利用LAMP技术快速检测羊肉制品中的鼠源性成分

为实现羊肉制品中鼠源性成分的定性检测,基于环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术,以鼠的线粒体基因（大鼠环氧化酶基因KP244683.1和小鼠的16S rRNA基因KY018919.1）为靶标,分别设计相应的LAMP特异性引物,通过优化反应条件,确定最佳LAMP反应体系。对混合模拟样品进行特异性、灵敏度和稳定性评估,应用LAMP和聚合酶链式反应检测方法分别对市售羊肉制品进行检测,对比分析检测结果。结果表明,本研究建立的LAMP方法特异性强,大鼠和小鼠的检出限分别为0.1%和0.5%,稳定性好,LAMP与聚合酶链式反应市售实际样本检测结果具有高度的一致性。因此,本实验建立的鼠源性成分LAMP检测方法操作简便、高效、准确,为鼠肉掺假快速诊断和基层诊断提供了新的选择,可作为羊肉制品中鼠源性成分的快速检测新方法。     

动物源性成分实时等温扩增检测方法的建立

目的建立一种实时荧光环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测动物源性成分的分析方法。方法根据鸡、鸭、牛、羊物种cytb、COX3、12S rRNA、cytb特异性基因分别设计LAMP引物,反应时加入荧光染料SYTO-9,在63℃条件下反应45min,通过实时检测荧光强度判断反应结果,并进行实时监测。结果实时荧光LAMP方法对鸡、鸭源性成分的检测灵敏度为1pg,对牛、羊源性成分的检测灵敏度为10pg。对熟肉制品中掺杂肉检测时,掺杂鸡肉、鸭肉、牛肉和羊肉的检出限为0.01%。结论该方法可用于快速检测肉制品中动物源性成分,具有操作简单、无需贵重仪器、反应过程可实时监控、灵敏度高和特异性强等优点,适合于基层监管部门的现场快速检测。     

肉制品中牛源性成分多重实时荧光PCR检测 方法的建立及初步应用

目的建立肉制品中牛源性成分的荧光PCR检测方法。方法根据牛特异性线粒体DNA片段,设计合成两对引物,以生、熟牛肉及超市牛肉加工品为材料,建立肉制品中牛源性成分的多重实时荧光PCR检测方法,并用该法与国标法同时对市售的25份肉制品同时进行检测,通过对其他种类的肉源DNA进行扩增验证方法的特异性;对含有不同比例牛肉成分的DNA样本进行检测确定检出限。结果该方法可成功检测出肉制品中的牛源性成分。在25份肉制品检测中,与国标法检测结果一致。该法的特异性为100%,灵敏度检测线为1%。结论本研究成功建立牛源性肉制品的检测方法,该方法快速简便,且具有较高的特异性和灵敏度,可用于市售肉制品中牛源性成分的鉴定。     

肉制品中鸭源性成分TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立与应用

目的 建立TaqMan探针实时荧光PCR法快速检测肉制品中鸭源性成分的分析方法。方法 以鸭生长激素(growth hormone, GH)基因为靶基因, 基于特异性保守序列设计引物和TaqMan探针, 优化反应体系和反应条件, 建立了鸭源性成分实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法。结果 所建立的real-time PCR方法特异性强, 仅对鸭基因组DNA出现特异性扩增曲线, 对牛、羊、猪等其他异源性动物基因组DNA均无扩增曲线; 灵敏性高, 以鸭基因组DNA为模板, 检出限为1.0 pg; 重复性好, 不同浓度基因组DNA测定的Ct值变异系数小于4%。使用建立的real-time PCR方法对200份市售肉制品进行检测, 在11份肉制品中检出鸭源性成分, 同现行行业标准SN/T 3731.5—2013检测结果一致。结论 本研究所建立的real-time PCR方法检测具有特异性强、敏感性高、快速高效等特点, 适用于肉制品中鸭源性成分快速检测。     

