地方晒烟琼中五指山-1的青枯病抗性鉴定与指纹图谱开发

鉴定抗烟草青枯病的优异种质资源，拓宽青枯病抗性品种的遗传背景，提高品种抗病水平，是当前烟草抗性育种的研究重点。以Dixie Bright 101、K326、红花大金元为对照品种，在室内接种FJ-SMNT、FQY-4、Y45等3株菌株，对地方晒烟种质资源琼中五指山-1进行病情指数调查与抗性评价，并基于种质资源重测序数据，开发了琼中五指山-1的特异性SNP指纹图谱。结果表明，琼中五指山-1发病缓慢，病情轻微，病情指数增长平缓，对3株菌株均有良好的抗性，抗性水平显著高于抗病对照。构建的特异性指纹图谱由339个SNP位点组成，基于云计算平台开发了该指纹图谱的检测程序并利用测序技术对指纹图谱的可靠性进行了验证，证明了该指纹图谱可以从随机取样的样品中准确鉴定出琼中五指山-1。琼中五指山-1是目前国内发现的青枯病抗性最好的种质资源之一。     

基于RAD重测序技术开发烟草品种SNP位点

利用限制性内切酶位点标签（RAD）技术,通过对10份供试烟草材料的基因组简化重测序,发掘了烟草高通量SNP位点,为烟草基因组学提供标记信息。结果表明,本研究共获得了44.33 Gb的Clean data数据,平均覆盖度1.01 X,共鉴定到291 770个SNP位点,SNP位点间的平均间距为10.066±29.801 kb。发掘到的SNP位点能够覆盖整个基因组,但在不同染色体部位上的分布密度存在一定差异,在17号染色上半臂的存在一段大范围的SNP密集区域。SNP变异类型以转换为主,通过功能注释在基因区域发现45 049处SNP位点。利用SNP分型信息,计算了供试品种间的遗传距离,平均为0.29,台烟8号的遗传背景与其他品种相对最远。该结果将为烟草QTL定位、候选基因发掘、亲本组配等研究提供科研依据。     

基于SSR标记的初烤烟叶品种快速鉴别

为有效区分和鉴别烤后烟叶品种,以卷烟企业常用的11个主要烟草品种初烤烟叶为材料,应用磁珠法提取烟叶基因组,并通过PCR和琼脂糖凝胶电泳构建不同品种的SSR指纹图谱。结果表明,从24对候选SSR引物对中筛选出5对多态性高、稳定性强的引物对,其扩增片段长度在100～300 bp之间,经3%琼脂糖凝胶电泳获得了清晰条带。由5对SSR引物的电泳图谱构建了11个烟草品种指纹图谱,并绘制出鉴定流程图,实现了11个烟草品种的快速区分。本方法简单易行、操作性强,可用于选定范围内的初烤烟叶品种的真实性和一致性判定。     

部分普通烟草种质资源的SSR标记与指纹图谱分析

利用SSR标记构建了烟草核心种质中80份普通烟草种质的指纹图谱.从286对SSR引物中筛选出8对多态性较好的引物,对这些烟草种质进行分析,共检测到85个多态性位点.研究表明,这8对多态性SSR引物可以将80份烟草种质完全区分开,每份种质都有各自独特的指纹图谱,表明SSR标记完全适用于普通烟草种质鉴定和指纹图谱构建工作.     

普通烟草种质资源的SSR标记与指纹图谱分析

利用SSR标记构建了烟草核心种质中80份普通烟草种质的指纹图谱。从286对SSR引物中筛选出8对多态性较好的引物,对这些烟草种质进行分析,共检测到85个多态性位点。研究表明,这8对多态性SSR引物可以将80份烟草种质完全区分开,每份种质都有各自独特的指纹图谱,表明SSR标记完全适用于普通烟草种质鉴定和指纹图谱构建工作。     

