葡萄籽原花青素对顺铂诱导人胚肾细胞凋亡的拮抗作用

目的： 探讨葡萄籽原花青素（ g r a p e s e e d p r o a n t h o c y a n i d i n , G S P E ） 对顺铂（cis-diamminedichloroplatinum,CDDP）诱导人胚肾细胞HEK293凋亡及相关凋亡基因的影响,并探讨可能的机制。方法：体外培养正常HEK293细胞,噻唑蓝法测定GSPE、CDDP分别对HEK293细胞生长的影响以及GSPE对CDDP诱导HEK293细胞毒性的保护作用,流式细胞仪测定GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡率的变化,Western blotting测定GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：GSPE对CDDP所致HEK293细胞毒性具有拮抗作用,可减轻CDDP所致HEK293细胞凋亡,减弱Bax表达、增强Bcl-2表达。结论：GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡具有拮抗作用,其机制可能与GSPE降低促凋亡基因Bax,升高抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

鱼油对顺铂损伤HEK293细胞及A549细胞的影响

目的:探讨鱼油对顺铂（cis-dichlorodiamineplatinum (Ⅱ)，CDDP）抗A549人肺腺癌细胞活性的影响及对CDDP损伤HEK293细胞的保护作用。方法:体外培养A549和HEK293细胞，将细胞分为对照组、CDDP组、鱼油组、鱼油+CDDP组；分别用不同浓度的鱼油对细胞进行预处理，同时建立CDDP组、鱼油+CDDP组CDDP 损伤模型，CCK-8法检测细胞活力，试剂盒测定HEK293细胞中丙二醛(MDA)含量，二还原型谷胱甘肽(GSH)含量，超氧化物歧化酶(SOD)的活力等指标。结果:4~16 mg/L浓度的鱼油能够显著抑制CDDP造成的人胚肾HEK293细胞毒性（P<0.05），其中4 mg/L浓度的鱼油保护效果最佳，且此浓度的鱼油能够显著抑制CDDP（20 mg/L）引起的GSH含量降低以及MDA含量升高（P<0.05）。当鱼油浓度≥32 mg/L时显著增强了CDDP对A549细胞的抑制效果（P<0.05）。结论:一定浓度范围内，鱼油对CDDP致人胚肾细胞HEK293损伤具有一定的保护作用。低浓度鱼油对CDDP 所致A549细胞的抑制作用没有明显的影响，高浓度的鱼油增强了CDDP 的抗癌效果。     

葡萄籽原花青素对顺铂所致人胚肾细胞毒性的拮抗作用

目的：体外研究葡萄籽原花青素提取物(GSPE)对顺铂(CDDP)所致人胚肾细胞毒性的保护作用,并探讨其可能的机理。方法：体外培养人胚肾细胞(HEK293),四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法观察葡萄籽原花青素、CDDP对HEK293细胞生长的影响及葡萄籽原花青素对CDDP所致细胞毒性的保护作用,硫代巴比妥酸法观察葡萄籽原花青素对CDDP引起脂质过氧化的影响,利用二硫代二硝基苯甲酸与巯基化合物反应,比色定量测定吸光度以观察葡萄籽原花青素对CDDP诱导的谷胱甘肽耗竭的影响。结果：低浓度的GSPE可显著增强HEK293的细胞活性,适宜浓度的GSPE可显著抑制CDDP对HEK293细胞的毒性作用,GSPE可减缓CDDP引起的谷胱甘肽的耗竭。结论：GSPE能抑制CDDP诱发HEK293细胞的细胞毒性,其机理可能与GSPE强抗氧化功能和猝灭自由基的功能有关。     

