玉米低聚肽中抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定

为了考察玉米低聚肽中抗氧化肽的活性和结构,以玉米黄粉为原料,采用两步酶解法制备出玉米低聚肽,在对其基础理化成分进行分析的基础上,测定了其总抗氧化活性。结果表明,玉米低聚肽中总蛋白质含量为92.15%±5.26%,酸溶蛋白质含量为87.57%±5.98%,脂肪含量为0.06%±0.01%,灰分含量为3.12%±0.38%,水分含量为3.54%±0.29%。玉米低聚肽的总抗氧化能力为0.48±0.01 mmol/100 g。利用反相高效液相色谱对玉米低聚肽进行分离纯化,收集到12个主要的组分峰,利用质谱仪测定肽序列,鉴定出的12个肽段中,有4个肽段YGPQ、LSPY、AYPQ和AYLQQQ的总抗氧化能力比玉米低聚肽强,其含量分别为2.64±0.12, 2.51±0.19, 1.71±0.12和1.70±0.15mmol/100 g。     

深海鲑鱼皮来源ACE抑制肽的分离及鉴定

为了考察海洋胶原低聚肽中ACE抑制肽的活性和结构,本文以深海鲑鱼皮为原料,采用两步酶解法制备出海洋胶原低聚肽,在对其分子量分布进行分析的基础上,测定了其血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性。结果表明,海洋胶原低聚肽中分子量小于1000 u的组分高达90.79%,主要分布在132~576 u范围内,其ACE抑制活性的IC50为1.18±0.12 mg/m L。然后利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对海洋胶原低聚肽进行分离纯化,收集11个组分峰,对其ACE抑制活性进行了测定。结果表明,有7个组分的ACE抑制活性比海洋胶原低聚肽高。最后利用Q-TOF质谱仪对收集的11个组分进行了结构鉴定,并对鉴定出的15个肽段进行了ACE抑制活性测定。结果表明,15个肽段均有一定的ACE抑制活性,其中Ala-Pro(AP)、Val-Arg(VR)、Gly-Arg(GR)的ACE抑制率比海洋胶原低聚肽高,IC50值分别为0.07±0.01 mg/m L、0.35±0.03 mg/m L、0.92±0.85 mg/m L,活性大约是海洋胶原低聚肽的16.86、3.37、1.28倍,是具有较高ACE抑制活性的肽段。     

小麦低聚肽中抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定

为了考察小麦低聚肽中抗氧化肽的活性和结构,试验以谷朊粉为原料,采用两步酶解法制备出小麦低聚肽,在对其基础理化成分进行分析的基础上,测定了其总抗氧化活性。结果表明,小麦低聚肽中总蛋白质含量为98.32%±7.25%,酸溶蛋白质含量为93.71%±7.10%,脂肪含量为0.05%±0.01%、灰分含量为4.35%±0.46%、水分含量为4.28%±0.33%。小麦低聚肽的总抗氧化能力为2.3±0.1 mmol/100 g。然后利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对小麦低聚肽进行分离纯化,收集6个主要的组分峰,利用Q-TOF质谱仪测定肽序列,鉴定出的15个肽段中,有3个肽段PY、LY和APSY的总抗氧化能力比小麦低聚肽强,分别为3.0±0.2,2.7±0.2和2.4±0.1 mmol/100 g。     

食源性低聚肽的血管紧张素转化酶(ACE)抑制作用

在对海洋胶原低聚肽、乌鸡低聚肽、玉米低聚肽、小麦低聚肽、大豆低聚肽的基础理化成分和分子量分布进行分析的基础上,对其ACE抑制作用进行了考察。组成分析显示:5种食源性低聚肽中蛋白质含量很高,均达到了85%以上;分子量大多为1000 u以下(均在85%以上),主要分布在132~576 u范围内。ACE抑制作用实验结果显示:这5种食源性低聚肽的ACE抑制活性均呈显著的量效关系,半抑制浓度IC_(50)值在0.53-2.76 mg/mL之间,其中玉米低聚肽的ACE抑制作用最强,乌鸡低聚肽的ACE抑制作用最弱。研究明确了食源性低聚肽的ACE抑制作用,为其作为降血压保健食品的开发利用提供了一定的理论支持。     

