烟草疫霉生防细菌的筛选及鉴定

为获得防治烟草黑胫病的生防菌株,通过对峙平板法,从烟田土壤中分离出1株对烟草疫霉具有很好抑菌作用的细菌B40-3.培养3 d后,该菌株对烟草疫霉抑菌带宽度为0.9 cm,抑菌圈半径为2.3 cm,并对其余12种植物病原真菌有很好抑制作用.该菌株在LB液体培养基中,37 ℃,210 rpm条件下培养40 h,OD值达到最大值.依传统生理生化反应鉴定,B40-3属于枯草芽孢杆菌.     

一株农用拮抗放线菌的分离与鉴定

为烟草土传病害生物防治研究提供菌株资源,采用稀释平板法分离洛阳地区烟草根际土壤样品中的优势拮抗放线菌,平板对峙培养法与抑制菌丝生长速率法测定放线菌菌株的拮抗作用,16S rDNA分析鉴定菌株种类。结果表明:从烟草根际土壤中共分离、纯化获得108个放线菌单菌落,其中22株对瓜果腐霉、烟草疫霉、尖孢镰刀菌的至少一种有拮抗作用,菌株SA74对3种病原真菌的抑菌率均大于50 %。根据形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,该菌株被鉴定为金黄垂直链霉菌（Streptomyces aureoverticillatus）。      

不同配方糖醋液诱源对贵州遵义烟田害虫的诱杀作用

为明确贵州遵义烟区烟田主要害虫的发生规律,筛选出适宜配方的糖醋液诱源有效诱杀烟田害虫,于2017年4月17日至8月15日利用5种糖醋液配方诱源在贵州遵义烟区进行烟田害虫诱杀试验。结果表明,烟田小地老虎、烟青虫/棉铃虫分别在6月上旬、5月上旬出现发蛾高峰期;其他蛾类昆虫在6月上旬和7月上旬出现2个高峰期;中华弧丽金龟成虫在5月下旬至6月上旬和7月上旬出现两个高峰期。糖醋液诱源对天敌昆虫的伤害较小,但在烟株现蕾后对蜜蜂的伤害较大。5种糖醋液配方中,配方Ⅰ(糖:醋:酒:水=6∶3∶1∶10)的诱杀效果最佳,且对蜜蜂伤害相对较小。在贵州遵义烟区烟草成熟期放置糖醋液诱捕器的区域烟草叶片被取食率显著高于未放置诱捕器的区域。     

洛阳地区烟草根际土壤中多粘类芽孢杆菌的分离与鉴定

为从烟草根际土壤中筛选得到对烟草土传病原真菌具有拮抗作用的细菌菌株,用稀释平板法分离土壤样品获得根际细菌菌株,再用平板对峙培养法测定细菌菌株的拮抗作用,通过形态特征观察、生理生化测定及16S rDNA序列分析来鉴定拮抗细菌的种类。结果表明,从30份根际土壤样品中共分离、纯化得到180个细菌单菌落,其中49株细菌对供试病原真菌具有一定的抑制作用。菌株TS681、TS682和TS683对3种病原真菌均具有较好的拮抗作用,对瓜果腐霉的抑菌率均大于51.43%,对寄生疫霉的抑菌率均大于68.75%,对尖孢镰刀菌的抑菌率均大于60.00%。结合菌株的形态特征、生理生化特征与16S rDNA序列的分析结果,将菌株TS681、TS682和TS683鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。     

山东省烟田土壤杂草种子库研究

为有效控制烟田杂草的危害,2010～2012年采用诱萌法对山东省主产烟区土壤(25 cm耕层)杂草种子库的杂草种类与数量进行了研究.结果表明,多数样品中单子叶杂草数量明显高于双子叶杂草;不同烟区杂草种子库的密度存在差异,密度最大的是莱芜烟区苗山镇,为32891粒/m2,最小的是诸城贾悦镇,为1719粒/m2;不同耕层土壤中杂草种子库的密度也存在差异,多数样品在0～15 cm耕层中的最大;单子叶的莎草科和禾本科杂草在土壤种子库中的数量较大,而双子叶杂草数量较小.     