烤烟烟碱含量的全基因组关联分析

烟碱是烟草属特有的一类生物碱,为加深对烟碱遗传调控机制的解析,充分挖掘高烟碱优异等位。本研究选取219份烤烟品种开展了RAD重测序研究,获得了384,904个高质量SNP位点的群体分型数据。同时在四川西昌和山东诸城2个试验点,于2012-2015年相同栽培管理条件下对供试品种的烟叶烟碱含量进行了表型鉴定。利用全基因组关联分析的策略,共发掘到2个与烟碱含量显著关联的SNP位点,分别位于1号染色体的69,912,063bp处和2号染色体的81,115,794bp处。基于上述SNP位点预测到2个候选基因,并将目标SNP位点转化3对可通过PCR检测的功能标记。通过以上研究,加深了烟碱遗传调控机制的解析,为高烟碱优异等位基因型的发掘和高烟碱新品种的分子标记辅助选择提供了可用的标记和基因资源。      

基于竞争性等位基因特异性PCR技术的麦芽品种纯度定性和定量检测

利用测序技术筛选和确认4?个可以区分7?种大麦麦芽的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNP）位点,并建立区分图谱。同时,利用竞争性等位基因特异性聚合酶链式反应检测技术对预混样品进行定量测试,其检测的结果与真实性之间相对误差小于3%。该技术的建立对大麦麦芽纯度检测提供方法,对大麦麦芽SNP指纹数据库的完善提供了数据支持。     

烟草青枯病抗性的全基因组关联分析

为发掘并定位烟草青枯病抗性遗传位点,利用RAD简化基因组重测序技术（RAD-seq）,以219份遗传多样性较高的国内外烟草品种作为供试自然群体,利用田间病圃鉴定供试材料的青枯病抗性,通过全基因组关联分析（GWAS）,发掘抗病基因组区段,并进行抗病候选基因预测。结果表明,筛选鉴定到8个高抗青枯病的烟草品种,获得了384 904个高质量的SNP位点,对烤烟群体的基因组连锁不平衡衰减（LD）距离进行了估算,平均为256 kb。在烟草基因组内发掘到1个与烟草青枯病抗性变异显著关联的区段,峰值SNP在17号染色体的23 977 382 bp处,p=6.196×10^-7,能解释14.29%的表型变异,在该区段内预测到4个抗病候选基因。本研究为烟草青枯病抗病基因克隆及分子育种提供了较为明确的基因组定位信息。     

江苏中烟核心原料产区烤烟品种遗传分析及分子身份证构建

烟叶原料的稳定性、一致性是保障烟草工业公司产品高质量发展的关键，有效区分和鉴别烟叶原料是当前工业公司亟需解决的难点。本研究以江苏中烟核心原料产区主栽的23个烤烟品种为材料，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，从212对SSR引物中最终筛选出12对多态性高且条带清晰的引物，等位基因数介于2～5，多态性信息含量介于0.333 8～0.571 1。聚类分析发现，各品种按照遗传背景聚为4类；群体遗传结构和主成分分析均将供试材料划分为2个亚群，且类群内各品种的分布结果高度一致，与种质亲缘关系吻合度较高。该组引物高效可靠，可用于烤烟品种的DNA指纹图谱构建和遗传多样性分析。本研究可为江苏中烟核心产区主栽烤烟品种的育种利用和烟叶原料鉴定提供理论依据。     

烤烟致香物质GC/MS指纹图谱在产区识别中的应用

为研究GC/MS指纹图谱在烤烟产区识别中的应用,实验采用同时蒸馏萃取烤烟中香气物质,GC/MS检测,构建了湖南、广西、贵州3个产区烤烟的致香物质标准指纹图谱。随机选取这3个产区及广东、河南的部分烤烟样品对建立的标准指纹图谱进行验证。结果表明,验证样品与其所属产区的标准指纹图谱相似度较高,而与其他产区标准指纹图谱的相似度较低,从而能准确的识别其所属产区。将几个产区烤烟样品的指纹图谱进行系统聚类分析,不同产区的烤烟能够很好的聚合到一类,表明构建的指纹图谱能够反映不同产区烤烟的风格特色,进一步验证了利用GC/MS指纹图谱结合系统聚类法对样品进行产区识别及风格特色定位的可行性。     