中试规模酶解制备的大豆低聚肽中抗氧化肽和ACE抑制肽的分离和鉴定（英文）

本研究开发了一种通过中试规模制备大豆低聚肽的方法,制备出的大豆低聚肽具有较高的蛋白含量(91.45%)和较低的分子量(84.37%的分子量小于1000 u)。测定了大豆低聚肽的抗氧化和血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性,然后利用反相高效液相色谱对其进行分离纯化,收集六个主要的液相组分,分别命名为组分1~6,利用质谱仪对这些组分进行肽段结构鉴定。共鉴定出41个肽段结构,选择15个肽段进行抗氧化和ACE抑制活性评价。结果表明,大豆低聚肽中有两个新型抗氧化肽段和四个ACE抑制肽段。抗氧化肽段分别为:Tyr-Glu,8.61±0.42 mmol Trolox等同物/g样品;Asp-Tyr-Arg,6.53±0.34 mmol Trolox等同物/g样品;ACE抑制肽段分别为:Leu-Val-Arg,IC50=51.75μM;Leu-Tyr,IC50=305.76μM;Asp-Tyr-Arg,IC50=1082.95μM;Asp-Phe,IC50=1106.04μM。这些肽段大多数是从大豆中新发现的抗氧化肽段和ACE抑制肽段。大豆低聚肽和这些活性肽段可作为抗氧化或降血压物质用于食品添加剂、营养物及医药制品中。     

玉米低聚肽的体外抗氧化作用

在对玉米低聚肽的蛋白质含量、氨基酸组成和分子质量分布进行分析的基础上,从DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基清除能力以及还原能力4个方面对玉米低聚肽的体外抗氧化活性进行考察。组成分析显示：总蛋白质含量为89.28%,酸溶蛋白质占总蛋白质含量的94.31%;氨基酸组成独特,富含抗氧化性氨基酸,其中亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸含量较高;相对分子质量小于1000的组分高达93.05%,主要分布在132～576范围内。体外抗氧化实验结果显示：玉米低聚肽对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的半抑制浓度(IC50值)分别为：1.9、5.4mg/mL和14.9mg/mL,质量浓度为5.0mg/mL时的还原能力与0.02mg/mL的抗坏血酸相当,并且抗氧化能力与其质量浓度呈现剂量关系。     

中试规模酶解制备的大豆低聚肽中抗氧化肽和ACE抑制肽的分离和鉴定

本研究开发了一种通过中试规模制备大豆低聚肽的方法,制备出的大豆低聚肽具有较高的蛋白含量（91.45%）和较低的分子量（84.37%的分子量小于1000 u）。测定了大豆低聚肽的抗氧化和血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性,然后利用反相高效液相色谱对其进行分离纯化,收集六个主要的液相组分,分别命名为组分1~6,利用质谱仪对这些组分进行肽段结构鉴定。共鉴定出41个肽段结构,选择15个肽段进行抗氧化和ACE抑制活性评价。结果表明,大豆低聚肽中有两个新型抗氧化肽段和四个ACE抑制肽段。抗氧化肽段分别为：Tyr-Glu,8.61±0.42 mmol Trolox等同物/g样品;Asp-Tyr-Arg,6.53±0.34 mmol Trolox等同物/g样品;ACE抑制肽段分别为：Leu-Val-Arg,IC50=51.75 μM;Leu-Tyr,IC50=305.76 μM;Asp-Tyr-Arg,IC50=1082.95 μM;Asp-Phe,IC50=1106.04 μM。这些肽段大多数是从大豆中新发现的抗氧化肽段和ACE抑制肽段。大豆低聚肽和这些活性肽段可作为抗氧化或降血压物质用于食品添加剂、营养物及医药制品中。     