环介导等温扩增结合免疫层析试纸条快速检测羊肉及其制品中的鸭源成分

为实现肉及肉制品中掺假成分的快速检测,本文将环介导等温扩增技术(loop mediated isothermal amplification,LAMP)与免疫层析试纸条(immunochromatographic test strip,ICTS)相结合,建立了一套可在羊肉及其制品中特异并灵敏地检测出鸭源性成分的方法。根据鸭特异性细胞色素b(cytb)基因的6个特异性区域设计LAMP引物,其中两条内引物FIP和BIP分别使用生物素(biotin)和地高辛(digoxin)标记。使用LAMP扩增技术于65℃下扩增30 min产生生物素和地高辛标记的双链DNA产物,将扩增产生的双链DNA产物(10 μL)与90 μL上样缓冲液(PBS pH=7.4)混合均匀后使用免疫层析试纸条进行可视化检测。本研究所建立的LAMP-ICTS方法能够在40 min内特异性地检测出羊肉及其制品中的鸭源成分,且与其他肉类不存在交叉反应,检出限可达到0.01%(w/w)。市售实际样品检测结果显示,所采集的羊肉片、羊肉串样品中均有鸭源性成分,且此结果与行业标准方法(PCR-电泳)的检测结果一致。LAMP-ICTS方法具有灵敏度高、特异性好、检测速度快、对仪器的依赖低等优点,适用于基层监管部门对羊肉及其制品真伪进行快速检测。     

基于LAMP法快速检测羊肉及其制品中的猪、鸭和羊源性成分

目的建立肉制品中猪、鸭和羊源性成分的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,对市售羊肉片、羊肉卷、羊肉串进行猪、鸭和羊源性成分检测分析。方法针对猪、鸭和羊线粒体Cytb基因分别设计2条外引物、2条内引物和2条环引物,优化LAMP反应条件,对猪、鸭和羊源性成分进行特异性和灵敏度试验,对羊肉制品进行上述动物源性成分监测。结果在0.2μmol/L外引物(F3和B3)、1.6μmol/L内引物(FIP和BIP)、0.8μmol/L环引物(FLP和BLP)、1 mol/L甜菜碱、6 mmol/L Mg SO4、1.6 mmol/L d NTP等参数的优化条件下,LAMP法对肉制品中猪、鸭和羊源性成分的检测灵敏度达0.5%。SYTO-9荧光染料的荧光实时检测结果与SYBR Green I染料肉眼观察结果一致。调查发现,该批市售羊肉及制品中存在掺假现象,掺假率为34.5%。结论 LAMP法具有操作简便、特异性强、灵敏度高、检测结果准确的特点,能有效地对肉制品中的猪、鸭和羊源性成分进行检测,可作为羊肉制品掺假的一种快速检测方法。     

鉴别绵羊肉中狐狸源性成分的环介导等温扩增检测方法的建立

目的建立一种能够快速区分出绵羊肉中掺入的狐狸源性成分的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。方法针对狐狸线粒体Cox I基因分别设计两条外引物和两条内引物,优化LAMP反应条件后并进行特异性和灵敏性试验,对绵羊肉中狐狸源性成分进行检测。结果在0.2μmol/L外引物(F3和B3)、1.6μmol/L内引物(FIP和BIP)、0.5 mol/L甜菜碱、0.4 mmol/L d NTP、4 mmol/L Mg SO_4等参数的优化条件下,可检测出掺假率为1.0%的羊肉制品,即最低检测浓度为2×10~(-4)ng/μl。结论本文所建立的LAMP法特异性强、灵敏度高,能有效地对绵羊肉中狐狸源性成分进行检测,可作为羊肉掺假的一种快速检测方法。     

