基于G-四链体/硫黄素T无标记荧光适配体传感器快速检测氟苯尼考

硫黄素T(ThT)通过非共价相互作用与G-四链体结合,形成G-四链体/ThT复合物,呈现出较强荧光强度,而游离ThT荧光十分微弱。当存在氟苯尼考(FF)时,具有G-四链体结构的适配体(Apt)对靶标的高亲和力,使得Apt/FF复合物形成并释放ThT,荧光强度降低。基于这一特点,本研究设计一种灵敏快速的现场检测体系,用于检测氟苯尼考,即基于G-四链体/硫黄素T的无标记荧光适配体传感器。该适配体传感器的检测范围为0.0128~200 ng/mL,实际检出限0.0128 ng/mL,检测总时长10 min。同时,对实际加标样品(牛奶和鸡蛋)进行回收率计算,加标回收率在91.2%~117.1%之间。所建立的无标记荧光适配体传感器具有高特异性、成本低、耗时短等优点,可用于实际样品的现场检测。     

构建下转换荧光-适配体的免疫层析试纸条用于快速检测黄曲霉毒素B1

构建下转换荧光-适配体免疫层析试纸条用于食品中黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）的快速高效检测。体系中AFB1存在会减弱下转换荧光-适配体纳米颗粒层析至T线时与AFB1半抗原的结合能力,从而导致下转换荧光信号衰减,进而实现对AFB1的高效检测。该方法在AFB1质量浓度1～40 ng/mL范围内与荧光信号呈良好的线性关系,线性相关系数为0.994,检测限为0.287 ng/mL。该方法利用稀土掺杂荧光纳米颗粒的长寿命发光及近红外荧光特性,有效降低了生物背景荧光干扰并提高了检测体系的特异性。该方法在AFB1的快速高灵敏检测中具有良好的应用前景。     

基于聚集诱导发光的荧光适体传感器检测Ag~+

基于9,10-二苯乙烯基蒽季铵盐(9,10-distyryl sulfonium quaternary ammonium salt,DSAI)的聚集诱导发光现象,利用适配体识别技术与荧光共振能量转移技术用于对Ag~+进行检测的方法。当有Ag~+加入时,目标物与适配体通过特异性结合形成U型结构,使适配体构象改变,同时,适配体脱离黑磷纳米片的吸附,DSAI和适配体通过静电吸附作用及疏水相互作用结合,溶液体系荧光增强。以Ag~+为检测目标,构建基于聚集诱导发光现象的荧光适体传感器的检测方法,在0.01～100 ng/mL质量浓度范围内呈良好线性关系,检测限为0.002 ng/mL。由于其简单、易操作、低成本、高灵敏度和选择性,该适配体传感器可以扩展到检测其他目标。     

基于金属有机框架的荧光适配体传感器检测红酒中黄曲霉毒素B1

该文利用金属有机框架（Metal-organic Framework,MOF）材料和荧光标记的核酸适配体构建一种基于光诱导电子转移的荧光适配体传感器用于黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的检测。MOF材料为氨基功能化的奥斯陆大学66（Amino-functionalized University of Oslo 66,UiO-66-NH2）,标记有四甲基罗丹明（Tetramethylrhodamine,TAMRA）荧光团的核酸适配体（TAMRA-aptamer）通过π-π堆积作用吸附于UiO-66-NH2表面,由于光诱导电子转移使TAMRA-aptamer的荧光猝灭。加入目标物AFB1后,核酸适配体与AFB1特异性识别并结合,使核酸适配体从单链结构转变为稳定的内环结构。由于内环结构与UiO-66-NH2之间的结合能力较弱,光诱导电子转移被阻断,TAMRA-aptamer荧光恢复。该荧光适配体传感器用于AFB1检测,在1.00~100.00 ng/mL范围内荧光信号强度与AFB1浓度具有良好的线性相关性,相关系数的平方（R2）为0.994,检测限为0.50 ng/mL。该方法用于红酒中AFB1的测定,样品添加回收率为90.00%~101.00%。该方法操作简便、成本低、选择性好、灵敏度高,可用于红酒中AFB1的快速检测。     