海洋蛋白低聚肽的抗氧化与降血压作用

以三文鱼肉为原料,通过复合酶解的方法获得海洋蛋白低聚肽,对其理化性质、氨基酸组成、分子质量分布等方面进行分析;从羟基自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除活性及还原能力4个方面对其抗氧化活性进行分析;从对血管紧张素转化酶（ACE）的抑制作用方面,探究其降血压活性。结果显示：海洋蛋白低聚肽分子质量大多在1 000 u以下（占86.56%）,主要是140～500 u之间的短肽含量最高（占51.91%）。海洋蛋白低聚肽具有较强的体外抗氧化能力,清除羟基自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基的半抑制浓度（IC50值）分别约为2.75,4.7 mg/mL和18.2 mg/mL。海洋蛋白低聚肽质量浓度为20 mg/mL时的还原能力与0.04 mg/mL的抗坏血酸VC相当。海洋蛋白低聚肽显示出较高的ACE抑制能力,IC50值约为0.75 mg/mL。本试验结果表明：海洋蛋白低聚肽具有良好的抗氧化和降血压活性,为其营养健康食品的开发提供了一定的试验依据。     

林蛙低聚肽的体外抗氧化与ACE抑制作用

以林蛙为原材料,通过酶解获得林蛙低聚肽,测定了其相对分子质量分布,又从DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基和还原能力四个方面对其抗氧化作用较全面的进行了评价;另外从林蛙低聚肽对血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)的抑制作用对其降血压活性进行了分析;结果显示:林蛙低聚肽的相对分子质量分布大多为1000Da以下(高达85%),其中140～500Da之间的小肽最多(约占52%)。三种自由基半抑制浓度(IC50)分别为:2.3mg/m L、3mg/m L和15mg/m L;浓度为5mg/m L时还原能力与VC浓度0.03mg/m L相当;另外其ACE抑制活性实验中IC50值为0.5mg/m L,林蛙低聚肽的抗氧化能力和ACE抑制活性与浓度都呈现正相关。证明了林蛙低聚肽具有良好的抗氧化作用和ACE抑制能力,为下一阶段相关功能肽段的筛选、纯化奠定良好的基础,为相关抗氧化和降血压等保健类食品的开发利用提供一定的理论依据。     

微生物发酵法制备大豆ACE抑制肽菌种的筛选

以大豆分离蛋白为底物,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率和肽含量为检测指标,选择5株乳酸菌、3株霉菌和1株枯草芽孢杆菌为出发菌种,通过微生物发酵筛选出具有高ACE抑制活性的发酵菌株。结果表明:乳酸菌中具有强ACE抑制活性的菌株为保加利亚乳杆菌,ACE抑制率和肽含量分别为57.93%和3.27mg/mL;霉菌中具有强ACE抑制活性的菌株为米曲霉,ACE抑制率和肽含量分别为41.23%和2.17mg/mL;枯草芽孢杆菌ACE抑制率和肽含量分别为45.02%和2.25mg/mL。综合比较9种菌株的发酵特性,选用保加利亚乳杆菌作为制备大豆抗高血压活性肽优良菌株。     

酶膜耦合制备高活性ACE抑制玉米肽及结构研究

为了充分提高酶解效率及获得高活性的ACE抑制玉米肽,采用酶解与膜分离耦合技术连续化制备高活性ACE抑制玉米肽,考察了该制备过程中产品的质量和稳定性,比较了不同分子质量级分玉米肽的ACE抑制活性,以及采用HPLC-MS/MS对几种玉米肽的结构进行了解析。结果显示:在连续制备5 h内,所得产品的ACE抑制活性及肽含量较稳定,ACE抑制率在84%左右(最高达到89.82%),其中Mw<3 ku级分玉米肽其ACE抑制活性最高(IC50=0.29 mg/mL);解析出了3种玉米肽的结构,其氨基酸序列分别为QQLLPF、QQFLPF和QFLPF。试验表明:连续化酶膜耦合技术制备的ACE抑制玉米肽产品质量高且稳定,其中Mw<3 ku的玉米肽级分的ACE抑制活性最高;解析出的3种玉米肽均具有ACE抑制肽的结构特点。     

