酱香型白酒中酮类抗幽门螺杆菌脲酶活性

目的:评价酱香型白酒中的酮类化合物(Ketone Compounds, KCs)抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)感染人胃腺癌细胞(GES-1)导致的炎性及氧化损伤活性。方法:检测KCs对GES-1的细胞毒性及KCs抑制Hp的最小半数抑菌浓度(MIC50);分析KC-1对Hp脲酶活性的影响;RT-PCR分析KC-1对Hp脲酶基因簇(ureA、ureB、ureE、ureH、ureI和nixA)表达的影响;ELISA及流式检测KC-1对Hp诱导的GES-1细胞IL-8和ROS的影响。结果:浓度低于100μg/mL时,KCs对GES-1细胞无损伤;KC-1的MIC90(72 h)为100μg/mL;50μg/mL的KC-1可显著抑制Hp的脲酶活性;RT-PCR结果显示,KC-1可抑制Hp脲酶基因簇中的ureA、ureB、ureE、ureI和nixA的表达;KC-1可抑制Hp诱导的GES-1细胞IL-8分泌及ROS含量升高。结论:酱香型白酒中的酮类化合物可通过抑制Hp相关脲酶基因的表达从而抑制Hp脲酶活性,进而降低Hp的黏附和定植作用,最终抑制Hp对细胞的损伤。     

茯苓水提物对幽门螺杆菌的抑制作用和GES-1细胞增殖作用研究

本文从不同中药水提物[白术、茯苓、陈皮、山药、复合多糖（白术、茯苓、陈皮、山药的混合水提物）]中筛选具有良好抑制幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）活性以及能促进人胃粘膜上皮（Human gastric epithelial cell line,GES-1）细胞增殖的物质。对比不同水提物对Hp的抑菌活性,体外抑制脲酶的活性。结果显示,茯苓、复合多糖及白术水提物,具有一定程度的抑制Hp作用,在浓度为1000.00 μg/mL时对Hp的抑制率分别为93.29%、62.85%、47.14%。其中,以茯苓水提物的抑菌效果最显著。各种中药水提物都具有不同程度的抑制脲酶活性,茯苓水提物的效果最好（IC50=618.90 μg/mL）。茯苓水提物对Hp的抑制呈现一定程度剂量依赖效应。当其浓度达到15.62 μg/mL以上时,对Hp的抑制率达80%以上。以125.00 μg/mL的茯苓水提物作用24 h后,即可显著地提高胃粘膜上皮细胞（GES-1）的存活率至128.35%。因此,茯苓水提物可能通过抑制幽门螺杆菌增殖及其毒力因子脲酶的活性,同时促进GES-1细胞增殖来降低幽门螺杆菌感染胃部所引起的毒性作用。     

酱香型白酒中有机酸类成分抗幽门螺杆菌活性及机制研究

为了评价酱香型白酒中的有机酸类化合物(Organic acid compounds,OACs)抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)活性及潜在的机制,检测OACs抑制Hp的最小半数抑菌浓度(MIC50)及OACs抑制Hp对GES-1细胞损伤活性的影响;分析OAC-18对Hp脲酶活性的影响;RT-PCR分析OAC-18(2,3-二甲基2-戊烯酸)对Hp脲酶基因簇(ureA、ureB、ureE、ureH、ureI和nixA)、外膜蛋白基因(BabA)和毒力基因(CagA和VacA)转录的影响;western blotting检测对OAC-18对毒力蛋白(CagA和VacA)表达的影响;ELISA及流式检测OAC-18对Hp诱导的GES-1细胞IL-8、IL-1β、IL-6及ROS的影响。结果表明,大部分OACs可抑制Hp生长,其中OAC-18活性最佳,其MIC50(72 h)为119.3μg/mL;120μg/mL的OAC-18可显著抑制Hp的脲酶活性;RT-PCR结果显示,OAC-18可抑制Hp脲酶基因簇中的ureA、ureB、ureE、nixA及外膜蛋白基因(BabA)和毒力基因(CagA和VacA)的转录,抑制毒力蛋白(CagA和VacA)的表达;OAC-18可抑制Hp诱导的GES-1细胞IL-8、IL-1β、IL-6分泌及ROS含量升高。酱香型白酒中的有机酸类化合物对Hp有一定的抑制作用,可通过抑制Hp相关脲酶基因的表达从而抑制Hp脲酶活性;可通过降低Hp外膜蛋白基因(BabA)、毒力基因(CagA和VacA)转录及毒性蛋白(CagA和VacA)的表达减轻Hp对胃上皮细胞的损伤。     