蛋清源活性肽对过氧化氢诱导的HEK293细胞抗氧化酶活力及白细胞介素8分泌的影响

食源性抗氧化肽由于抗氧化能力较好、安全性高,逐渐成为多肽研究领域的热点。本实验以H2O2诱导HEK293细胞损伤建立氧化损伤模型,研究了蛋清源活性肽WNWAD（Trp-Asn-Trp-Ala-Asp）及其结构改造肽WNW（Trp-Asn-Trp）、WAD（Trp-Ala-Asp）、WN（Trp-Asn）对H2O2诱导损伤的HEK293细胞的存活率、活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平、抗氧化酶活力及细胞因子白介素8（interleukin-8,IL-8）分泌的影响。结果表明：蛋清源活性肽对HEK293细胞存活率的影响极显著（P＜0.01）,不同浓度蛋清源活性肽WNWAD、WNW、WAD、WN作用于氧化损伤的HEK293细胞后,其存活率明显提高,呈现浓度依赖性;其中1.0 μmol/L蛋清源活性肽WNWAD、WNW、WAD、WN处理细胞后,存活率从损伤组的（48.0±2.4）%分别提高到（99.7±1.8）%、（69.4±3.2）%、（78.9±5.1）%、（72.1±3.6）%,与损伤组有极显著性差异（P＜0.01）;H2O2诱导HEK293细胞内ROS的产生,经过活性肽预处理后细胞内ROS的水平极显著降低（P＜0.01）;随着蛋清源活性肽WNWAD、WNW、WAD、WN浓度的升高,总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶3 种酶的活力均有所提高,呈现浓度依赖型关系。最后利用酶联免疫吸附测定试剂盒测定了HEK293细胞中IL-8的分泌量,经过H2O2处理的HEK293细胞上清液中IL-8含量极显著升高（P＜0.01）,加入WNWAD、WNW、WN、WAD后,细胞中的IL-8含量均有所降低,其中WNWAD和WN影响显著（P＜0.05）。以上结果显示蛋清源活性肽对降低HEK293细胞氧化应激水平和提高细胞抗氧化能力有积极的影响。     

维生素C联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、侵袭与凋亡的影响

目的探讨维生素C（VC）联合顺铂（DDP）对肺癌A549细胞增殖、侵袭与凋亡的影响。方法体外培养肺癌A549细胞,给予不同浓度（0.025、0.25、2.5 m M）VC联合5.0 mg·L^-1 DDP处理,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测A549细胞的增殖情况,采用Transwell实验检测A549细胞的侵袭能力,采用碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测A549细胞的凋亡率。结果 VC与DDP联合用药可显著抑制A549细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性,经VC与DDP联合处理的A549细胞,发生侵袭的细胞数目显著减少,细胞凋亡率显著升高。结论 VC与DDP联合用药可抑制肺癌A549细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

枸杞多糖对顺铂诱导人胚肾细胞凋亡的影响

目的：研究枸杞多糖(LBP)对顺铂(CDDP)所致人胚肾细胞(HEK293)凋亡的影响,并探讨其可能机理。方法：体外培养HEK293,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法观察LBP对CDDP诱导HEK293细胞生长的影响,流式细胞仪检测LBP对CDDP诱导HEK293细胞凋亡率的变化：Western blotting检测LBP对CDDP诱导HEK293细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：LBP能够拮抗CDDP诱发的细胞毒性,并且随着质量浓度的不同而产生变化。 流式细胞仪检测表明随着LBP质量浓度的增加,细胞凋亡率随之减少;Western blotting表明,加入LBP后能够使Bax基因的表达减少而Bcl-2基因的表达增加。结论：LBP对CDDP诱导人胚肾细胞凋亡有抑制的作用,其作用机理可能与其下调Bax及上调Bcl-2蛋白表达有关。     

蓝莓花色苷对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用

为探究蓝莓花色苷（BA）对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及其机制,通过MTT法测定A549细胞存活率,采用ELISA法检测细胞内丙二醛（MDA）水平、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性,采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平,采用流式细胞分析仪测定细胞凋亡率,通过RT-PCR技术测定细胞内抗氧化酶和凋亡相关蛋白的mRNA表达量,用免疫印迹法（Western blot）测定凋亡相关蛋白表达量。结果表明：选择H2O2浓度400 μmol/L、处理时间24 h来构建细胞氧化损伤模型。BA质量浓度为30,60,90 mg/mL对A549细胞无毒性作用;BA能显著抑制H2O2造成的A549细胞存活率降低（P<0.05）,同时显著降低细胞凋亡率、MDA和胞内ROS水平（P<0.05）,显著增加GSH-Px、SOD和CAT活性及其相对mRNA表达量（P<0.05）,并显著上调Bcl-2/Bax的比值和下调Cytochrome c、Caspase-9和Caspase-3相对mRNA和蛋白表达量（P<0.05）。BA对H2O2诱导A549细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制细胞凋亡通路相关蛋白的表达,提高胞内抗氧化酶活性,清除胞内过量ROS,降低细胞凋亡率有关。     