食源性低聚肽的成分分析及持钙能力研究

采用两步酶解法制备出海洋胶原肽、海洋骨原肽、海洋蛋白肽、乳清肽、卵白肽、玉米肽、大豆肽7种食源性低聚肽,对其基础理化成分、氨基酸组成和分子量分布进行分析,然后采用火焰原子吸收分光光度法测定低聚肽的持钙能力。成分分析显示:7种低聚肽的蛋白质含量很高,均在80%以上;所有低聚肽均具各自的氨基酸构成特点,不同低聚肽氨基酸含量不同;低聚肽是小分子肽的混合物,以分子量在132～576u之间的肽为主。持钙能力实验结果显示:大豆肽的持钙效果最好,在6mg/mL和10mg/mL的添加浓度下,钙损失率分别为8.55%和5.49%。其它肽在6mg/mL和10mg/mL的添加浓度下,钙损失率均在35.95%至60.20%之间,其中乳清肽持钙效果相对较好。通过评价不同低聚肽的持钙能力,可用于筛选食源性促钙吸收肽,为进一步动物试验或临床试验提供促钙吸收活性依据。     

乳清低聚肽的制备及其抗氧化活性

利用两步酶解法制备出乳清低聚肽,对其基础理化成分、氨基酸组成和分子量分布进行了分析,从羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基清除能力以及还原能力四个方面评价其抗氧化活性。组成分析结果表明:总蛋白质含量为86.83%,氨基酸组成丰富,富含抗氧化性氨基酸,其中亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸含量较高;分子量小于1000u的组分高达85.78%,132~576u范围内组分占59.55%。抗氧化实验结果显示:乳清低聚肽具有较强的抗氧化活性,并且呈量效关系,对羟基自由基和DPPH自由基的半抑制浓度(IC50值)分别为:2.3、4.2mg/mL,浓度为2.5mg/mL时的还原能力与0.012mg/mL的抗坏血酸相当。     

腐乳中低聚肽氨基酸组成及抗氧化活性研究

采用水溶法制备腐乳低聚肽,对其进行理化及氨基酸组成分析,通过与抗坏血酸对比·OH、DPPH·和O_2~-·的清除能力,评价腐乳低聚肽抗氧化活性。结果表明:腐乳低聚肽总蛋白质含量为85.47%,氨基酸组成丰富,富含抗氧化性氨基酸,必需氨基酸含量为34.43%,具有抗氧化活性的氨基酸总量为30.5%;抗氧化试验结果显示,腐乳低聚肽具有一定的自由基清除能力,对·OH、DPPH·和O_2~-·的半抑制浓度IC50值分别为5.8,6.1,9.7mg/mL。因此,腐乳中低聚肽具有较强的抗氧化活性。     

高纯度大豆和花生低聚肽的体外抗氧化活性

为了比较高纯度大豆低聚肽和花生低聚肽的抗氧化活性,在分析蛋白质含量、氨基酸组成和分子量分布等理化性质的基础上测定清除自由基能力和还原力.结果表明:大豆低聚肽和花生低聚肽的蛋白质含量高达95%,谷氨酸、天门冬氨酸和亮氨酸的总量均在47%以上,相对分子质量分布在423.57和364.92;大豆低聚肽使0.2 mmol/L的DPPH自由基减少50%时的浓度SC50是52.85 mg/mL,约为抗坏血酸的1/2000,而花生低聚肽在上述条件下未达到50%的DPPH自由基清除率;在2.73～27.3 mg/mL浓度范围内,大豆低聚肽的还原能力约为花生低聚肽的1.51～1.83倍.大豆低聚肽的抗氧化效果优于花生低聚肽.     

乌鸡低聚肽铁的分离纯化及结构鉴定

为了考察乌鸡低聚肽铁中肽段的结构,以乌鸡为原料,以氯化亚铁为铁源制备乌鸡低聚肽铁,对其总蛋白质质量分数、螯合率、得率进行测定,结果表明乌鸡低聚肽铁总蛋白质质量分数为(56.79±0.18)%,螯合率为(83.53±0.15)%,得率为(40.86±0.14)%。然后利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对其进行分离纯化,收集4个组分峰,利用四极杆飞行时间串联质谱仪(QTOF质谱仪)测定肽序列,分析出1个肽段,氨基酸序列为Thr-Ser-Gly-Met-Pro,相对分子质量为491.56。     

