胶原蛋白酶产生菌的筛选及初步鉴定

从养殖场附近淤泥中采样,分离得到20株胶原蛋白水解活性的菌株.经活性平板初筛、摇床复筛及酶活测定,筛选得到1株胶原蛋白酶活性为28.70U/mL的菌株.通过对该菌株16S rDNA的blast检索及序列分析表明,该菌株与蜡状芽孢杆菌属有99％以上的同源性,结合生理生化实验结果,经形态观察、生化试验,初步鉴定该菌株为蜡状芽孢杆菌.     

醋醅中分离菌株W321种属鉴定的研究

试验以从醋醅中分离纯化到的菌株W321为研究对象,为进一步开发利用这一菌株,根据菌株W321的形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列,对其进行种属鉴定的研究.经形态与生理生化鉴定菌株W321属于芽孢杆菌属,16S rDNA序列与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的同源性达到了99％,表明与枯草芽孢杆菌极为相似,因而将菌株W.鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

蓝莓果浆中耐酸耐高温微生物的分离与鉴定

为了解和控制蓝莓果浆中的耐酸耐菌,采用酸化的凯氏培养基对蓝莓果浆中的耐酸耐热菌进行分离、培养和鉴定。结果表明,分离到的1株污染菌可以在60~90℃的温度范围及2.6~3.8的pH值范围内生长,符合耐酸耐热芽孢杆菌的特点。通过对分离菌株的细胞形态观察、菌落形态观察、生长条件、生理生化反应、16S rDNA测序等的分析研究,确立了分离菌与沙福芽孢杆菌有明显的相似性。     

鸡汤中一株耐热菌的分离与鉴定

实验室自制肉制品(鸡肉汤)中分离得到一株耐热菌,进行菌落形态、生理生化特征鉴定,并采用Biolog快速鉴定结合16S r DNA序列分析两种方式鉴定,16S r DNA序列分析结果表明此菌株属于芽孢杆菌属,Biolog快速鉴定结果显示此菌株属于芽孢杆菌属中的枯草芽孢杆菌。因此导致鸡汤高温加热后仍腐败变质的菌株为枯草芽孢杆菌。     

庆阳豆豉优势菌株的分离鉴定

为了确定庆阳豆豉的主要作用微生物,获得优势发酵菌株,以甘肃庆阳7个县区农户所制的发酵豆豉为材料,采用不同培养基分离纯化,通过平板透明圈法初筛,发酵液蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶活性测定,对传统豆豉发酵微生物进行了分离筛选,最后对优势菌株进行生理生化鉴定及16S rDNA分子生物学鉴定。共分离出22株细菌菌株,初筛获得10株均可分解蛋白质、淀粉和纤维素能力的菌株,其中QY2b蛋白酶和纤维素酶活性最高,分别达到了25.37 U/mL和6.015 U/mL。通过对QY2b的形态观察及生理生化试验,结合16S rDNA鉴定手段,确定该优势发酵菌种为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

利用16S rRNA序列鉴定分离自芽菜中的芽孢杆菌

从宜宾芽菜中分离优势菌群,选取4株芽孢杆菌,分别为B1、B2、B3、B4.对4株菌的16S rRNA基因经PCR扩增测序,将测序结果同该属内菌株的16S rRNA序列作多序列比较,并建立芽孢杆菌属的系统发育树.结合细菌形态学生理生化特性鉴定结果,结果表明菌株B1、B3为枯草芽孢杆菌,菌株B2为解淀粉芽孢杆菌,菌株B4为乙酰微小杆菌.     

产核糖核酸酶PA110-7菌株的筛选与初步鉴定

为筛选产核糖核酸酶并且具有抗病毒活性的植物来源的菌株,并鉴定。本实验从健康的碱蓬中分离到50株益生菌,通过平板显色法筛选得到9株产核糖核酸酶的益生菌,通过噬菌斑法进行复筛得到抗噬菌体率高达69%的菌株110-7。根据菌株的菌落形态、大小、颜色,革兰氏染色、芽孢染色等观察菌体形态以及生理生化实验、16S rDNA序列测定进行鉴定,初步判定该菌株为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。     

一株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其益生潜质分析

从养猪场健康成年猪粪便中分离、筛选出1株芽孢杆菌。经培养特征、形态观察、生理生化试验以及16S rDNA序列分析相似度为98.99%,确定该菌株为枯草芽孢杆菌,并进行了该枯草芽孢杆菌与肠道细菌在体外的生长竞争实验。结果表明:肠道厌氧菌群中的双歧杆菌、乳酸杆菌和拟杆菌数量均有不同程度增多,而肠杆菌、肠球菌等需氧菌群数量则有所减少。证明该菌株能促进肠道厌氧菌群的生长,而抑制需氧菌群的生长。可见,枯草芽孢杆菌能起到维持肠道微生态平衡的作用,是一株比较理想的潜在益生菌。     