环介导等温扩增技术快速检测植物蛋白饮料中大豆成分

目的 建立植物蛋白饮料中大豆成分环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplificantion,LAMP）快速检测技术方法。方法 根据大豆Lectin基因保守序列,设计大豆成分环介导等温扩增检测特异性引物和反应体系,对方法特异性、灵敏度和稳定性进行测试,并以实时荧光PCR方法为参比方法,对32种植物蛋白饮料进行检测应用验证。结果 本研究建立的LAMP方法特异性强,稳定性好,最低检出限为0.1%（以质量分数计）;通过参比方法验证,方法特异性和灵敏度为100%,不存在假阳性和假阴性。结论 本研究建立的LAMP技术快速检测植物蛋白饮料大豆成分的方法具有操作简单、快速准确、检测成本低等优点,可为植物蛋白饮料大豆成分掺杂掺假提供一种快速检测方法。     

环介导等温扩增法快速检测牛羊肉中的掺杂肉

面对肉制品掺假突发事件频发的现状,对动物源性成分快检方法需求迫切。在等温扩增方法基础上,开展了肉制品掺假鉴定方法研究。以猪、鸡、鸭线粒体细胞色素b基因为目的序列,采用软件Primer Explorer Version5,通过序列比对设计并筛选环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)的特异性扩增引物。通过反应体系优化建立猪、鸡、鸭源性成分的环介导等温扩增技术分析方法,对常见9种动物源性成分进行特异性分析,检出限达到0.001 ng/μL,高浓度牛、羊DNA不影响方法检出限。通过分析模板脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid, DNA)浓度与反应循环数的关系,建立牛羊肉产品中,阈值为1%的猪、鸡、鸭掺杂成分的LAMP快速检测方法,分析时间36 min。采用该方法对深加工模拟掺杂肉样本分析结果与现行国家标准方法结果一致。研究可为肉制品原材料、市售生鲜肉及加工肉制品的肉成分快速筛查提供解决途径。     

荧光定量PCR方法检测肉制品中鳄鱼源性成分

针对鳄鱼色素细胞b基因序列设计特异性引物,建立一种快速、特异、灵敏的鳄鱼源性成分检测方法。以常见羊肉、牛肉、猪肉、鸡肉、鸭肉、鱼肉、虾肉为参考动物物种作特异性检测,并经检出限和灵敏度实验验证其可行性。结果表明：该方法能够有效对鳄鱼源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,鳄鱼组分DNA的检出限可达0.001 ng/μL,灵敏度可达0.01 %。通过加工肉制品的检测验证,该方法拥有特异性强、灵敏度高的特点,可以用于加工肉制品中鳄鱼源性成分的检测。     

保健品中牛羊源性成分的PCR检测

本文根据牛、羊线粒体mtDNA中的保守序列，设计了针对牛羊源性成分检测的特异性扩增引物，通过聚合酶链反应技术(Polymerase Chain Reaction，PCR)建立了保健品中牛羊源性成分的快速检测方法。通过内切酶DpnⅡ和SspⅠ可分别对牛羊成分的扩增结果进行进一步验证，该方法对牛源性成分的检测低限为0．05％，对山羊和绵羊源性成分的检测低限分别为0．005％和和0．5％，可作为保健品中牛羊源性成分检测有效方法，也可作为保健品及动物源性产品中成分真伪鉴别的准确、可靠方法。     

食品中鱼源性成分PCR的检测方法

研究建立了食品中鱼源性成分的普通PCR检测方法,该方法特异、灵敏。应用鱼源性引物对35种鱼类、24种非鱼类动物和10种植物样品进行PCR检测,只在35种鱼类中出现224bp特异扩增条带,在其他的非鱼类动植物DNA中未出现扩增条带,实验表明,该PCR检测方法具有特异性。该检测方法的检测限为0.1ngDNA和0.1%(W/W)。运用建立的方法对市场上的80个不同类别的食品样品进行检测,其中有13个样品错误标识了鱼源性成分。该检测方法能够用于食品中鱼源性成分的鉴别。     

