DOT-ELISA筛选酵母融合子

利用动物免疫方法制备了啤酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)和毕赤氏酵母 (Pichiapas toris)的免疫血清。将啤酒酵母和毕赤氏酵母单倍体化 ,通过原生质体融合技术促使其融合。融合后将再生菌落影印到硝酸纤维膜上分别和双亲免疫血清做Dot ELISA反应 ,呈现双阳性的即为双亲融合子。     

Brewing characteristics of haploid strains isolated from sake yeast Kyokai No. 7

Sake yeast exhibit various characteristics that make them more suitable for sake brewing compared to other yeast strains. Since sake yeast strains are Saccharomyces cerevisiae heterothallic diploid strains, it is likely that they have heterozygous alleles on homologous chromosomes (heterozygosity) due to spontaneous mutations. If this is the case, segregation of phenotypic traits in haploid strains after sporulation and concomitant meiosis of sake yeast strains would be expected to occur. To examine this hypothesis, we isolated 100 haploid strains from Kyokai No. 7 (K7), a typical sake yeast strain in Japan, and compared their brewing characteristics in small‐scale sake‐brewing tests. Analyses of the resultant sake samples showed a smooth and continuous distribution of analytical values for brewing characteristics, suggesting that K7 has multiple heterozygosities that affect brewing characteristics and that these heterozygous alleles do segregate after sporulation. Correlation and principal component analyses suggested that the analytical parameters could be classified into two groups, indicating fermentation ability and sake flavour. Copyright © 2008 John Wiley & Sons, Ltd.     

耐高糖面包酵母单倍体的分离筛选

以耐高糖面包酵母BY-6为出发菌株进行生孢培养制备单倍体,通过单倍体的分离、配型验证和PCR验证,获得6株α型单倍体,5株a型单倍体。通过比较单倍体菌株的生长和发酵性能,筛选出生长性能较好,在高糖模拟面团中产气量较大,并且在高糖面团中发酵力较高的优良单倍体菌株70a和24α,这为后续通过基因工程改造提高面包酵母的高糖耐性奠定了良好的基础。     

快速发酵面包酵母单倍体的筛选及发酵性能研究

以面包酵母BY-14为出发菌株制备单倍体,通过单倍体的分离和配型的鉴定(α/a),获得5株a型,7株α型。比较12株单倍体菌株的发酵性能,筛选出发酵性能及生物量与亲本基本相当、麦芽糖发酵力高及葡萄糖阻遏作用弱的17α和70a单倍体菌株。以亲本BY-14为对照,对这2株单倍体进行不加糖面团发酵力及耗糖曲线的测定,实验结果显示,2株单倍体在葡萄糖基本消耗殆尽后,迟滞期均较短,可以较快地转入麦芽糖的代谢,为后续分子育种提高麦芽糖的利用速度奠定良好基础。