烟叶主要害虫生态管理(EPM)技术研究

研究表明诱集带作物的种植时间以烟草移栽前30d为宜;种植密度以每2行烟草种植1行诱集作物,诱集作物以每2米1穴为宜。综合应用种植诱集作物带、黄板诱蚜、性诱芯诱蛾、频振式杀虫灯等技术措施,可以有效降低烟株上害虫的数量。烟草害虫生态管理的成本高于常规化学农药防治的成本,但该技术的运用可以大大降低化学农药的使用量,减轻因农药使用造成的环境污染,降低了烟叶中的农药残留,提高了烟叶品质。     

不同类型烟草上节肢动物群落的季节特征

洛阳山区烟田的调查发现,黄花烟草单作田,黄花烟与RG17混栽烟田和RG17单作田的节肢动物群落分别由24种、68种、59种组成,其季节变化随烟草生育期不同可以分成3个阶段。烟田的捕食性天敌是控制害虫的优势种群,对害虫具有一定的抑制作用。黄花烟草对烟青虫、棉铃虫产卵具有较强的诱集作用,种植黄花烟草可作为防治烟草害虫的措施之一。      

烟田养殖黑眶蟾蜍对烟草害虫发生的影响及其应用评价

为评价黑眶蟾蜍对烟草害虫的控制效果,比较了黑眶蟾蜍的食性与普洱烟区主要害虫之间的相似性,统计了试验烟田害虫种类、数量、土壤和烟叶的农药及重金属残留,用独立样本t检测分析发现,烟田主要害虫都在黑眶蟾蜍的捕食范围之内,试验地当年害虫主要为斜纹夜蛾和豆天蛾。未养殖黑眶蟾蜍(对照)与养殖黑眶蟾蜍的烟田中(处理)斜纹夜蛾虫口密度分别为1.39和0.09只/m~2,豆天蛾为0.41和0.09只/m~2,土壤中砷为117.45和10.30 mg/kg,镉为2.34和0.37 mg/kg,处理均显著低于对照烟田,试验地烟草发病较轻。说明可利用黑眶蟾蜍的捕食性建立生态烟田。     

套种大蒜对烟田土壤微生物群落及烟叶品质的影响

为探明烟田套种大蒜后土壤微生物群落变化,特别是烟田土壤中烟草根茎病菌的数量及对烟叶内在品质影响,在龙岩烟区开展了套种大蒜对烟田土壤微生物及烟叶品质影响试验。结果表明,烟田套种大蒜能明显减少烟田土壤中细菌、真菌数量,特别是减少烟草青枯菌和黑胫病菌数量,而增加烟田放线菌数量。套种大蒜对烟叶内在化学成分及烟叶评吸质量无明显负面影响。在烟草根茎病严重的局部烟田可通过套种大蒜控制该类病害的发生与危害,从而减少化学农药的使用,提高烟叶安全性,减少环境污染。     

毁灭炭疽菌诱抗蛋白的分离纯化及对烟草抗病促生作用

为明确诱抗蛋白能够对烟草产生抗病促生作用,采用加热、离心、硫酸铵分级沉淀、透析和凝胶色谱柱等方法,从毁灭炭疽菌（Colletotrichum destructivum）中分离纯化出一种诱抗蛋白,并采用喷雾接种和摩擦接种的方法研究其预防保护作用。结果表明,经SDS-PAGE显示该诱抗蛋白分子量约为38kD,且目的蛋白存在于Pro-P2-TX组份中;对烟株进行烟草普通花叶病毒病的接种试验,接种3d后,诱抗蛋白处理组烟草叶片枯斑数明显少于清水对照组,对TMV的诱抗效果为73.79%;该诱抗蛋白能够明显促进烟草的生长,诱导处理40d后,烟草的株高、叶宽和茎围与清水对照相比明显增加,其中株高增长72.43%,叶宽和茎围分别增加61.06%和29.05%。因此,试验结果说明毁灭炭疽菌诱抗蛋白具有诱导烟草产生抗病性和促进烟草生长的作用。     