低聚葡萄籽原花青素联合顺铂对A549细胞增殖及细胞周期的影响

目的:探讨低聚葡萄籽原花青素(oligomer grape seed proanthocyanidins,O-GSP)联合顺铂(cisdichlorodiamineplatinum(Ⅱ),DDP)对A549细胞增殖、细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响。方法:体外培养A549细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测DDP和O-GSP单独及联合用药对A549细胞存活率的影响;流式细胞仪检测O-GSP联合DDP对A549细胞周期的影响;Western Blot检测促细胞周期相关蛋白CDK 4、Cyclin D1和p-Rb的表达。结果:DDP(≥5 mg/L)和O-GSP(≥16 mg/L)单独用药均对A549细胞增殖有抑制作用,且两者同时作用对细胞增殖抑制具有联合作用。5 mg/L DDP单独用药可以于S期阻滞A549细胞,4 mg/L O-GSP单独用药可以于G_0/G_1期阻滞A549细胞,两者联合可显著降低细胞周期调控蛋白CDK 4、Cyclin D1和p-Rb的表达(P0.05)。结论:O-GSP可以联合DDP抑制A549细胞增殖,且这种联合作用与Cyclin D1-CDK 4-Rb通路介导的细胞周期调控有关。     

蛋清源活性肽抗氧化及抗炎活性

食源性抗氧化肽安全性高,抗氧化能力较好,近年来成为多肽研究领域的热点。本实验以蛋清源抗 氧化肽WNWAD（Trp-Asn-Trp-Ala-Asp）,及其拆分肽WNW（Trp-Asn-Trp）、WAD（Trp-Ala-Asp）、WN （Trp-Asn）、AD（Ala-Asp）为研究对象,首先采用2’-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（2,2’-azino-bis(3- ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）体外抗氧化评价方法,对5 条肽的抗氧化活性进行了评价,建立H2O2 诱导的人胚肾细胞（HEK293）氧化损伤模型,利用HEK293细胞模型评价5 条肽的抗氧化活性,然后检测抗氧化 肽WNWAD对细胞氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione,GSSG）含量的影响,最后利用酶联免疫吸附测定试剂盒 检测了炎症因子人白细胞介素-8及人肿瘤坏死因子的含量。结果表明：活性肽浓度为40 μmol/L时,WNWAD清除 ABTS＋?能力最强,Trolox抗氧化当量（Trolox equivalent antioxidant capacity,TEAC）为（98.411±0.020）μmol TE/L, 其次为WN、WNW、WAD,其TEAC分别为（96.629±0.008）、（94.978±0.003）、（88.807±0.003）μmol TE/L, AD没有ABTS＋?清除能力。在H2O2浓度为400 μmol/L时,细胞相对存活率为（50.240±0.505）%,有高度显著性差 异（P＜0.001）,不同浓度的蛋清源活性肽对H2O2诱导的HEK293细胞氧化损伤均有保护作用,且随着各条肽浓度 升高保护作用呈增强趋势,其中WNWAD的保护作用最强,浓度为30 μmol/L时,细胞存活率已高达99.12%。并且 WNWAD可明显降低细胞中GSSG含量,降低炎症因子人白细胞介素-8和人肿瘤坏死因子的含量。以上研究结果显 示蛋清源活性肽对降低HEK293细胞氧化应激水平、提高细胞抗氧化能力、抗炎能力等有重要作用。     

葡萄籽提取物原花青素诱导人食管癌细胞ECA109凋亡

目的：探讨葡萄籽提取物原花青素（grape seed proanthocyanidins extract,GSPE）诱导人食管癌细胞ECA109凋亡的效果及机制。方法：ECA109细胞用0、25、50、100、200、400 μg/mL GSPE干预24 h,噻唑蓝法检测并计算不同质量浓度GSPE对ECA109细胞的活性抑制情况,选取半数抑制浓度（50 μg/mL）作为干预剂量;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附检测法测定炎性因子及Bax/Bcl-2表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,qPCR）、Western blot检测核因子κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）通路和凋亡相关蛋白Caspase-3的表达情况。结果：不同质量浓度GSPE作用24 h均可抑制ECA109细胞的增殖,细胞凋亡率由54.44%增加到82.80%;酶联免疫吸附检测结果显示,相比于空白对照组,GSPE和NF-κB抑制剂BAY11-7082可显著抑制细胞内炎性因子前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）的产生以及C型反应蛋白（C reactive protein,CRP）的分泌（P＜0.05）;qPCR和Western blot结果表明GSPE和BAY11-7082处理使Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量显著升高（P＜0.05）,NF-κB信号通路中IκB、p65、p50 mRNA表达量显著降低（P＜0.05）,p-IκB、p65、p50相对表达量显著下降（P＜0.05）。结论：GSPE可通过抑制PGE2、CRP的产生诱导ECA109细胞凋亡,其机制可能与抑制NF-κB通路、活化Bax有关。     