磁控双色上转换荧光适配体传感器同时检测玉米和燕麦粉中的赭曲霉毒素A与玉米赤霉烯酮

目的 建立上转换荧光法同时检测食品中赭曲霉毒素A（ochratoxin A,OTA）与玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）的含量 方法 利用溶剂热法合成了两种油酸封端的核壳型上转换纳米材料,通过表面改性法和戊二醛法制备了表面分别偶联OTA、ZEN适配体的核壳型上转换荧光探针。同时制备了表面原位生长四氧化三铁纳米颗粒的二硫化钼纳米片,作为淬灭剂。OTA、ZEN和适配体特异性结合后,通过磁分离后检测溶液的荧光强度值,从而实现OTA和ZEN浓度的检测。结果 该方法在最佳检测条件下,OTA与ZEN的浓度在0.05~500.00 ng/mL的线性检测范围内,与两种上转换荧光探针的荧光强度的对数值呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9949和0.9972,对OTA的检测限为3.97×10-2 ng/mL,对ZEN的检测限为3.11×10-2 ng/mL,应用于玉米粉和燕麦粉中OTA和ZEN的检测,加标回收率为91.7%~109.4%。结论 该方法成功检测灵敏度较高,并具有较好的特异性,可用于食品中OTA和ZEN的高灵敏检测。     

基于适配体荧光传感器检测山药和薏苡仁中的赭曲霉毒素A

目的构建一种操作简单、选择性好、快速检测山药和薏苡仁中赭曲霉毒素A(ochratoxinA,OTA)的适配体荧光传感检测方法。方法制备表面包裹适配体且孔穴负载荧光染料罗丹明6G的二氧化硅纳米颗粒,OTA与其表面的适配体结合后,检测溶液的荧光信号变化,从而实现OTA浓度的检测。结果在最佳条件下,OTA的质量浓度在5~500 ng/mL范围内与荧光强度差值呈良好的线性关系,相关系数为0.9918,检出限为2.06ng/mL。应用于山药和薏苡仁中OTA的检测,加标回收率为90.7%~107.1%,相对标准偏差为2.41%~5.66%。结论该方法操作简便、选择性好、稳定性高,有望用于药食同源中药材中OTA的快速检测。     

基于荧光生物传感技术检测牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素B

摘 要: 目的 利用纳米金粒子(gold nanoparticles, AuNPs)荧光猝灭性能和核酸适配体的高亲和力, 构建一种简便、灵敏的纳米金“Turn-on”型荧光生物传感方法检测牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素B (staphylococcal enterotoxins B, SEB)。方法 以AuNPs作为荧光体的能量受体(猝灭剂), 荧光素-单链DNA (fluorescein-ssDNA, FAM-ssDNA)作为荧光能量供体, 冷冻法制备AuNPs-SEB适配体复合物, 基于AuNPs-SEB适配体复合物/SEB/FAM-ssDNA的竞争性结合, 构建纳米金“Turn-on”型荧光生物传感检测方法。对缓冲体系pH和反应时间等条件进行优化, 以牛奶为代表对方法检测性能进行验证。结果 在优化好的实验条件(pH 7.5、反应时间15 min和反应温度25℃)下, 在10?1~104 ng/mL范围内, 荧光强度与SEB质量浓度之间呈现良好的线性关系, 其相关系数为0.995, 检出限为0.062 ng/mL。应用于牛奶样品中SEB的测定, 方法回收率为91.2%~108.0%, 相对标准偏差在2.6%~5.2%范围之间。结论 该纳米金“Turn-on”型荧光生物传感检测技术具有简便、灵敏和准确等优点, 可为食品中污染物的检测提供一种可行的新方法。     