巨大芽胞杆菌（Bacillus megaterium，Bm）的抑菌活性及定殖规律分析

为进一步明确巨大芽胞杆菌（Bacillus megaterium,Bm）菌株对烟草主要病害的抑制效果,利用半叶法、对峙平板法和抑菌圈法研究了Bm对烟草花叶病毒（TMV）、黑胫病菌和青枯病菌的抑制作用;利用抗生素诱导筛选抗药性标记菌株,研究其在烟草根际土壤和叶面上的定殖规律;同时制备了生防菌发酵液制剂,测定其田间防治效果。结果表明:Bm发酵液和发酵上清液对烟草花叶病毒的抑制率分别为88.4%和74.3%;Bm无菌发酵上清液对黑胫病菌菌丝生长的抑制率为67.5%,对青枯病菌的抑菌圈直径为10.03 mm。抗药性菌株Bm-rif生长性状与野生型无差异。室内定殖试验结果显示,Bm-rif稳定定殖菌量在非灭菌土壤中为0.04×105 cfu/g,在灭菌土壤中为0.47×105 cfu/g,均显著高于叶面定殖菌量;接种TMV-GFP前24 h叶面喷施发酵液对TMV初侵染的抑制率为44.04%。菌株发酵液稀释后喷淋烟株茎基部,对烟草黑胫病和青枯病的田间防治效果分别为68.09%和51.02%。因此,Bm具有抑菌活性且能在烟草根际土壤中有效定殖,具有开发为生防菌剂的潜力。      

基于锁核苷酸(LNA)增敏的植烟土壤中烟草黑胫病菌定量PCR检测方法

为了快速有效地检测植烟土壤中的烟草黑胫病菌的定殖数量,以一种锁核苷酸(LNA)引物为基础,进行了植烟土壤中烟草黑胫病菌数量的定量PCR 检测方法研究。结果表明:①与普通DNA引物相比,LNA 引物提高了PCR 反应的退火温度,减少了引物二聚体和非特异性产物的形成,提高了烟草黑胫病菌分子检测的灵敏度与特异性;②定量分析检测出14 个烟草-大蒜轮作土样中烟草黑胫病菌的定殖数量为2.76×103～5.20×104个/g,且在4～5 h 内完成检测,具有较高的灵敏度和检测效率。      

种植密度与施氮量对江西紫色土烤烟产量及农艺性状的影响

为了查明江西紫色土上种植模式与浓香型烟叶质量的关系,以江西省主栽烤烟品种K326为试验材料,研究种植密度与施氮量互作对烤烟产量及农艺性状的影响。结果发现,增施氮肥后株高显著增高、烟叶显著增宽、叶长/宽显著减小、烟叶鲜重/干重显著提高。当施氮量≤142.5 kg/hm²时,株距越小烟叶越宽,烟株密植能显著提高烟叶产量;但当施氮量≥142.5 kg/hm²时烟株稀植有利于上等烟比例的提高;当施氮量为165 kg/hm²时,烟株稀植有利于叶长与叶宽的增加,同时显著提高上等烟比例;当施氮量为165 kg/hm²、株距为0.5 m时,烤烟产量与产值均最高。故建议今后紫色土烤烟种植模式为行距1.2 m,株距0.5 m、施氮量165 kg/hm²。     

大理州烟草黑胫病菌对烯酰吗啉的敏感性测定

采用含药平板法建立烟草黑胫病菌对杀菌剂烯酰吗啉的敏感基线,并测定了2013年从云南省大理州各烟区分离纯化的烟草黑胫病菌菌株对烯酰吗啉的敏感性。结果显示,烟草黑胫病菌的敏感基线为1.4656 μg/mL;68个田间菌株对烯酰吗啉的EC₅₀值在0.5857~2.5254 μg/mL之间,平均为1.1118 μg/mL。表明烯酰吗啉对烟草黑胫病菌的活性较高,大理州烟草黑胫病菌的抗药性风险较低。烯酰吗啉可用于大理州烟草黑胫病的有效防控,但应与其他杀菌剂进行合理的轮换使用。     

产几丁质酶菌的分离、筛选及其对烟草病原真菌的抑制作用

从福建、河南、安徽、云南、湖北采集了烟草根际土样100份,用几丁质选择培养基法共分离出产几丁质酶菌株62株,其中真菌32株、细菌22株、放线菌8株。通过透明圈法和还原糖法对分离的菌株进行了筛选,结果表明链霉菌属(Streplomycessp)产几丁质酶活性最高。并测定了几丁质酶活性较高的菌株对烟草赤星病菌和黑胫病菌的抑制效果,其中菌株9-1-1、9-2-1和19-2-1对黑胫病菌均有不同程度的抑制作用,以菌株9-1-1的抑菌效果最好,而这3种菌株对赤星病菌的抑制效果不明显。因此,菌株9-1-1有开发成为生防制剂用于防治烟草黑胫病的潜力。     

