酒曲中高蛋白酶产生菌筛选及酶学性质研究

利用脱脂牛奶平板法从宋河酒曲中分离得到6株有明显水解圈的蛋白酶产生菌,其中水解圈直径与菌落直径之比最大为8.84,经鉴定为芽孢杆菌。以此菌种通过发酵培养提取出粗酶液,然后对该蛋白酶的酶学性质进行研究。试验表明,该蛋白酶的最适酶活力温度为40℃,在40℃～50℃热稳定性较好;该蛋白酶最适pH值为11.0,在pH值为9.0～11.0稳定性较好,在pH6.0条件下酶活力很快丧失;金属离子Fe2+对该蛋白酶有激活作用,Cu2+、Zn2+和Pb+有抑制作用,Mg2+、Ca2+和Li+对该蛋白酶酶活性影响不大。     

海参酶解液的体外抗氧化活性研究

分别选用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和菠萝蛋白酶水解海参体壁,以DPPH·清除能力、O2-·清除能力、Fe2+螯合力和还原力为抗氧化指标,研究不同海参酶解液体外抗氧化活性的差异。结果表明,随着水解时间的增加,5种酶解液基本上均表现出酶解液的抗氧化能力先增加后下降的趋势。菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶酶解液的DPPH·清除能力和O2-·清除能力较强;胰蛋白酶酶解液的Fe2+螯合能力最强;而木瓜蛋白酶酶解液的还原力最大。从清除自由基角度上,菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶可作为开发海参抗氧化肽的优选工具酶。     

罗汉果蛋白酶水解大豆蛋白研究

研究了采用罗汉果蛋白酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽的水解工艺;分析了温度、pH、底物浓度、酶与底物比(质量百分比)和时间对酶水解的影响;得到了罗汉果蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳水解工艺为温度60℃、pH9.0、底物浓度5.0%、酶与底物比5.0%、水解时间1h。     

产蛋白酶酵母菌的选育及酶学特性

在葡萄酒自然发酵过程中,在发酵初期非酿酒酵母菌占主导地位,蛋白酶可将葡萄汁中的蛋白质水解成可溶性肽和氨基酸,利于葡萄酒的澄清和稳定,同时对陈酿期间的酵母自溶也有着重要的作用。本研究通过对新疆赤霞珠葡萄酒发酵过程中非酿酒酵母菌的筛选,得到1株产蛋白酶能力较强的菌株;紫外-微波复合诱变后,酶活力增加1.47倍;经26S r RNA基因序列分析鉴定为葡萄汁有孢汉生酵母XYN162(H.uvarum XYN162);酶学性质研究表明:所产蛋白酶最适p H为8.0,在p H为7.0~8.0时酶活性保持在90%以上;酶的最适作用温度为37℃,在35℃酶活力保持较好;Fe2+、Ca2+对酶有不同程度的激活作用,Mg2+、Cu2+对酶有明显的抑制作用,说明此菌株所产的蛋白酶对金属离子具有依赖性。以上数据确认该菌为产蛋白酶葡萄汁有孢汉生酵母。     

嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶的分离纯化及酶学性质的研究

为优化CEP的分离纯化方法,采用聚乙二醇(PEG)-20000浓缩粗酶液,用超滤离心管过滤酶液,40%~60%硫酸铵盐析分级沉淀,Sephacryl-S-300HR纯化,并通过Native-PAGE切胶回收得到纯酶。所得CEP的分子质量为28.3ku,比酶活力62.066U/mg,最适温度32℃,最适pH6.5,耐热性比较强,耐酸性明显好于耐碱性。Co2+、Mg2+、Ca2+对CEP有激活作用;Ba2+、Mn2+、K+、Na+对CEP的活力影响不大;Zn2+、Ni2+则表现出较强的抑制CEP活性作用;EDTA对CEP活性有抑制作用,表明CEP是一种金属离子激活酶;PMSF对CEP有显著抑制作用,表明CEP是一种丝氨酸蛋白酶。用嗜酸乳杆菌CEP水解乳清蛋白,其酶解液对ACE的抑制率为56.31%,表明CEP水解乳清蛋白可以产生ACE抑制肽。     