基于核酸适配体和G-四链体免标记荧光分析法检测氯霉素

摘要：目的 本文基于核酸适配体和G-四链体（g-quadruplex&G4）结构建立了一种荧光分析法检测氯霉素(chloramphenicol&CAP)含量,应用于化学分析、环境检测、食品安全等领域。方法 G4探针和适配体(Aptamer&AP)在Tris-HCl缓冲液中合成,由于G4探针与适配体的结合抑制了G-四链体的形成,NMM染料无法被G-四链体结构增强,荧光强度较弱,加入氯霉素竞争结合适配体,使得G4探针结构改变,通过荧光强度产生的变化分析样品中的氯霉素含量。围绕G4检测探针进行系列优化,优化后的探针序列为5’-GGGTTTTGGGTACTTCCAACTCACTGAAGTTGGGTTTTGGG-3’,优化后 Tris-HCl缓冲液体系中钾离子和镁离子浓度分别为10mM和5mM,优化后G4探针浓度：适配体浓度之比为1：1。结果 结果表明,当氯霉素质量浓度在1～10 ng/mL时体系的荧光强度增长值与氯霉素浓度呈线性关系,线性方程为y=59.091x+1.733（R2=0.9939）。根据三倍相对标准偏差（3σ/K,n=11）计算该方法检出限为 0.518 ng/mL。本方法对卡那霉素、链霉素和庆大霉素无荧光响应,具有良好选择性和特异性。结论 本方法重复性和实用性好, 可应用于化学分析、环境检测、食品安全等领域。     

基于荧光共振能量转移快速检测食品中的四环素类药物

基于上转换发光纳米技术构建荧光共振能量转移体系,快速检测食品中四环素类药物。通过将上转换发光纳米材料作为能量供体,金纳米粒子作为能量受体,建立基于荧光共振能量转移的四环素类药物的检测方法。结果表明,通过荧光量的恢复量来定量游离抗原,得到体系中荧光的恢复量与四环素类抗原浓度(范围在1 ng/mL~100 ng/mL)呈良好的线性关系,可以检测到四环素类药物的最低检出限为0.1 ng/mL。同时,该方法可用于牛奶中四环素药物的检测。通过建立能够检测四环素类药物的上转换发光纳米技术,为四环素类药物食品安全检测提供了一种快速、灵敏、稳定的方法,也为上转换发光纳米技术运用于检测食品中更多的有害物质提供了良好的基础。     

基于荧光分子开关和核酸适配体的镉离子快速检测方法

考查了不同pH值、噻唑橙—适配体浓度比、噻唑橙与适配体结合时间、适配体与镉离子结合时间对体系荧光强度的影响。结果表明:荧光检测的最佳条件为pH值7、噻唑橙—适配体浓度比7∶3、噻唑橙与适配体结合时间15min、适配体与镉离子结合时间20min。该条件下,荧光强度与镉离子浓度表现出良好的线性关系,线性范围为2.00～80.00ng/mL,检测限为0.23ng/mL。该方法不需要对适配体进行荧光标记,操作简单。     

基于黑磷纳米片的荧光适配体传感器检测雌激素17β-雌二醇

建立一种定量检测雌激素17β-雌二醇（E2）的荧光适配体传感器。以黑磷晶体为原料,利用超声辅助液相剥离技术制备了黑磷纳米片（BPNs）作为荧光受体,基于6-羧基荧光素标记的适配体（FAM-Apt）与BPNs间的荧光共振能量转移机制构建了荧光适配体传感器,对BPNs浓度、FAM-Apt浓度和反应时间进行优化,并对自来水和牛奶样品进行测定。结果表明,该BPNs具有独立的片层结构且粒径均匀;在最优条件下,即BPNs和FAM-Apt的浓度分别为10 μg/mL和7.5 nmol/L时,该传感器对E2检测的线性范围为1.5～60 ng/mL,检测限为1.0 ng/mL。自来水和牛奶样品中加标回收率分别为91.2%～104.8%和87.5%～104.3%;相对标准偏差（RSD）为4.99%～10.53%和4.48%～11.24%。该方法简便、灵敏,30 min即可完成检测,特异性强,能够实现对实际样品中E2的定量检测。     

竞争性酶联适配体可视化检测玉米赤霉烯酮

建立一种基于竞争性酶联适配体检测食品中玉米赤霉烯酮的可视化分析方法。将生物素标记的玉米赤霉烯酮适配体通过生物素-亲和素连接固定在微孔板上,玉米赤霉烯酮适配体的互补链(c DNA)与辣根过氧化物酶(HRP)连接形成cDNA-HRP信号探针,cDNA-HRP信号探针和靶标竞争与适配体结合,加入TMB显色液和硫酸终止液后,即可实现玉米赤霉烯酮的可视化检测。在最佳反应条件下,方法最低检测限为0.7 ng/mL,在1～10 000 ng/mL范围内线性良好(R~2=0.991 3),与类似的真菌毒素相比具有较高的特异性,对啤酒和玉米样品的加标回收率分别为88.57%～102.14%和91.43%～106.43%。该方法灵敏度高、特异性好且检测成本低,适用于食品中玉米赤霉烯酮的可视化检测。     