紫薯花青素体外抗氧化及对H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究紫薯花青素的体外抗氧化作用,建立H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤模型,初步评价紫薯花青素的抗氧化应激作用。方法：紫薯干粉经过提取、纯化制得紫薯花青素干粉,分别测定紫薯花青素的总还原力、对羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2－•）的清除能力以及对大鼠红细胞溶血的保护作用。建立H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤模型,采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测不同质量浓度紫薯花青素对HepG2细胞氧化损伤的保护作用。结果：紫薯花青素的还原力和VC基本相当;紫薯花青素对·OH有很好的清除效果,在实验浓度范围内有明显的剂量-效应关系;随紫薯花青素浓度的升高,对O2－•的清除作用增强,呈现良好的量-效关系,单位浓度的紫薯花青素对O2－•的清除作用比2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（butylated hydroxytoluene,BHT）效果好。不同质量浓度的紫薯花青素均可抑制H2O2诱导的大鼠红细胞溶血,且随着紫薯花青素质量浓度的升高,大鼠红细胞的溶血度降低,呈现良好的量-效关系。H2O2诱导的HepG2细胞氧化损伤模型中,50～1 600 μg/mL的紫薯花青素均能够抑制H2O2引起的HepG2细胞凋亡,当紫薯花青素质量浓度达到800 μg/mL时,HepG2细胞存活率为（88.03±7.48）%。结论：紫薯花青素具有良好的体外抗氧化作用,并对H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤具有明显的保护作用,研究初步揭示了紫薯花青素具有体外抗氧化作用。     

亚甲基蓝对冈田酸所致SK-N-SH细胞分化神经元损伤的保护作用

目的：考察亚甲基蓝（methylene blue,MB）对冈田酸（okadaic acid,OA）所致分化神经元损伤的保护作用,并探究其作用机制。方法：采用全反式维甲酸诱导SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞分化为成熟神经元细胞;OA诱导分化神经元损伤模拟阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）神经元损伤;磺酰罗丹明B法检测MB对神经元细胞活性的影响;Giemsa染色法观察细胞形态变化;Western blotting检测突触素蛋白、磷酸化tau蛋白（p-tau）的表达水平。结果：全反式维甲酸可浓度依赖性抑制SK-N-SH细胞增殖,10 μmol/L全反式维甲酸处理SK-N-SH细胞7 d后,细胞突触明显伸长,出现典型神经元特征;以40 nmol/L OA构建AD模型;MB可浓度依赖性抑制分化的SK-N-SH细胞活性,与OA组相比,随着MB浓度增加,细胞轴突长度与胞体长度比值增大,细胞突触变长,MB改善了OA所致的细胞突触损伤,突触素蛋白表达量明显升高（P＜0.01）,p-tau（Ser262）蛋白水平明显降低（P＜0.01）。结论：MB对OA所造成的分化SK-N-SH神经元细胞突触损伤有保护作用,可防止AD中tau蛋白的过度磷酸化。     