米曲霉蛋白酶动力学特性的研究

研究了在不同底物浓度、温度和pH下米曲霉蛋白酶水解酪蛋白产生酪氨酸的动力学特性。在反应时间为10min时,最佳反应温度为50℃,最佳反应pH为9。实验表明米曲霉蛋白酶水解酪蛋白生成酪氨酸的反应符合米氏方程,根据实验数据回归得到温度为40℃时的速度方程为r=0.243CS/0.0282+CS,反应速度与氢离子浓度的关系为r=lgCH++3.14013/0.19759+0.05484(lgCH++3.14013)+(lgCH++3.14013)2。该蛋白酶在50℃下的失活规律符合双指数模型,相对酶活力与时间的关系为a=0.82531e(-0.02169t)+0.17469e(-0.41914t)。在4～50℃的范围内,蛋白酶水解反应的活化能Ea为30.67kJ。还研究了不同化学组分对蛋白酶活力的影响,发现10mmol/L的H3BO3和Mg2+对该蛋白酶有一定的激活作用,而EDTA、SDS、Zn2+、Mn2+和Sn2+对蛋白酶有明显的抑制作用,10mmol/L的H2O2对该蛋白酶的抑制作用不明显。     

蛋白酶水解鸡枞菌制备酶解液工艺优化及抗氧化活性

以鸡枞菌为原料,以DPPH·、ABTS^+·、O2^-·清除率及水解度为指标,采用蛋白酶对鸡枞菌进行水解,制备酶解液。以碱性蛋白酶为水解酶,以DPPH·清除率和水解度为参考值,采用单因素和正交试验分析法研究料液比、加酶量、pH、温度、时间对酶解效果的影响。结果表明:应用碱性蛋白酶制备的鸡枞菌酶解液抗氧化效果最佳,酶解条件为料液比1∶25(g/mL),加酶量3500 U/g,pH 7,酶解温度45℃,酶解时间2.5 h。此条件下所得酶解液的DPPH·清除率为73.23%,水解度为44.6%,酶解液对DPPH·、ABTS^+·和O2^-·3种自由基均有清除作用,其IC50分别为0.25,0.39,1.09 mg/mL,但清除能力明显低于同浓度Vc的清除能力。     

芝麻蛋白制备金属螯合肽的酶解工艺研究

分别采用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶Alcalase对芝麻蛋白进行水解,结果表明胰蛋白酶为制备金属螯合肽的最佳酶。通过优化胰蛋白酶酶解工艺条件发现最佳条件为:底物质量浓度5%(g/100mL),酶添加浓度20u/g(底物),水解时间5h,得到的酶解产物金属螯合率最强,与Fe2+的螯合率为90.9%,与Zn2+的螯合率为93.5%。通过考察水解度对酶解产物金属螯合率及抗氧化能力的影响,结果显示水解度在18.9%到22.4%之间的酶解产物金属螯合率强,且水解度在一定范围内金属螯合率和抗氧化能力均与水解度呈正相关性。     

山羊酷蛋白不同酶解产物特性的研究

比较了四种酶(胰蛋白酶、胃蛋白酶、Alcalase及自制的枯草芽孢杆菌蛋白酶)对山羊酪蛋白的水解能力.水解度动态测定发现,酶解速度从高到低依次为Alcalase、枯草芽孢杆菌蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶;当40℃水解3h左右,水解度即达到相对稳定的最大值,依次为34.61%、25.28%、19.08%和7.22%.酶解物的SDS-PAGE分析发现,Alcalase、枯草芽孢杆菌蛋白酶能将山羊酪蛋白充分降解成小肽或游离氨基酸,而胰蛋白酶和胃蛋白酶的酶解物中还包含14kDa左右的大肽.山羊酪蛋白对四种酶的敏感程度均高于牛酪蛋白.山羊酪蛋白的胃蛋白酶解物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有一定抑制作用,枯草芽孢杆菌蛋白酶酶解物具有较强的超氧负离子自由基(O2-·)清除能力,清除率达到50.22%,是相同浓度维生素C(73.73%)的68%,四种酶解物清除O2-·的能力与水解程度呈正相关.     