食品中鲨鱼源性成分真实性PCR鉴别研究

建立食品中真实性鲨鱼源性成分PCR鉴别方法,该方法特异性强,灵敏度高。运用普通PcR技术对9种鲨鱼及42种常见非鲨鱼类动植物样品进行检测,9种鲨鱼中出现180bp特异性扩增条带,其他非鲨鱼样品中均未出现扩增条带,实验表明,本检测方法具有特异性,检测限为0．1n/ul鲨鱼DNA和0．1％（W／W）鲨鱼肉粉。运用建立的方法对20种常见的鲨鱼产品进行PCR检测,除仿鱼翅和鲨鱼肝油外,所有产品中均能检测出鲨鱼成分。该检测方法能够用于食品中鲨鱼源性成分的真实性鉴别。     

鸡精调味料中鸡源性成分真实性鉴别研究

研究建立鸡精调味料中鸡源性成分的PCR检测方法,该方法特异、灵敏,检测限为0.1%。运用建立的方法对市场上的7个鸡精样品和2个鸡味调味料样品进行检测,在4个名牌鸡精样品中检出鸡源性成分,而在其它3个鸡精样品和2个鸡味调味料中未检出鸡源性成分。该检测方法能够用于鸡精调味料中鸡源性成分真实性鉴别。     

实时荧光PCR在鉴别鸡精中鸡源性成分的应用研究

文章利用实时荧光PCR方法,以鸡的cytb基因为目的基因,设计了一套特异性的引物和探针,对鸡精中的鸡源性成分进行定性、定量分析研究.结果表明,该套引物和探针能特异性的检测鸡精中鸡源性成分;荧光PCR检测的灵敏度为0.002％ (W/W),检测时间为3h.此方法具有准确、快速、高效的特点,为食品中鸡源性成分的检测提供了新方法.     

素食中动物源性成分的PCR检测方法的研究

建立了素食产品中动物源性成分的实时荧光PCR检测方法,该方法特异、灵敏,仅通过检测一个基因位点即可判断素食产品中是否含有动物源性成分,对来源于畜类、禽类及鱼类动物源性成分的检出限分别为0.01%,0.05%,0.1%。运用该方法对市场上22份不同类型的素食产品进行了检测,检出2份产品中含有动物源性成分。该方法操作方便快捷,适用于素食中动物源性成分的定性检测。     

广佛地区动物源性食品中源性成分和氯霉素残留监测结果分析

目的 为了保障食品安全和维护消费者合法权益 ,对广佛地区销售食品的动物源性成分和氯霉素残留进行分析。方法 本研究根据现行标准分析市场中60份牛肉、猪肉、鸡肉及其制品中牛、猪、鸡、鸭源性成分和氯霉素残留。 结果 共检出14份掺假样品,总掺假率为23.33% 。掺假情况主要 集中在牛肉和肉糜制品中。有一份样品检出氯霉素,残留量为0.556 μg/kg。按采样场所来看,产品质量和购买场所有一定相关性。结论 动物源性食品掺假现象在广佛地区较为严重,氯霉素残留也存在一定程度非法添加。进一步开展动物源性食品源性成分和兽药残留检验对食品安全具有重要意义。     

食品中若干植物源性成分的PCR检测

采用CTAB法提取豆奶粉、马铃薯、玉米、番茄及其制品样品中的总DNA,通过PCR方法检测大豆lectin、马铃薯patatin、玉米IVR、番茄PG等特异性内源基因,判断食品中是否含有大豆、马铃薯、玉米、番茄等植物源性成分。同时还进行了这些内源基因分别与核糖体18SrDNA或叶绿体rbcL基因之间的二重PCR分析。结果表明单PCR与二重PCR分析方法可靠稳定,可应用于食品中的植物源性成分的鉴定。     

液相色谱法检测畜禽食品中氯霉素残留研究进展

氯霉素是一种常用的具有旋光活性的广谱抗生素,广泛应用于畜牧业中。然而,动物生长过程中过量使用氯霉素会导致其在动物源性食品中残留,给人体健康带来极大的危害。世界各国对动物源性食品中氯霉素残留的监控愈来愈严格,对各种检测方法也提出了越来越高的要求。本文对氯霉素的危害、氯霉素使用限量标准及液相色谱法检测其在畜禽食品中的残留进行综述。