烟区土壤改良技术措施研究

本试验对三明烟区土壤改良技术进行了研究。三年定点试验结果表明:种植大麦和稻草还田改良土壤的效果优于其它处理和对照,有助于协调土壤养分的平衡供给和改善土壤结构,其中稻草还田对土壤结构的改善效果最为显著;通过两年施肥量的调整,消除了不同处理对施肥水平的影响,在保证各处理烟株长势均衡,烟碱含量较为理想的前提下进行比较,种植大麦和稻草还田的处理,烟株采烤结束后根量大于其它处理及对照,烤后烟叶均价、上等烟比例和产值明显高于其它处理及对照;稻草还田处理烟株青枯病发病率低于对照。种植大麦能显著减轻烟草青枯病的危害,且在种植当年就表现出了一定的效果,烟株生长后期的耐熟性明显提高。     

烟草病原真菌拮抗性内生细菌的筛选

为利用有益微生物防治烟草某些病害,从7个烤烟品种(云烟85、红大、K326、K346、RG11、G28和NC89)不同生育期的根、茎、叶中分离获得内生细菌1729株,并通过平板对峙培养法筛选出对烟草灰霉病菌、黑胫病菌、赤星病菌和炭疽病菌有较好拮抗活性的菌株61、38、52和55株。结果显示,在各个品种、各个时期及根、茎、叶中均有不同数量拮抗这4种病原菌菌株存在。     

烟草黑胫病菌全基因组DNA遗传多态性RAPD标记

应用ＲＡＰＤ分子标记技术,从８０个随机引物中筛选出１０个分别为ＯＰＡ０２、ＯＰＡ０１３、ＯＰＡ０１４、ＯＰＡ０１６、ＯＰＡ０１８、ＯＰＢ０４、ＯＰＢ０５、ＯＰＤ０２、ＯＰＤ０３、ＯＰＤ０１１,对来自云南省６大主产烟区的２４个烟草黑胫病菌株全基因组ＤＮＡ进行随机扩增。结果表明：１０个引物共标记出８９条ＲＡＰＤ图带,其中多态性图带６３条,多态率７０．７％。引物ＯＰＤ０１１、ＯＰＤ０２、ＯＰＡ０１６、ＯＰＢ０４对每个受试样品均可标记出分子量为０．８７Ｋｂ和１．１Ｋｂ的ＤＮＡ片段,此４个引物对受试样品全基因组ＤＮＡ具有特征性分子标记的特性,利用核酸分子杂交技术对田间寄主体内的黑胫病菌的有无进行分子检测。被标记出的分子量为０．８７Ｋｂ和１．１Ｋｂ的特征性ＤＮＡ片段,可用来制备特异性探针,对田间烟草黑胫病菌发生动态进行检测和预报。     

土壤深耕与秸秆还田对土壤物理性状及烟叶产质量的影响

为探明江西典型植烟区适宜耕作方式,改善烟区土壤理化性质,在稻烟轮作区开展田间试验研究深耕对土壤物理性状、烤烟生长与烟叶产质量的影响。结果表明,在5~10 cm土层,秸秆还田显著降低了土壤容重、增加了土壤总孔隙度、毛管孔隙和通气孔隙;在20~25 cm土层,深耕和秸秆还田均显著降低了土壤容重,提高了土壤通气孔隙。深耕显著降低了土壤的贯穿阻力,秸秆还田通过增加5~10 cm土层≥2 mm团聚体的含量进而增加了土壤大团聚体的比例。深耕和秸秆还田均能提高烟株根茎叶的干物质量、促进其对氮磷钾的吸收,以深耕处理与深耕+秸秆还田处理效果更显著。深耕和秸秆还田显著提高了烟叶产量、产值和烟叶评吸总分。利用圆盘犁深耕土壤结合水稻秸秆还田是改良植烟土壤、提高烟叶产质量的可行技术措施。