中国蛤蜊内源酶性质的研究

研究了中国蛤蜊的肌肉与消化腺中内源酶的性质。结果表明:1中国蛤蜊肌肉中蛋白酶最适温度为60℃,最适p H为7.0与9.0,可能存在同工酶;Pb2+对蛋白酶活力有激活作用;Ca2+对酶活力有抑制作用;Mg2+与Cu2+在5mmol/L时,对酶活力有激活作用,随着浓度升高对酶活力有抑制作用;Mn2+在5~15 mmol/L时,对酶活力影响不大,在20 mmol/L时对酶活力有激活作用。2消化腺中蛋白酶最适温度为60℃,最适p H 8.0;Pb2+对蛋白酶活力有激活作用;Mn2+对酶活力有抑制作用;Mg2+与Ca2+在5 mmol/L时,对酶活力有抑制作用,随着浓度升高有促进作用。Cu2+在5~15 mmol/L时对酶活力有促进作用,当浓度为20 mmol/L时,对酶活力有抑制作用。3肌肉中淀粉酶最适温度为40℃,最适p H 10.0;Mn2+、Ca2+对淀粉酶活力有促进作用;Pb2+在5~10 mmol/L时对酶活力有促进作用,在15~20 mmol/L时对酶活力有抑制作用;Mg2+在5~10 mmol/L时对酶活力有抑制作用,在15~20 mmol/L时对酶活力有促进作用;Cu2+在5 mmol/L时对酶活力有促进作用,随着浓度升高,对酶活力有抑制作用。4消化腺中淀粉酶最适温度为40℃,最适p H为9.0;Ca2+在20 mmol/L时对淀粉酶活性有促进作用,低于此浓度有抑制作用。Pb2+、Mg2+、Cu2+和Mn2+对淀粉酶活性皆有不同程度的抑制作用。     

高产蛋白酶菌株的分离、鉴定及酶学性质研究

该研究旨在从非传统环境（磷矿）中分离、筛选高产胞外蛋白酶菌株，对菌株进行形态学观察、生理生化和分子生物学鉴定，并研究其蛋白酶的酶学性质。结果表明，分离筛选到一株蛋白酶高产菌株，编号为PB5，该菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis），该菌株产胞外蛋白酶活力为562.3 U/mL，胞外蛋白酶的最适pH值为10，在pH 7～10有较好的pH稳定性；最适温度为60 ℃，20～50 ℃时有较好的稳定性；Na+、Mg2+、Mn2+、K+对蛋白酶活力有明显的促进作用；Fe2+、Ag+、乙二胺四乙酸（EDTA）、苯甲基磺酰氟（PMSF）、十二烷基硫酸钠（SDS）对蛋白酶活力有明显抑制效果。     

不同染化药剂对蛋白酶YL-1活力的影响

在蛋白酶YL-1稀释液中添加不同的染化药剂，按照蛋白酶活力的测试方法进行测试，比较不同药剂对该酶活力的影响结果表明，适量的非离子表面活性剂平平加O对蛋白酶YL-1的活力有明显的增强作用；亚硫酸钠对酶的活力也有提升作用．     

不同生化因子对米曲霉蛋白酶系活力的影响

研究不同生化因子（金属离子、乙二胺四乙酸（EDTA）和十二烷基磺酸钠（SDS））对米曲霉蛋白酶系（包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、氨肽酶和羧肽酶等5种）活力的影响,结果显示：生化因子都对羧肽酶活力有促进作用,影响最强的是Ca2+,其相对酶活达到310%;对酸性蛋白酶活力促进作用最强的是的Mn2+,相对酶活达到317%;而SDS完全抑制其活性。生化因子对中性蛋白酶、碱性蛋白酶和氨肽酶活力主要起抑制作用,抑制能力最强的分别是Ge2+,Fe3+和SDS。Ag+对氨肽酶活力促进显著,相对酶活力达到483%。     

蛋清酶解多肽的制备及其清除自由基活性

为探索蛋清酶解多肽体外清除自由基活性,开发功能性蛋制品,本文采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶,通过对比实验、单因素实验和正交实验确定了蛋清酶解多肽的制备方法,采用体外清除自由基对比实验研究了蛋清酶解多肽的体外清除自由基活性。结果表明:蛋清蛋白浓度调整至4 g/100 mL(m/V),用18000 U/g蛋白的碱性蛋白酶在pH9.0于60 ℃水解7 h,制备的蛋清多肽清除DPPH自由基能力最强;用碱性蛋白酶制备的蛋清多肽在体外对超氧阴离子、羟自由基、DPPH自由基清除能力和Fe3+还原能力均明显优于蛋清,但远不及V_C。证明蛋清经碱性蛋白酶控制水解能明显增强其清除自由基能力,提高其保健性能。     