烤烟新品种粤烟208的选育及特征特性

粤烟208是以MS89X为母本,98-39-1为父本配制而成的烤烟雄性不育一代杂交种,于2017年6月通过全国烟草品种审定委员会审定。该品种田间生长整齐一致,长势强,叶片分层落黄,易烘烤;中抗青枯病、黑胫病和根结线虫病,中感TMV和CMV,感赤星病和PVY,综合经济性状优于对照品种K326。烤后原烟颜色以金黄色为主,部分正黄色,结构疏松,化学成份较协调,感官质量与K326相当。粤烟208是一个较能兼顾产量、质量、烘烤性能和抗病性的优良烤烟新品种,适宜在东南烟区种植。     

应用SNP标记分析24份烟草品种的遗传多样性

为了阐明我国烟草主栽品种的遗传基础,利用烟草高密度SNP芯片技术对24份烟草品种进行全基因组扫描,并分析其遗传多样性。在筛选获得的纯合SNP位点中,多态性位点达到103 133个,基本覆盖烟草基因组。品种间遗传相似系数介于0.308 6~0.997 7之间。聚类分析结果,将24个品种划分为不同类群,反映出这些烟草品种间的亲缘关系远近。结果显示,SNP芯片能够在全基因组水平上获得不同烟草品种间的多态性信息,可用于品种间的遗传多样性分析。烟草主栽品种间的亲缘关系较近,在育种中迫切需要引入新的种质资源,以拓宽遗传背景。     

云南品牌卷烟主体烟叶原料的ISSR多态性分析及标记

为考察云南品牌卷烟主体烟叶原料的遗传多样性,从27个ISSR引物中筛选出7个引物,分别在17份烟草材料中进行PCR扩增。结果显示,能够产生40条稳定的条带,其中多态性带28条。通过UPGMA聚类分析,将17个烤烟品种分为2类。品种间遗传相似指数范围为0.50~1.00。同时,利用1个多态性强的ISSR引物、通过聚丙烯酰胺凝胶可以将这17份烤烟材料区分开,每个品种均有各自独特的指纹图谱,表明ISSR标记适于烟草品种鉴定和遗传多样性分析。     

烟草黄瓜花叶病毒抗性位点发掘

烟草黄瓜花叶病毒（CMV）是烟草生产中主要病害之一,发掘其抗性位点,培育抗病品种是最有效的策略之一。本研究利用高抗CMV烤烟品种台烟8号为轮回亲本,优质感病烤烟品种NC82为供体亲本,配置BC1F1群体。在此基础上,利用组织快繁技术对200份BC1F1群体进行快繁,苗期人工接种CMV,获得稳定、可靠的表型数据。利用SSR标记构建遗传图谱,进而利用单向方差分析和完备复合区间作图法发掘CMV抗性位点。结果表明,单向方差分析法分别检测到5个与发病率性状和病情指数性状相关的标记;完备复合区间法共定位到5个QTL,其中2个与发病率性状相关,3个与病情指数性状相关。相关定位结果对开展分子育种辅助改良烟草CMV抗性具有一定意义。     

辽宁地区绿豆品种SSR指纹图谱构建及品种鉴定

目的：构建辽宁地区绿豆品种的DNA指纹图谱,建立一种快速准确的品种鉴定方法。方法：利用15 对多态性丰富的简单重复序列（simple sequence repeat,SSR）引物构建辽宁地区48?份绿豆品种的指纹数据库及SSR指纹图谱。结果：15?对引物共扩增出58?个等位基因,每对引物检测到2～7?个不等,平均为3.9,其中特异性条带13?个,占总数的22.4%。多态信息含量介于0.114?5～0.776?4之间,平均为0.378?4。选择鉴别能力较强的5?对引物组合,区分率为75%;15?对引物组合,区分率为89.68%。构建了0/1形式的指纹数据库和SSR指纹图谱,除个别品种外均具有唯一性,可用于品种鉴定。结论：SSR指纹图谱的构建为绿豆品种鉴定提供了新的途径,为绿豆资源评价、保护及新品选育提供技术支撑和科学参考。     