基于核酸适配体检测玉米中的赭曲霉毒素A

目的 建立一种基于核酸适配体检测玉米中赭曲霉毒素A (ochratoxin A, OTA)的方法。方法 以微孔板为载体, 采用偶联生物素和Cy3荧光标记的核酸适配体与OTA的特异性结合, 而与偶联黑洞淬灭探针(black hole quencher 2, BHQ2)的互补序列无法配对, 导致荧光值变化从而实现对OTA的定量检测。结果 优化的条件为链亲和素质量浓度为100 μg/mL, 核酸适配体浓度为200 nmol/L, 互补序列浓度为400 nmol/L, OTA在0.05~10.00 ng/mL范围具有较好的线性关系。与赭曲霉毒素B、黄曲霉毒素B1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的交叉反应率均低于1%, 玉米样品中添加OTA的平均回收率为89.0%~93.8%。结论 该方法快速、准确、灵敏, 交叉反应率低, 可用于样品中OTA的分析检测。     

基于核酸适配体的镉离子可视化检测方法

利用适配体对镉离子的特异性识别作用,以镉离子适配体及互补链为生物识别单元,建立基于核酸适配体的镉离子可视化检测方法,实现对自来水中镉离子痕量检测。该方法将镉离子适配体固定在微孔板上,再与适配体互补链及-辣根过氧化物酶(HRP)复合物进行竞争性结合,通过HRP对底物的催化水解反应引起450nm处特征峰的变化来定量检测镉离子。结果表明:该检测体系在0.1~5.0ng/mL时具有线性关系(R~2=0.995 8),检测限低至0.5ng/mL。该方法选择性良好、操作简单、灵敏度高,并且具有较好的实用性,可用于食品安全分析和环境监测中金属离子镉的检测。     

膜芯片用于肉制品中动物源性成分检测的研究

目的研究膜芯片技术检测肉类及其制品中动物源性成分,验证该技术的准确性及可行性。方法利用膜芯片检测肉制品中的动物源性成分,对样品中猪、牦牛、驴及羊源性成分的灵敏度、检出限进行相关实验,并就实际样品的检测与国家标准进行比较。结果该技术用于动物源性成分检测特异性良好,4种动物源性检测的灵敏度为0.1 ng,检出限为0.1%(w:w),适用的样品种类较广,实际样品的检测结果与国家标准荧光PCR法一致。结论该技术可作为快速筛选的方法,为肉制品的动物源性成分鉴定和掺假检测提供理论依据。     

基于二氧化锰纳米片和核酸外切酶I构建荧光适配体传感器检测氯霉素

为创建食品中氯霉素的新型快速检测方法,以二氧化锰纳米片淬灭适配体的荧光,核酸外切酶I酶切放大荧光信号,构建了检测氯霉素的适配体传感器。结果表明:在适配体浓度50nmol/L,二氧化锰质量浓度0.05mg/mL,核酸外切酶用量0.4U/μL,酶切时间50min的最佳荧光检测条件下,线性范围为0.1~80.0nmol/L,检出限为0.08nmol/L。构建的检测方法具有操作简单,检测灵敏度高的优点,并实现了在食品样品中的准确检测。     