罗汉果蛋白酶的化学修饰

通过对罗汉果蛋白酶进行化学修饰,分析该酶结构与功能的关系。利用8种化学修饰剂对罗汉果蛋白酶进行修饰,并测定修饰后该酶的酶活的变化。结果显示:苯甲基磺酰氟(PMSF)、N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)和焦碳酸二乙酯(DEPC)对该酶的抑制作用很强,而其它修饰剂对酶活性影响不大,说明羟基、吲哚基和咪唑基可能为蛋白酶活性的必需基团,而巯基、氨基、羧基、胍基和二硫键可能并不是酶活性的必需基团。     

三种蛋白酶酶解核桃饼粕的抗氧化活性研究

该研究以核桃饼粕（WC）、石油醚脱脂核桃饼粕（PEWC）、石油醚及丙酮脱脂核桃饼粕（PEAWC）、核桃饼粕分离蛋白（WCP）、石油醚脱脂核桃饼粕分离蛋白（PEWCP）、石油醚及丙酮脱脂核桃饼粕分离蛋白（PEAWCP）为研究对象,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶超声水解,以抗氧化活性为评价指标,筛选最佳的蛋白酶及原料处理方法。结果表明,碱性蛋白酶水解PEWC对OH·、O2-·和DPPH·清除率最高,分别为18.74%、28.44%和79.96%;胰蛋白酶酶解PEWC的总还原力最大;胰蛋白酶水解PEWCP的OH·和DPPH·清除率最高,分别为21.44%和80.22%,但O2-·清除率较低;胃蛋白酶水解PEWCP的O2-·清除率最高,达30.23%;碱性蛋白酶酶解PEWCP的总还原力最大;核桃饼粕经石油醚脱脂后的酶解产物抗氧化活性最高,且以碱性蛋白酶为最佳水解酶。     

红叶甜菜红色素的稳定性研究

采用80% 乙醇为提取溶剂,将提取的色素液在230～700nm 范围内进行紫外扫描,而后分别探讨碳水化合物、pH 值、温度、氧化剂还原剂、光照、金属离子对色素在紫外和可见光区的稳定性的影响。结果表明：该色素在紫外光区有两个吸收峰,波长分别为270、334nm,可见光区有两个吸收峰,波长分别为538、666nm;红叶甜菜红色素对热比较稳定,但不耐高温;pH 值对色素颜色影响不是很大,除pH10 以外;碳水化合物对其影响不显著;其抗氧化能化较弱;自然光照射一定时间会褪色;大多数金属离子对其无影响;而Fe3+ 等少数金属离子对色素有影响。     

芽孢杆菌NCB-01胞外蛋白酶酶学特性的初步研究

该实验对来自于渤海海域沉积物的芽孢杆菌NCB-01分泌的胞外蛋白酶的酶学特性进行了初步研究。结果表明,该蛋白酶的最适作用温度为60 ℃,最适pH值为8.0,在50 ℃以下及pH值7.0～9.0的范围内酶稳定性良好。该酶具有较好的金属离子耐受能力,Fe2+、K+、Na+、Mn2+、Ca2+、Mg2+对酶活均有不同程度的激活作用。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂（PMSF）能强烈抑制该酶的酶活性,表明该蛋白酶为丝氨酸碱性蛋白酶。非离子型表面活性剂Tween-20、Tween-80及Triton X-100和阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）对酶活均有较强的抑制作用。该酶具有良好的耐盐性。其米氏常数（Km）为1.11 mg/mL,最大反应速率（Vmax）为91.74 μg/（min·mL）,说明该碱性蛋白酶与酪蛋白的亲和力好,特异性强。     

羊毛蛋白酶防毡缩整理织物表面特征研究

文章主要研究羊毛蛋白酶防毡缩整理后,织物的抗起毛起球性、白度、色度、表面色深度及染色牢度的变化.结果表明,毛织物经H2O2、DCCA、H2O2+蛋白酶、DCCA+蛋白酶法处理后,其中,经DCCA处理和DCCA+蛋白酶两步法处理毛织物的抗起毛起球性均得到显著提高;以上不同预处理蛋白酶法的防毡缩织物的明度、彩度、白度均有不同程度的提高.羊毛经DCCA+蛋白酶整理,提高了K/S值,而染色牢度与单独蛋白酶处理相当.