腰果蛋白ACE抑制肽的分离纯化研究

以海南腰果为原料,通过碱溶酸沉法制备腰果蛋白,对其氨基酸的组成进行了分析,并通过酶解法制备腰果蛋白多肽,依次经过透析、柱层析分离纯化来研究腰果蛋白多肽的血管紧张素酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE)抑制活性。实验结果表明,腰果蛋白中富含必需氨基酸与非必需氨基酸,是一种优质蛋白资源,腰果蛋白中疏水性氨基酸含量为20.4g/100g,有助于其ACE抑制活性。利用碱性蛋白酶进行酶解后制得的酶解液(1mg/mL)ACE抑制率为71.24%±5.96%,经过透析后所得小分子组分[(0～3500)u]的ACE抑制率(1 mg/mL)为85.01%±1.44%,经葡聚糖凝胶(Sephadex G-25)分离纯化后,得到6种组分,其中ACE抑制活性最高的组分为P4,1 mg/mL P4的ACE抑制率为90.01%±0.16%[IC_(50)为(36.25±0.12)μg/m L],将P4进行反向高效液相色谱进一步分离纯化后,得到3个组分,其中P4-3的ACE抑制活性最高,1 mg/mL P4-3的ACE抑制率为91.04%±0.31%[IC_(50)为(2.12±0.067)μg/mL],表现出较高的ACE抑制活性,腰果蛋白ACE抑制肽有望应用于高血压的预防与功能食品的开发,对腰果中蛋白资源的开发利用有一定的实验意义。     

发酵豆酱中ACE抑制肽的制备及分离纯化

为了获得ACE抑制肽,利用微生物发酵法以大豆为原料制成中国传统豆酱,通过研磨、溶解、超滤后获得了ACE抑制活性最高的肽段区间3～10k,并依次利用DEAE琼脂糖微球a、Sephadex G-75凝胶对该组分进行分离纯化,最后纯化获得组分DGIII的ACE抑制活性最高,达到(98.3±1.24)%,IC50为0.08mg/mL,说明豆酱具有开发高抑制率ACE食品的潜力。     

玉米ACE抑制肽的制备工艺及中试生产

以玉米黄粉为原料,利用Alcalase酶、Protamex酶和Flavourzyme酶酶解制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽,研究酶解条件、酶解方式对玉米肽ACE抑制活性的影响。同时,在试验的基础上,对100 kg玉米黄粉酶解制备ACE抑制肽进行了中试生产。实验结果表明:单酶水解制备ACE抑制肽的最适酶为Protamex酶,在酶解150 min时水解产物的ACE抑制率为(90.98±0.54)%,水解产物的分子质量集中在10 405.22~300 Da。Flavourzyme酶和Protamex酶的分步水解可进一步提高玉米蛋白的酶解效率和玉米肽对ACE的抑制活性,在先用Flavourzyme酶水解2 h再加入Protamex酶继续水解3 h后,水解产物的ACE抑制率达到(99.35±3.55)%(IC50=0.764 mg/m L),水解产物的分子质量集中在8 439.49~185.2 Da。采用双酶分步水解方式水解100 kg玉米黄粉时,肽粉得率为27%,ACE抑制率为(56.70±0.86)%(1 mg/m L)。     

魔芋ACE抑制肽的分离纯化及活性检测

利用碱溶酸沉法从魔芋飞粉中提取魔芋蛋白,以魔芋蛋白为原料,利用碱性蛋白酶酶解制备魔芋ACE抑制肽粗品;其粗品通过超滤法除去大分子杂质,再经过Sephadex G-15柱层析分离,最后经过RP-HPLC纯化后得到纯度较高的魔芋ACE抑制肽,并且对超滤膜进行选择、Sephadex G-15柱层析分离进行条件优化;以马尿酸含量为指标,紫外分光光度法测其活性。实验结果表明:选择规格为1 kDa超滤膜;Sephadex G-15最佳分离条件为浓度为120 mg/mL、流速为0.8 mL/min、上样量为1.0 mL;经过RP-HPLC纯化后得到魔芋ACE抑制肽抑制率可达到92.85%。空白液中Hip含量为22.50 mg,反应液中Hip含量为9.22 mg,说明魔芋ACE抑制肽抑制活性较好。