流式细胞仪快速检测酸奶中乳酸菌含量

目的建立一种使用流式细胞仪检测酸奶中乳酸菌含量的快速检测方法。方法吸取稀释后样品匀液100μL加入20 mL试管中,30 min内使用流式细胞仪检测。经过光电倍增器过滤和检测,荧光脉冲的密度和高度被记录下来并被换算为细菌的个数。结果与国标法相比,仪器检测时间约缩短了3 d,试验结果表明流式细胞仪检测结果与国标结果 R值均在1以下。结论流流式细胞仪法与国标平皿菌落计数法的结果具有很高的一致性。采用流式细胞仪对酸奶中的乳酸菌进行快速检测,培养时间为由48 h缩短至13 min,大大提高了检测速度,对于乳制品生产企业来说,意义重大。     

凝血因子VII高表达细胞的高通量筛选方法

针对哺乳动物细胞表达克隆的耗时较长的筛选过程,作者通过流式细胞仪对细胞进行快速筛选和纯度检测。利用流式细胞仪对电转细胞进行分选,利用点杂交和western blot方法筛选高表达克隆。流式细胞仪分选后的细胞,经点杂交和WB检测后获得的CHO-r FVII-1细胞,表达r FVII细胞的比例为99.9%,同时与传统筛选方法获得的CHO-r FVII克隆比较后发现,两株细胞具有相同的r FVII产量。作者基于流式细胞仪建立了快速筛选高表达重组药物蛋白克隆的筛选的高通量方法和纯度检测的方法,为其他在哺乳动物细胞中表达重组蛋白的筛选提供参考。     

流式细胞术在食源致病菌检测中应用的研究进展

流式细胞术是能够用来快速检测液相中悬浮粒子多种物理特性的一种现代分析方法.因其具有分析速度快和灵敏度高等优点,该方法正逐渐被应用于食源致病菌的检测.本文介绍了流式细胞术的两个主要应用平台(流式细胞仪和Luminex系统)的工作原理和分析流程,并着重对近年来将流式细胞术用在食源致病菌检测中的相关研究进行了调研和综述,从食源致病菌全菌分析以及细菌核酸检测等方面进行了剖析,对该方法在食源致病菌检测中应用的前景作了展望.     

流式细胞术快速检测生乳中细菌总数

研究了应用流式细胞术检测生乳中细菌总数的方法。实验对生乳采用酶法消化蛋白质颗粒、高速离心脱脂的方式来消除大颗粒物质对流式检测的影响。并对菌体进行热处理,使其能被荧光性染料碘化丙锭染色。经过前处理的乳液进入流式细胞仪分析、计数。结果表明,流式细胞术与平皿菌落计数法呈正的直线相关(P<0.01),相关程度为显著相关(r=0.9360)。该方法极大的缩短了检测时间,检出限为104/mL。     

应用流式细胞仪判断二次胶黏物

在纸浆悬浮液中分别加入3种阳离子定着剂A159、A160和A169,并分别采用浊度法和流式细胞仪测定了纸浆悬浮液中溶解和胶体物质(DCS)的含量。结果表明,在3种定着效果完全不同的阳离子定着剂作用下,通过浊度计测定,滤液的浊度与处理前相比都有大幅度的下降,但3种定着剂的作用效果无显著差异。而通过流式细胞仪测定,良好定着剂处理后,DCS的数量显著减少,但DCS的颗粒大小未发生变化;较差定着剂处理后,DCS的数量虽然也有大幅度的减少,但DCS颗粒却变大,胶体系统失稳并形成了絮凝沉淀。因此,定着剂对胶体系统的处理效果,可通过流式细胞仪的检测较好地表征出来。     

使用流式细胞术探讨无机吸附剂与木材抽出物间的反应

利用流式细胞术探讨了机械浆过程水中木材抽出物胶体粒子与不同吸附剂间的反应,进而衡量无机吸附剂如膨润土和滑石粉控制因木材抽出物和二次胶黏物引起的沉积物问题。通过流式细胞仪获得的二维散点图既可以观察到一些无机吸附剂如膨润土是疏水性较差的小颗粒,又可以获知富含抽出物的过程白水中逐渐加入无机吸附剂,颗粒群会从吸附剂和疏水性胶体粒子中分离出来。利用新形成的颗粒群(颗粒的数量和位置)可以衡量无机吸附剂与木材抽出物胶体粒子的反应。实验结果显示,除了吸附流式细胞仪能够检测到的大颗粒外,有些吸附剂可能会吸附流式细胞仪无法检测到的小颗粒进行作用;添加无机吸附剂不仅改变了抽出物胶体粒子的数量,还降低了其疏水性,由此可知,无机吸附剂能改变胶体粒子的黏性及沉积趋势。实验结果还表明,抽出物的浓度变化与疏水性之间具有相关性;过程白水中甘油酸含量越低、脂肪酸含量越高,白水中胶体粒子疏水性越差。     

