黑枸杞提取物对HBV的抑制作用及抗氧化能力测定

目的:研究黑枸杞提取物对抗乙肝病毒的作用并检测其抗氧化活性。方法:体外培养HepG22.2.15细胞,MTT法检测黑枸杞提取物对HepG22.2.15细胞的细胞毒作用,双抗体夹心法检测HepG22.2.15细胞培养液中HBsAg和HBeAg的表达。测定黑枸杞不同浓度提取物的还原能力和对羟自由基、DPPH自由基的清除能力。结果:MTT法检测黑枸杞提取物对HepG22.2.15细胞无明显细胞毒作用。与阴性对照组比较,黑枸杞提取物对HepG22.2.15细胞HBsAg和HBeAg的表达有抑制作用(p<0.05)。且随着黑枸杞提取物浓度的增加,其还原能力与清除羟自由基、DPPH自由基的能力逐渐增强。结论:黑枸杞提取物对乙肝病毒有抑制作用,并且有着良好的抗氧化能力。     

罗汉果蛋白酶的分离纯化和特性研究

利用超滤和DEAE Sepharose CL-6B柱层析,对罗汉果蛋白酶进行了纯化。同时探讨罗汉果蛋白酶的理化性质,对纯化的罗汉果蛋白酶进行了最适反应温度、最适反应pH等性质进行了研究,为该酶的进一步开发应用提供科学依据。     

罗汉果蛋白酶的贮存稳定性研究

将罗汉果蛋白酶粗酶以固态或液态在有光或避光、不同温度、不同浓度的半胱氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)和葡萄糖的条件下贮存,分别在不同时间测定粗酶的相对活力,以考察这些条件对罗汉果贮存稳定性的影响。结果表明:在这些条件下,60 d内,酶活都基本保持,但60 d后,酶失活速度加快。其中光和温度(-20℃～25℃)对罗汉果蛋白酶贮存稳定性的影响不明显,但加入半胱氨酸、EDTA或葡萄糖可减缓60 d后酶活下降的速度。所以罗汉果蛋白酶若在60 d内使用的可一般存放,若60 d后使用,可加入一定的半胱氨酸、EDTA或葡萄糖贮存,以保持其活性。     

薄层扫描法测定罗汉果糖苷(V)含量的研究

建立采用薄层扫描法测定罗汉果糖苷(V)含量的方法。点样于硅胶G板上,以正丁醇-乙醇-水(8∶2∶3)为展开剂,10 %硫酸乙醇显色,单波长反射法锯齿扫描,λ=5 0 0 nm。罗汉果糖苷(V)在2 .0～16 . 0 μg范围内具有良好的线性关系,r=0 .992 1,平均回收率为97.6 2 % ,RSD为2 .5 9% (n=4 )。该法简便快速、准确灵敏,可用于罗汉果糖苷生产质量监控。     

HPLC-MS法测定罗汉果中6种罗汉果甜苷含量

利用高效液相色谱串联质谱(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS),分析比较不同产地罗汉果中6种罗汉果甜苷(11-氧-罗汉果皂苷V、罗汉果皂苷V、罗汉果皂苷IV、赛门苷I、罗汉果皂苷III E和罗汉果皂苷II E)的含量,同时利用该方法分析罗汉果甜苷提取和大孔树脂D101纯化过程中该6种成分的含量变化情况。样品经甲醇超声提取,色谱分离采用ZORBAX SB-Aq色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),梯度进行洗脱,柱温25℃,流速0.5 m L/min。质谱分析采用电喷雾电离源(electrospray ionization,ESI),正离子模式检测。结果表明:6种甜苷在0.75 mg/L~9.00 mg/L范围内呈现良好的线性关系(r0.9975),检测限为0.38 mg/kg~1.28 mg/kg,平均加样回收率89.3%~105.6%。经分析测定发现,桂林市永福百寿乡适宜种植高品质罗汉果,利用大孔树脂D101可很好地进行罗汉果甜苷富集和纯化,同时利用的HPLC-MS方法,可为罗汉果种植和生产提供质量分析控制方法。     

气-质谱联用法测定罗汉果中有机磷农药残留

建立气相色谱-质谱联用法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)测定罗汉果中11种常用有机磷农药残留量的方法。样品经石油醚-丙酮(体积比2∶1)超声提取,提取物通过活性炭净化后选用HP-5MS毛细管柱对11种有机磷农药进行分离,GC-MS检测,外标法计算含量。11种有机磷农药在线性范围内(10μg/L~750μg/L),相关系数均大于0.999 0,检出限为LOD为0.432μg/L~3.901μg/L。样品3个加标水平(0.125、0.25、0.375μg/g)下,罗汉果中11种有机磷农药回收率均在83.3%~112.4%,相对标准偏差(RSD,n=6)为1.45%~8.28%。     

罗汉果蛋白酶的提取方法比较

就乙醇沉淀、单宁沉淀、超滤三种方法提取罗汉果蛋白酶进行了比较,结果表明,超滤法所获得的蛋白酶质量最好,此时蛋白酶的酶活回收率为52.32%。     

罗汉果蛋白酶的化学修饰

通过对罗汉果蛋白酶进行化学修饰,分析该酶结构与功能的关系。利用8种化学修饰剂对罗汉果蛋白酶进行修饰,并测定修饰后该酶的酶活的变化。结果显示:苯甲基磺酰氟(PMSF)、N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)和焦碳酸二乙酯(DEPC)对该酶的抑制作用很强,而其它修饰剂对酶活性影响不大,说明羟基、吲哚基和咪唑基可能为蛋白酶活性的必需基团,而巯基、氨基、羧基、胍基和二硫键可能并不是酶活性的必需基团。     

GC-MS法测定罗汉果中拟除虫菊酯农药残留量

建立气质联用(Gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)测定罗汉果中6种拟除虫菊酯类农药的残留量方法。样品用石油醚-丙酮混合溶剂超声提后过固相萃取小柱净化,经HP-5MS色谱柱分离,以气相色谱质谱法进行检测,用外标法计算含量。结果表明:6种拟除虫菊酯类农药在0.1μg/mL~1.0μg/mL范围内呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 1~0.999 9,检出限为0.139μg/kg~5.262μg/kg。样品中3个加标水平的回收率为83.5%~106.1%,相对标准偏差(RSD)为0.9%~6.5%。本试验所建立的方法操作简便,具有良好的回收率,精密度和灵敏度,符合检测要求,可用于罗汉果中6种拟除虫菊酯类农药残留的测定。     

罗汉果蛋白酶水解大豆蛋白研究

研究了采用罗汉果蛋白酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽的水解工艺;分析了温度、pH、底物浓度、酶与底物比(质量百分比)和时间对酶水解的影响;得到了罗汉果蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳水解工艺为温度60℃、pH9.0、底物浓度5.0%、酶与底物比5.0%、水解时间1h。