姜黄素对幽门螺杆菌及其诱导人胃GES-1细胞损伤的影响

对姜黄素抑制幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）及其诱导人胃GES-1细胞损伤的影响进行研究。抑菌实验结果显示,姜黄素可明显抑制Hp生长,其最低抑制浓度为200 μmol/L。采用Berthelot显色法检测Hp脲酶活力的变化情况,发现姜黄素对其也有明显的抑制作用,半数抑制浓度为1.735 mmol/L。通过噻唑蓝实验分析姜黄素对人胃GES-1细胞和Hp感染人胃GES-1细胞的影响。结果显示,短时间内（12 h）较低浓度（68 μmol/L）姜黄素对人胃GES-1细胞增殖无明显影响,但姜黄素浓度的增加和作用时间的延长可使细胞存活率明显下降。经68 μmol/L姜黄素作用12 h后,损伤模型组细胞形态有一定程度的复原,细胞存活率略有升高,但不显著（P＞0.05）;高浓度（136、680 μmol/L）姜黄素会导致细胞存活率明显下降。因此,姜黄素对Hp生长和脲酶活力有明显的抑制作用,但不足以缓解Hp对人胃GES-1细胞的损伤作用。     

酱香型白酒醇类活性成分抗幽门螺杆菌损伤胃黏膜上皮细胞活性的研究

为研究酱香型白酒醇类活性成分(active alcohols,AAs)抑制幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)损伤胃黏膜上皮(GES-1)细胞活性及潜在的机制,检测了AAs抑制H.pylori的最小半数抑菌浓度(50%minimun inhibitory concentration,MIC 50)及苯乙醇(AA-29)抑制H.pylori损伤GES-1细胞活性;分析了AA-29对H.pylori脲酶活性的影响;通过RT-PCR分析了AA-29对H.pylori脲酶基因簇(ureA、ureB、ureE、ureH、ureI和nixA)、外膜蛋白基因(babA)和毒力基因(cagA和vacA)转录的影响;采用Western blotting检测了AA-29对cagA和vacA表达的影响;ELISA及流式检测AA-29对H.pylori诱导的GES-1细胞TNF-α、IL-1β、IL-6及细胞凋亡的影响。结果表明:AA-29活性最佳,可显著抑制H.pylori生长,其MIC 50(72 h)为105.2μg/mL;100μg/mL的AA-29可显著抑制H.pylori的脲酶活性;RT-PCR结果显示,AA-29可抑制H.pylori脲酶基因簇中的ureA、ureB、nixA及babA和cagA的转录及cagA的表达;AA-29可抑制H.pylori诱导的GES-1细胞TNF-α、IL-1β、IL-6分泌及细胞凋亡。酱香型白酒中的醇类化合物具有一定的抗H.pylori活性,其中AA-29可通过抑制H.pylori脲酶相关基因的表达并抑制H.pylori脲酶活性;AA-29可降低H.pylori babA、cagA转录及cagA的表达以减轻H.pylori对胃黏膜上皮细胞的损伤。     

姜黄素超分子包合物抑制HepG2肝癌细胞的增殖

对姜黄素超分子包合物抑制HepG2肝癌细胞增殖的作用进行研究。采用MTT法考察不同浓度的姜黄素超分子包合物(40～640μg/mL)处理HepG2细胞不同时间(24h、48h和72h)后对其细胞存活率的影响。然后,采用流式细胞术和测定Caspase 3/8/9酶活来探讨姜黄素超分子包合物抑制HepG2细胞增殖的作用机理。实验结果表明,随着姜黄素超分子包合物处理时间和浓度的增加,HepG2细胞的存活率呈现出逐渐下降的趋势,当处理时间为72h,姜黄素超分子包合物浓度为640μg/mL时,细胞的存活率达到最低为9.81%±1.00%。进一步的流式细胞术分析得知,HepG2细胞内的凋亡细胞数目随着姜黄素超分子包合物浓度的增加而增加,当细胞经640μg/mL姜黄素超分子包合物处理72h后,其细胞内凋亡细胞的数目(Sub-G1)达到最高为93.43%。通过对Caspase 3/8/9的酶活进行检测发现,Caspase 3/8/9的酶活也是随着姜黄素超分子包合物浓度的增加而增加,当640μg/mL姜黄素超分子包合物处理细胞72h后,Caspase 3/8/9的酶活达到最大。进一步地Western blot实验结果也表明,随着姜黄素超分子包合物浓度的增加,Caspase 3/8/9的蛋白表达水平呈升高趋势。上述实验结果表明,姜黄素超分子包合物是通过线粒体途径和死亡受体途径来诱导细胞发生凋亡从而抑制HepG2细胞增殖。     

山楂核各萃取组分对H2O2诱导氧化损伤细胞保护作用的比较及活性组分筛选

评价山楂核乙醇提取物及其各萃取组分对两种氧化损伤细胞的保护作用并筛选活性组分,为其开发利用提供数据支持。以H_2O_2诱导永生化的人角质形成(Ha Ca T)细胞和人胃黏膜上皮(GES-1)细胞为氧化损伤细胞模型,比较山楂核乙醇提取物(EE)及其各萃取组分对氧化损伤细胞存活率的影响,测定活性组分对氧化损伤细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的影响,并对活性组分大类成份进行分析。结果显示,EE及其乙酸乙酯萃取组分(EAF)和水萃取组分(WF)对H_2O_2诱导氧化损伤细胞均具有一定保护作用。其中,25μg/m L EAF可提高氧化损伤Ha Ca T细胞存活率21.23%,使细胞内SOD水平增加9.09%;25μg/m LWF可提高氧化损伤Ha Ca T和GES-1细胞存活率16.20%和23.61%,使细胞内SOD水平分别增加16.62%和17.38%,GSH-Px水平分别增加1.22倍和2.50%。大类成份分析表明,EAF主要含有糖(32.73%)、黄酮(15.70%)和木脂素(8.09%)等;WF主要含有糖(59.59%)和黄酮(1.14%)等。各组分中,WF对H_2O_2诱导氧化损伤Ha Ca T和GES-1细胞均具有保护作用,效果较好,其主要成份为糖,作用机制可能与调节细胞内抗氧化物酶水平有关,具有较好开发应用价值。     

