紫外线与微波复合诱变选育高产脂肪酶菌株的研究

研究选育高产脂肪酶菌株。采用紫外线诱变、微波诱变和紫外微波复合诱变出发菌株H3,测定比较酶活,确定最佳诱变效果。结果表明,出发菌株经紫外线和微波诱变后,所产脂肪酶的最高酶活分别为57.984 U/m L和57.1 U/m L,比出发菌株H3提高了38.3%和36.2%,经微波辐射40 s和紫外线照射80 s的复合诱变菌株M3产酶活力最高,达61.6 U/m L,比出发菌株H3提高了46.85%。     

1株产耐热脂肪酶根霉突变株的选育

采用紫外线、硫酸二乙酯、紫外线和硫酸二乙酯复合对实验室保藏的1株高产耐热脂肪酶的根霉SFE-L01菌株进行诱变处理,筛选获得1株突变株UD-23,产耐热脂肪酶活力比出发菌株提高了112.39%,达24 000.00 U/mL。对突变株UD-23的产酶条件及部分酶学性质进行了研究,结果表明,突变株UD-23所产脂肪酶最适作用温度为60℃,且具有良好的热稳定性。条件优化后,该突变株产酶酶活达30 000.00 U/mL,比优化前提高了25%。     

脂肪酶产生菌的紫外诱变和筛选

以提高生物催化制备生物柴油的效率为目的,采用紫外诱变的方法对产脂肪酶的细菌菌株进行诱变和筛选,得到的诱变株命名为U12,脂肪酶酶活(60.25 U/mL)比原始相对出发菌株酶活提高220%。经五次传代实验平均酶活为58.63U/mL,相对诱变原菌降低2.69%。     

黑曲霉细胞诱变产菊粉酶菌株选育的研究

从徐州市沛县河口镇秦庄村牛蒡种植基地取得的土壤样本中,筛选出产菊粉酶的菌株,对从土壤中分离到的40株产菊粉酶的各类微生物进行酶活的测定。通过透明圈法初筛及摇瓶复筛,获得产菊粉酶能力较高的霉菌菌株3株,为C122803、D081506和D081513,这3株菌株的酶活分别达到：C122803：1.411U/mL;D081506：1.895U/mL;D081513：1.792U/mL。其中D081506的酶活最高,为1.895 U/mL;对D081506号黑曲霉产菊粉酶菌株进行紫外诱变及LiCl诱变后,得到一株内切型菊粉酶酶活最高的菌株F144131,其酶活力提高到2.025 U/mL,比出发菌株的酶活力提高了20%。     

紫外线和亚硝酸诱变选育高产α-环糊精葡萄糖基转移酶菌株

通过单因素实验,对已筛选出的产酶菌株N1进行诱变处理,结合甲基橙平板筛选和α一环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)活力测定,确定了紫外线和亚硝酸的诱变剂量,获得了一株【一CGTase活力较高的菌株B3.实验结果如下:距离20 W紫外灯30 cm,照射100 s,0.25 mol/L的HN02处理30 min,效果较好.出发菌株N1酶活为0.62 U/mL,经过诱变获得高产菌株B3酶活力是3.76 U/mL,发酵生产的α-CGTase活力比原始菌株提高了506％.经8代稳定性实验,B3的活力稳定在3.760±0.030 U/mL.     

葡聚糖酶产生菌的诱变选育

利用紫外线诱变育种方法分离对前期分离到一株葡聚糖酶野生菌株P5进行诱变。通过平板初筛、摇瓶复筛,从诱变菌株中筛选出一株高产菌株,其发酵酶活力可以达到5.85U/mL;在此基础上,对诱变菌株的发酵产酶工艺进行了初步的优化,其最适碳源为淀粉,最适氮源为花生饼粉,正交试验结果表明,淀粉含量为5%、花生饼粉含量为4%、NaH2PO4含量为0.2%时,该菌株的产酶量最高,酶活力达到21.23U/mL。     

甘薯生淀粉糖化酶菌株的分离与诱变育种

以红薯淀粉作唯一碳源的察氏培养基,从腐烂甘薯分离筛选出1株产甘薯生淀粉糖化酶能力较强的黑曲霉菌株,出发菌株发酵液粗酶的生淀粉降解酶活力为55.10 U/mL.通过紫外线诱变,突变株的粗酶活提高36.70%.再经亚硝基胍诱变,生淀粉酶活达116.84 U/mL,进一步提高34.30%.     

产亚油酸异构酶菌株的诱变选育及其酶学性质研究

以保加利亚乳杆菌为出发菌株,经紫外诱变选育,获得2株高产酶突变株A1及A2,其酶活分别为30.1U/mL、32.1U/mL,酶活较出发菌株分别提高45%和54%.酶学性质研究表明,A2菌株产亚油酸异构酶的最适反应温度分别为40℃,最适pH 6.5,酶在低于40%时具有良好的热稳定性,pH 6.0～7.0时较稳定.以Lineweaver-Burk双倒数作图法求得亚油酸异构酶的Km为0.039 mmol/L,Vmax为0.24mmol/(h·mg).     

黑曲霉5143脂肪酶离子注入诱变及酶学性质的研究

以产脂肪酶菌株黑曲霉Aspergillus niger51-43为出发菌株,经氮离子注入技术对其进行诱变,筛选获得酶活力有较大提高且传代稳定的正突变菌株L7,其脂肪酶活力达29.17U/mL,较原初酶活力19.28U/mL提高了151.3%。在此基础上,对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,高产突变株L7所产脂肪酶的最适作用温度为30℃,最适作用pH8.0,在50℃和pH6.0～9.0之间有很好的稳定性。Ca2+、Na+、Mg2+对该酶有一定的激活作用,而Cu2+、Mn2+、Fe2+、Co2+、Zn2+则抑制该酶的活性。     

大豆蛋白酶产生菌的诱变选育及酶学性质研究

从市场下水道中筛选获得一株产大豆蛋白酶的细菌D-16,经初步鉴定属于芽孢杆菌属(Bacillus),该菌的蛋白酶活力为1 164.00 U/mL.通过对初筛菌株进行紫外诱变和HNO2化学诱变,结合筛选,最后得到突变菌株D-16-9,其酶活为6518.40U/mL,酶活力提高了5.60倍,水解大豆蛋白的能力也提高了4.12倍.该酶作用的最适pH为10.5,pH7.0～12.0的范围内较稳定.最适温度为40℃,在60℃以下范围内,该酶具有良好的稳定性.Mg2+酶促反应有明显的促进作用,pb2+和EDTA明显抑制酶活力.