甘草多糖对单核细胞增生性李斯特菌体内外生长的影响

目的：探讨甘草多糖对单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes,Lm）体内外生长的影响。方法：采用平板计数法和荧光显微镜、分光光度法及Bliss法分别分析甘草多糖对Lm生长速率和生物被膜形成的影响及计算细菌对小鼠半数致死量（median lethal dose,LD50）。观察低剂量（1 mg/kg）、中剂量（10 mg/kg）和高剂量（100 mg/kg）甘草多糖对感染100×LD50 Lm小鼠的保护力。小鼠感染0.01×LD50的Lm后1、7、14、21、28、35 d剖杀小鼠,检测脾脏、肝脏和肺脏中Lm分布的消长情况。结果：低质量浓度时（10、20、50 μg/mL）,甘草多糖随着质量浓度增加对Lm标准菌株10403S生长速率和生物被膜形成的促进作用呈上升趋势;但高质量浓度时（100、200 μg/mL）这种促进作用逐渐降低。Lm口服感染小鼠的LD50为2.70×108 CFU。高剂量甘草多糖对于100×LD50的Lm感染可提供50%的保护力。0.01×LD50的Lm感染小鼠,随着甘草多糖质量浓度增加小鼠脾脏、肝脏和肺脏的细菌量逐渐减少。结论：低质量浓度甘草多糖在体外对Lm的生长具有促进作用,但随着质量浓度增高促进强度逐渐降低,而甘草多糖可以提高小鼠抵抗Lm感染的能力。     

The uptake of oligogalacturonide and its effect on growth inhibition,lactate dehydrogenase activity and galactin-3 release of human cancer cells

Anti-tumour activity and membrane permeability of 1 kDa oligogalacturonide (PET-pectin), prepared from citrus pectin after 24 h hydrolysis, by commercial pectic enzyme produced by Aspergillus niger, on four human cell lines (HepG2, A549, Colo 205, and HEK293) and the uptake of oligogalacturonide by HEK293 cell and BALB/c mouse were investigated. PET-pectin causes a higher value of growth inhibition, lactate dehydrogenase release, and galactin-3 release in human cancer cells, as compared to the human normal HEK293 cell. There was a good correlation between growth inhibition of human cells and the uptake of rhodamine B-PET-pectin content by these cells. Additionally, almost no difference between growth inhibitions of human normal HEK293 cells cultivated with PET-pectin and pectin was found. Total pectin content in the blood of PET-pectin administrated mice increased to a maximum at 2 h after oral administration, while it did not increase and change in pectin administrated mice. Our findings suggested that citrus PET-pectin can be developed as a potential dietary supplement in plant origin for cancer prevention.     

花椒挥发油的提取工艺优化及抗肿瘤活性分析

采用水蒸气蒸馏法提取花椒中的挥发油,以得油率为评价指标,以料液比、冷浸时间和提取时间为考察因素,通过星点设计-响应面法优选花椒挥发油提取工艺。结果表明：花椒挥发油水蒸气蒸馏提取的最佳工艺条件为料液比1∶12（g/mL）、冷浸时间2.5 h、提取时间4.7 h,得油率可达9.284%。采用MTT法检测花椒挥发油的体外抗肿瘤活性,测得花椒挥发油对HeLa、A549、K562 三种细胞的IC50值分别为（11.2±0.2）、（6.26±0.05）、（1.37±0.03） mg/mL。表明花椒挥发油具有较强的体外抗肿瘤活性,且对3 种肿瘤细胞的生长均有抑制作用。     

酪蛋白糖巨肽对小鼠腹腔吞噬细胞及肠黏膜免疫细胞的影响

目的：由于酪蛋白糖巨肽（casein glycomacropeptide,CGMP）具有许多生理活性功能和独特营养特性,研究CGMP对小鼠腹腔免疫细胞以及肠黏膜屏障的影响可为其应用于保健食品和医药品提供科学依据。方法：以96 只健康昆明雌性小鼠为实验动物,利用流式细胞仪、HE染色和免疫荧光标记技术,分别检测分析了灌胃不同剂量的CGMP（30 μg/d和120 μg/d）对实验小鼠腹腔吞噬细胞吞噬活性以及肠上皮内淋巴细胞（intraepithellallymphocytes,IEL）和固有层IgA+浆细胞数量的影响,探讨CGMP改善小鼠腹腔吞噬细胞和肠黏膜屏障功能的作用。结果：CGMP能够显著增加小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬能力,灌胃时间越长,作用效果越明显;其中灌胃CGMP的剂量为120 μg/d的作用效果优于30 μg/d剂量组。且与对照组相比,灌胃CGMP组小鼠十二指肠上皮内淋巴细胞数和固有层IgA+浆细胞数量显著增加（P ＜ 0.01）。结论：CGMP可以增强小鼠腹腔吞噬细胞吞噬功能,诱导肠道黏膜免疫应答,增强肠黏膜免疫屏障功能,有望开发为抑制肠道炎症的功能性食品添加剂。