流式细胞术在乳品微生物检测中的应用

阐述了流式细胞仪的工作原理、结构及流式细胞术在乳品微生物检测中的方法和应用，并展望了未来的研究方向。     

流式细胞术快速检测直投式发酵剂菌体活力

利用荧光染料标记直投式发酵剂菌体细胞并结合流式细胞术快速检测和分析菌体细胞的活力以及生存状态,对科学地评价各种微生物发酵剂的品质具有现实意义。研究选用保加利亚乳杆菌（Lactobacillus bulgaricus）和嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）两种直投式发酵剂以及制备的新鲜菌体细胞和热处理菌体细胞作为分析检测对象,利用流式细胞术结合羧基荧光素双乙酸酯（5-（6）-carboxyfluoresceindiacetate,5（6）-cFDA）和碘化丙啶（两种荧光染料检测了这些菌体的细胞活力。研究结果表明,5（6）-cFDA和PI双染色方法适合检测L. bulgaricus直投式发酵剂中菌体的存活力,该发酵剂中菌体存活率仅为4.7%,活力较低;而利用5（6）-cFDA单染色方法检测S. thermophilus直投式发酵剂中菌体存活力的效果较好,其菌体存活力接近于90%,活力较强;同时,发酵活力验证也得到了相同的结果;另外,研究证实了PI不能很好地区分S. thermophilus的死活细胞。因此,流式细胞术可作为直投式发酵剂生产行业快速检测评价产品质量的可靠方法。     

流式细胞仪检测微细胶黏物中尼罗红染料选择性吸附的研究

采用尼罗红(Nile Red)染料分别对旧报纸(ONP)浆和旧瓦楞箱纸板(OCC)浆的白水、苯-醇抽提前后漂白硫酸盐针叶木浆(漂白浆)的白水、纤维素酶处理前后的漂白浆白水进行染色,随后用流式细胞仪检测分析。结果表明,Nile Red染料可吸附废纸浆白水中疏水性物质,在检测过程中激发荧光产生标记。但用自来水(模拟造纸用水)也可被激发荧光,表明废纸浆中可被检测的颗粒不全是微细胶黏物;使用苯-醇抽提漂白浆以排除抽出物的干扰,抽提后其白水中颗粒浓度为269个/μL,颗粒平均粒径为3. 24μm,与抽提前相比无明显变化,表明不含抽出物漂白浆的白水中仍存在可被Nile Red染料吸附的物质;纤维素酶处理后白水中颗粒浓度从246个/μL减少到61个/μL,颗粒平均粒径从3. 19μm减少为2. 98μm,细小纤维的降解使白水中能够被染料吸附的颗粒减少,表明漂白浆白水中细小纤维可被Nile Red染料吸附并影响检测结果。最后确定流式细胞仪检测废纸浆颗粒浓度结果校正系数为85%。     

流式细胞术检测单增李斯特菌与酿酒酵母

为探讨流式细胞术对单增李斯特菌和酿酒酵母的活菌与热灭活菌的检出效果,本文采用荧光染色试剂SYTO-9和碘化乙锭(PI)对单增李斯特菌和酿酒酵母的活菌与热灭活菌的细胞悬液进行染色,采用流式细胞仪同时测量红色荧光与绿色荧光从而得出细胞悬液中的细菌和酵母的含量。结果表明经核酸荧光染料染色后,再结合流式细胞术对细菌与酵母菌进行检测,步骤简单、耗时短。该法不仅简化了测量步骤且分辨率高,对单增李斯特菌和酿酒酵母均具有良好的检出结果,能分辨同一体系中同一菌种的活细胞与热灭活细胞和同一体系中的细菌与酵母活细胞;该法检出限低,将单增李斯特菌稀释后,最低检出限可达1.2×104 cells/mL,将酿酒酵母稀释后,最低检出限可达6×103 cells/mL,因此能大大缩短增菌时间或者避免繁复的增菌步骤。