一株高产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌分离及产酶条件优化

为了分离筛选高产纤维素酶活性菌株以为食品工业所用,从发酵豆制品及土壤中分离到21株革兰氏阳性细菌,并在含羧甲基纤维素钠琼脂培养基中培养24h,经刚果红染色、盐水脱色后5株细菌菌落周围可形成透明圈,其中以豆豉源F3菌株形成的透明圈与菌落直径比值最大,即纤维素酶活性最高。F3菌株经形态学特征及16S rDNA与gyrB基因序列比对分析,鉴定为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum)。通过单因素试验及正交试验对F3菌株液体发酵产纤维素酶条件进行了优化,确定了其产纤维素酶的最佳条件:培养基初始pH为pH7.0,接种量6%,培养温度37℃,培养时间60h,纤维素酶活力可达21.14U/mL。解淀粉芽孢杆菌F3菌株的酶学性质及其对豆豉营养价值及品质的影响仍有待于进一步深入研究。     

耐高温L-乳酸菌的筛选与鉴定

耐高温乳酸菌对木质纤维素的同步糖化共发酵生产乳酸和减少发酵过程中冷却水用量,降低染菌机会具有重要作用。本文从土壤中筛选到两株耐高温的L-乳酸菌Y3和Y6。对它们进行形态特征、生理生化特征和16S rDNA鉴定,以准确地判断其属种。形态学和生理生化结果表明Y3和Y6均符合芽孢杆菌属特征,16S rDNA鉴定结果表明两菌株属于凝结芽孢杆菌Bacillus coagulans。     

欧拉型藏羊源粪肠球菌的分离鉴定及药敏实验

从健康欧拉型藏羊肠道内容物中分离粪肠球菌,进行初步鉴定,旨在筛选出具有优良益生特性的菌株并研究其生长特性。对分离菌株EF1-mh进行分离纯化、革兰氏染色镜检、生化测定试验、16S rDNA测序鉴定试验、生长曲线测定和产酸能力检测、药敏试验和抑菌试验。结果显示,分离菌株EF1-mh为无芽孢、无菌毛的革兰氏阳性球菌。生化测定试验显示分离菌株EF1-mh能分解麦芽糖、葡萄糖、果糖等,不能分解甘露醇、山梨醇、棉子糖、L-鼠李糖、阿拉伯糖等,具有L-精氨酸双水解酶活性,胆汁七叶苷琼脂指示剂结果呈黑色,不产生硫化氢,吲哚试验、VP试验呈阴性,不利用西蒙氏枸橼酸盐和葡萄糖酸盐作为能源,不能还原硝酸盐。16S rDNA测序鉴定分离菌株EF1-mh为粪肠球菌（Enterococcus faecalis）。生长曲线测定和产酸能力结果显示EF1-mh菌株具有较强的生长能力和弱产酸能力。药敏试验结果显示EF1-mh菌株对苯唑西林、头孢呋辛、头孢氨苄、头孢拉定、多西环素、米诺环素表现出中度敏感;对呋喃唑酮、复方新诺明、头孢他啶、多粘菌素B表现出耐药。抑菌试验结果显示EF1-mh菌株上清液可有效抑制常见致病菌的生长,对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和产气荚膜梭菌4株常见致病菌都具有抑制作用,抑菌效果较好;其中对产气荚膜梭菌抑菌能力最强。研究结果将为进一步探索藏羊源微生态制剂提供基础候选菌株。     

一株牛蒡根际纤维素降解芽孢菌的分离鉴定和发酵分析

从牛蒡根际分离到一株纤维素降解菌株NP10。该菌是芽孢杆菌,其16S rDNA 的Genbank 序列号是FJ908093。分批发酵法对NP10 进行的分析显示,该菌是一株碱性纤维素降解菌。其滤纸酶(FPA)酶活力在32℃、pH8 发酵48h 达到最大为18.2U/mL,其羧甲基纤维素酶(CMCase)活力在32℃、pH7 发酵36h 达到最大,为8.1U/mL。     

游离棉酚脱除菌株的分离鉴定及体内定植效果研究

该研究从藜麦茎叶和番茄杆样品中筛选分离出高效游离棉酚脱除菌株,为棉籽粕生物脱毒提供优良菌株。测定筛选菌株的游离棉酚脱除能力及产蛋白酶能力,采用人工胃液、人工肠液耐受实验,抗生素敏感实验及表面特性实验研究筛选菌株在体内定植能力,并通过形态学观察、生理生化试验及16S rDNA序列分析对筛选菌株进行鉴定。结果表明,筛选出1株高效游离棉酚脱除芽孢杆菌,编号为S-77,其游离棉酚脱除率为81.30%,产蛋白酶酶活为767.27 U/g。菌株S-77被鉴定为东洋芽孢杆菌（Bacillus toyonensis）,具有耐人工胃液、肠液效果及较好黏附于宿主肠壁细胞的能力,对抗生素敏感,可用于棉籽粕生物脱毒。     