动物源性食品中常山酮残留量的液相色谱检测法及液相色谱-串联质谱确证法

建立了动物源性食品中常山酮残留量的液相色谱检测(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)法及液相色谱-串联质谱(High Performance Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry, HPLC-MS/MS)确证法。动物源性食品中的常山酮,用胰蛋白酶酶解,乙酸乙酯提取,固相萃取柱净化,液相色谱法测定,对于牛组织样品和疑似常山酮阳性的鸡组织样品,采用液相色谱-串联质谱法进行确证。液相色谱法:在50～1 000ng/mL线性范围内,常山酮的回归方程呈良好的线性关系,R~20.999,鸡组织样品在添加水平为50μg/kg和100μg/kg时,回收率为82.50%～96.46%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.71%～5.44%,方法检出限为25μg/kg,定量限为50μg/kg;液相色谱-串联质谱法:在0.5～50ng/mL线性范围内,常山酮的回归方程呈良好的线性关系,R~20.998,动物源性食品样品在添加水平为0.5μg/kg和5μg/kg时,回收率为70.20%～93.60%,RSD为6.50%～9.48%,方法检出限为0.25μg/kg,定量限为0.5μg/kg。该方法简便、快捷,灵敏度、准确度和精密度均较高,检出限低,解决了残留限量要求较低的牛组织样品中常山酮的检测问题,适用于动物源性食品中常山酮残留量的检测和确证。     

基于金掺杂的锆基金属有机框架电化学适配体传感器检测玉米中黄曲霉毒素B1

目的 基于金掺杂的锆基金属有机框架(Gold-doped zirconium-based metal-organic framework, Au@Zr-MOF)的电化学适配体传感器建立检测玉米中黄曲霉毒素B1 (Aflatoxin B1,AFB1)的方法。方法 利用具有高比表面积、介孔结构的Zr-MOF作为骨架,通过原位还原生长的方法掺杂金纳米粒子(Au NPs),得到导电性良好、分散均匀的Au@Zr-MOF。并基于Au-S键共价结合黄曲霉毒素B1 适配体,构建电化学阻抗型适配体传感器,当AFB1存在时,适配体对其进行识别结合,引起电极表面电化学传质电阻增加,随着AFB1浓度的增大,阻抗值也随之增加,并根据阻抗值的变化实现对AFB1的定量检测。结果 在最佳的实验条件下,该传感器对AFB1检测的线性范围为10-4-10 ng/mL,检出限为0.19 pg/mL,对玉米样品的回收率为96-112%。结论 本研究建立的电化学适配体传感器可以实现对AFB1的定量检测,且具有良好的特异性和重现性,为准确、快速检测食品中的AFB1提供思路。     

食品中四环素类残留的酶联免疫检测试剂盒的研制

目的：基于定量检测动物源性食品中四环素类抗生素的残留量,开发研制四环素类抗生素竞争酶联免疫(ELISA)检测试剂盒。方法：采用杂交瘤技术,筛选并克隆稳定分泌抗四环素(CEL)的杂交瘤细胞株,利用免疫BALB/c 小白鼠制备抗四环素单克隆抗体。结果：logit/log 拟合标准曲线为y= － 2.3x ＋ 2.79,相关系数r=0.9971,线性检测范围为0.05～4.05ng/mL,半数抑制剂量(IC50)为0.293ng/mL,灵敏度为0.05ng/mL,检测限为3～5ng/mL;组织、牛奶、蜂蜜的添加回收率分别为(90 ± 10)%、(85 ± 10)%、(90 ± 10)%;平均批内和批间变异系数均小于15%;四环素与金霉素等同类抗生素的交叉反应率大于60%,与其他类抗生素无交叉反应;此试剂盒在4℃可保存180d 以上。结论：建立的试剂盒是符合技术指标的要求,可用于动物源性食品中四环素类抗生素残留的定量检测。     

碱水解-SPE-LC-MS/MS法快速测定动物源食品中喹乙醇代谢物残留量

建立了一种快速准确定性定量检测动物源性食品中喹乙醇代谢物3-甲基-喹喔啉-2-羧酸(MQCA)残留量的液相色谱—串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。样品组织通过碱水解提取MQCA,阴离子固相萃取柱净化,LCMS/MS检测,内标法定量。结果显示,在0.5～50.0ng/mL浓度范围内,MQCA线性关系良好,相关系数R2为0.999 7。MQCA检出限为0.1μg/kg,方法在0.1,0.2,1.0μg/kg的添加水平下,回收率为95.6%～108.2%,相对标准偏差为3.4%～14.3%(n=6)。该检测方法准确、快速、灵敏度高,适用于动物源食品中MQCA残留量的检测和确证。