谷糠多酚对酒精性胃黏膜损伤的保护作用

目的：初步阐明谷糠多酚对酒精性胃黏膜损伤的保护作用以及具体分子机制,为谷糠多酚在饮酒人群胃黏膜损伤营养干预方面的应用提供科学依据。方法：雄性Wistar大鼠连续3 周每天灌胃50 mg/kg mb谷糠多酚,干预结束后通过灌胃体积分数75%乙醇溶液建立急性酒精性胃黏膜损伤模型;利用不同剂量（1～15 μg/mL）谷糠多酚对人胃黏膜上皮细胞（GES-1）处理24 h,继而通过1 000 mmol/L酒精继续作用12 h建立酒精性GES-1细胞损伤及干预模型;通过解剖观察大鼠胃组织形态学及病理结构,评价谷糠多酚对大鼠胃黏膜组织的保护作用;结合细胞形态变化及存活情况评价谷糠多酚对GES-1细胞的保护作用;通过测定氧化应激和细胞凋亡相关指标,评价谷糠多酚对急性酒精性胃黏膜损伤大鼠及GES-1细胞的抗氧化和抑制凋亡能力的影响。结果：谷糠多酚可以有效预防酒精引起的大鼠胃黏膜及GES-1细胞损伤,极显著缓解酒精引起的GES-1细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平升高（P＜0.01）;同时极显著缓解大鼠胃黏膜组织和GES-1细胞中丙二醛（methane dicarboxylic aldehyde,MDA）水平升高（P＜0.01）,提高超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力,明显抑制酒精引起的细胞凋亡。结论：谷糠多酚能够通过缓解酒精引起的胃黏膜上皮细胞氧化损伤从而保护胃黏膜。     

对高糖损伤HBZY-1细胞具有保护作用的天然植物提取物的筛选及其抗炎活性研究

研究从五种药食同源植物及丹参的提取物中筛选出对高糖诱导HBZY-1细胞具有抗炎作用的活性物质。利用MTT法检测细胞增殖活性进行初步筛选,采用微板法检测LDH、TNOS和iNOS含量,硝酸还原酶法检测NO含量,ELISA法检测检测ET-1含量,苏木素伊红(HE)染色细胞并观察细胞形态学差异变化。结果表明:枸杞多糖、桑叶黄酮及银杏叶黄酮的提取物对高糖损伤的HBZY-1细胞增殖保护作用均呈现浓度依赖型,最佳作用浓度分别为400μg/mL、350μg/mL及125μg/mL。以上三种提取物均能抑制细胞分泌LDH、ET-1、iNOS,促进NO表达,且银杏叶黄酮提取物组LDH生成量为717.86 U/g prot,接近阳性对照,NO生成量为16.14μmol/L,优于阳性对照,桑叶黄酮提取物组ET-1生成量为26.42 pg/mL,优于阳性对照,皆能保护并维持良好的细胞形态。本试验得到的三种活性物质对高糖诱导HBZY-1细胞损伤具有抗炎作用,可以作为改善肾脏疾病患者健康状况的保健类食品原料。     

右旋龙脑促进姜黄素抑制A375黑色素瘤细胞增殖的研究

本文运用MTT实验考察姜黄素和右旋龙脑分别在单独作用和联合作用时对黑色素瘤细胞A375存活率的影响,并进一步运用流式细胞术分析右旋龙脑联合姜黄素抑制黑色素瘤细胞A375增殖的原因。结果表明,姜黄素单独作用对A375细胞增殖有显著的抑制效应,而右旋龙脑单独作用对A375细胞增殖没有表现出明显的抑制作用。当用40μg/m L右旋龙脑预处理3 h,再与20μmol/L姜黄素联合作用A375细胞72 h后,其细胞存活率达到最低为10.93%,这比20μmol/L姜黄素单独处理时细胞的存活率降低了18.27%。进一步的流式结果表明,相比单独姜黄素处理,右旋龙脑与姜黄素联合处理后能明显提高Sub G1峰和G2/M比例,右旋龙脑(40μg/m L)与姜黄素(20μmol/L)联合作用黑色素瘤细胞A375后,其Sub G1和G2/M的含量分别从对照组的2.0%和16.4%升高到16.8%和40.1%,表明右旋龙脑与姜黄素主要是通过诱导细胞凋亡和G2/M阻滞来抑制黑色素瘤细胞A375增殖。