烟草抗病毒相关R基因RNAi 表达载体的构建

RNA 干扰介导的基因沉默是植物抗病育种和大规模分析功能基因快速而有效的方法。构建烟草抗病毒病相关 R 基因的RNAi表达载体并导入烟草可获得抗病毒病烟草材料,并为大规模分析鉴定烟草功能基因提供新方法。本研究利用绒毛状烟草基因组测序获得的 R 基因序列设计引物,通过 PCR 技术扩增出带有特异性结合位点 attB 的 R 基因部分序列。采用GATEWAY 方法将目的基因的干扰片段插入到表达载体 pH 7 GWIWG2(I),成功构建了烟草抗病毒病相关 R 基因的 RNAi表达载体。     

我国江淮产区主要芝麻品种的SRAP指纹图谱分析

利用SRAP分子标记对江淮主产区8个芝麻品种进行指纹图谱分析。32对有效扩增的引物中有27对扩增出多态性,占84．37％;27对多态性引物共扩增465个位点,多态性位点158个,占33．98％;平均每对引物可检测位点17．22个,其中多态性位点平均5．85个;8个品种相互间的相似系数在0．7861—0．9711之间,平均为0．9079;用一对引物Em07／Me09便可将8份芝麻品种区分开来,用其构建的指纹图谱的置信概率达到99．6948％。     

烤烟生育期相关性状的初步遗传分析

为了初步掌握烤烟生育期相关性状的遗传机理,本研究利用了由开花相对稍早的品种K326和迟花品种兴烟1号杂交所得的F1植株经过组织培养和染色体加倍技术获得的双单倍体（doubled haploid, DH）群体为作图群体,以AFLP和SSR分子标记为主构建了包含23个连锁群、160个标记的烤烟遗传连锁图谱,其中包括23个AFLP标记、1个SRAP标记和136个SSR标记,图谱总长为1814.1 cM。利用复合区间作图法对烟草生育期相关性状开花时间和有效叶数进行了初步的遗传分析,结果表明,共检测到3个主效QTL位点与生育期性状相关,其中2个位点（df1和df2）与开花时间相关,分别位于第1和第11连锁群,表型变异贡献率分别为24.5%和17.3%;第3个位点与有效叶数（npl）相关,分布在第3连锁群上,表型变异贡献率为18.6%,该结果为后续利用高通量分析手段对烟草生育期性状进行精细定位奠定了基础。      

津巴布韦烤烟杂交种的利用与启示

为了解津巴布韦烤烟杂交种利用状况,学习其经验,提高我国烤烟育种研究的能力,在实地考察和调研的基础上,对津巴布韦烤烟育种的理念和策略、杂种利用研究和程序、杂交种的区域试验和推广应用等方面进行了介绍和分析。津巴布韦近20年来培育的烤烟品种均为雄性不育杂交种。杂交种在加快产生多抗品种方面具有优势,但多抗性亲本是杂交种聚合更多病害抗性的基础。因此,从种质资源中挖掘津巴布韦烤烟生产上主要病害的有效抗源,并成功地将其抗性基因转育到烤烟栽培品种中,培育出一批兼抗多种病害且品质优良的烤烟亲本材料,为多抗性杂交种的培育奠定了基础。与津巴布韦相比,我国在烤烟生产上推广自主选育的优质多抗杂交种数量较少,其根本原因是兼抗多种病害且品质优良的亲本材料严重缺乏。因此,我国烤烟育种上应加强抗病种质资源的挖掘利用,注重兼抗多种病害的优良亲本材料的培育,以充分利用杂交种。     

烤烟品种的RAPD分析

利用RAPD标记研究了29个烤烟品种的分子指纹和遗传关系。100个随机引物经10个品种筛选,选出18个随机引物对29个品种基因组DNA进行扩增,得到了29个烤烟品种的分子指纹图谱,参照这些图谱,可对不同烤烟品种进行真实性鉴定。以扩增到的79条多态性DNA片段为基础计算29个品种间遗传相似系数,利用UPGMA法作聚类图,可将参试品种分为3个类群。云南省主栽品种K326与近年选育的品种V2、云烟85、云烟317等被归为一类,遗传基础过于狭窄,建议选用一些遗传关系较远的品种进行亲本选配、品种布局;北方烟区主栽品种NC89、地方品种净叶黄及G140等则归为另一类。