纤维素降解芽孢菌的筛选及产酶条件优化

为筛选高效的纤维素降解芽孢菌,利用刚果红平板染色法初筛,纤维素酶活性（以滤纸酶活表示）为评价指标进行复筛,从腐木中分离筛选出2株高产纤维素酶菌株K1、K2;结合形态学观察、生理生化特征和16S rDNA基因序列同源性分析,分别鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对培养条件进行单因素优化和正交试验优化,初步确定菌株K1最佳产酶条件为培养时间3 d,培养温度34 ℃、初始pH值7.0、接种量5%、装液量40%,在此优化条件下滤纸酶活为98.4 U/mL,是优化前的2.1倍。菌株K2最佳产酶条件为培养时间2 d,培养温度34 ℃、初始pH值7.0、接种量6%、装液量为30%,在此优化条件下,滤纸酶活为86.7 U/mL,是优化前的1.8倍。     

胀袋红烧肉和酱料包中产气微生物的分离与鉴定

为解决红烧肉和酱料包的胀袋和腐败问题,该研究对胀袋红烧肉、牛排酱与番茄酱的微生物进行分离鉴定,并通过16S rDNA鉴定和产气验证试验确定导致产品胀袋的主要产气微生物。结果显示,从3种胀袋产品中共分离出9株优势菌,编号为1~9。其中菌株1号和5号为革兰氏阳性球菌,经鉴定1号菌株为枝状葡萄球菌（Staphylococcus edaphicus）、5号菌株为戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）;4号和8号菌为革兰氏阴性杆菌,经鉴定4号菌株为巴氏柠檬酸杆菌（Citrobacter braakii）、8号菌株为弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii）;2号、3号、6号、7号和9号为革兰氏阳性杆菌,经鉴定2号菌株为魏斯氏菌（Weissella cibaria）、3号菌株为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）、6号菌株为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）、7号菌株为太平洋芽孢杆菌（Bacillus pacificus）、9号菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。经产气验证试验,可以确定Bacillus velezensis、Citrobacter braakii、Bacillus cereus、Bacillus pacificus和Citrobacter freundii为产气微生物,是引起红烧肉和酱料包胀袋的主要污染微生物。综合分析,芽孢杆菌是导致包装食品胀袋的主要产气微生物之一,有效控制芽孢及芽孢杆菌的污染是解决食品胀袋问题的关键。     

赤水晒醋中增黏微生物的分离鉴定及特性研究

从变质赤水晒醋中分离筛选出导致黏度增加的菌株N3、N5、N7和N11,检测其生理生化特征,并进行16S rDNA基因序列分析及生长特性研究。结果表明,经过生理生化特征分析、16S rDNA基因序列分析以及系统发育树分析鉴定菌株N3为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、菌株N5为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、菌株N7为索诺拉沙漠芽孢杆菌（Bacillus sonorensis）、菌株N11为酸居芽孢杆菌（Bacillus acidicola）。菌株N3、N5、N7和N11的最适生长温度均为45 ℃;菌株N3、N11的最适生长pH值为5.5;菌株N5、N7的最适生长pH值为4.5;菌株N3、N7、N11最适生长盐度（NaCl含量）为1%,菌株N5最适生长盐度（NaCl含量）为2%;4株菌在LB液体培养基中均具有较快的生长速度和较强的繁殖能力。     

柠檬苦素降解菌的分离筛选与分类鉴定

以新鲜醋醅为分离源,分离得到5株具有柠檬苦素降解活性的菌种,对柠檬苦素的最大降解率可达(58.86±2.81)%,发酵液的酶活力为(120.09±1.32)U/mL。基于形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析结果,所得5 株菌均属芽孢杆菌属(Bacillus),其中2株为Bacillus siamensis,1株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),1株为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus),降解能力最强的1株为芽孢杆菌种Bacillus tequilensis。     

白酒糟纤维素降解菌的分离筛选及发酵条件优化

该试验将松针腐殖土样品在酒糟富集培养基中富集,采用刚果红染色和滤纸崩解初筛,3,5-二硝基水杨酸（DNS）法复筛筛选高酶活的纤维素降解菌,对其进行分子生物学鉴定,并对其产酶条件进行优化,结果表明,筛选得到一株高酶活的纤维素降解菌M5,经ITS rDNA序列分析鉴定为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）。其在发酵温度20 ℃、初始pH值为3、酒糟为碳源、牛肉膏为氮源,发酵5 d时羧甲基纤维素（CMC）酶活为9.17 U/mL,滤纸酶活为3.50 U/mL;菌株M5所产的纤维素酶的最适反应温度为55 ℃。     

枯草芽孢杆菌纤维素酶基因整合载体的构建

目的:以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为宿主,构建纤维素酶基因整合表达载体,获得能够表达纤维素酶并且降解纤维素的工程菌。方法:通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从B.subtilis LN基因组中克隆同源片段M1、M2基因片段,以质粒pGEM-T为载体,将同源片段M1、M2、启动子P43和葡萄糖苷酶基因CelKg连接在一起构建整合载体pGEM-Kmpgmt,并采用双交换同源重组的方式将其转化进入B.subtilis LN基因组中。结果:通过PCR和双酶切验证整合载体构建完成,并成功整合到野生型B.subtilis LN中,获得重组菌B.subtilis Kpg。刚果红染色结果显示重组菌对羧甲基纤维素钠有降解作用。改良培养基37℃条件下摇瓶培养,重组菌B.subtilis Kpg生长至18 h时上清液中纤维素酶活力比野生型B.subtilis LN提高了115%。