基于原子力显微图像和流变学特性的大豆种皮多糖构象分析

大豆种皮多糖(SHP)是从大豆种皮中分离纯化得到的高分子质量酸性多糖。采用原子力显微镜(AFM)观察大豆种皮多糖在溶液-云母片表面的表观形貌,探究多糖的构象特征,并通过流变学验证其构象结果。结果表明:质量浓度及离子强度显著影响大豆种皮多糖的AFM成像。随着大豆种皮多糖质量浓度的降低,多糖分子间的作用力减弱,水溶液中多糖形貌从密集堆积的条带状结构逐渐分散为网状、双链结构。0.5 mol/L KCl盐溶液中多糖形貌从交联紧密的凝胶网状结构逐渐分散为螺旋短棒状结构。离子强度对大豆种皮多糖的影响体现在多糖的螺旋紧密度上,大豆种皮多糖在水溶液中呈现伸展的柔性长链,而在0.5 mol/L KCl溶液中则为螺旋的刚性短链。SHP溶液静态流变分析验证了KCl的加入导致糖链间相互交联形成网络结构,溶液体系逐渐从流体状态转变为弱凝胶状态。     

外界条件对冬虫夏草胞外多糖构象的影响

以人工培养冬虫夏草菌丝发酵液中分离纯化的胞外多糖EPS-1A为原料,利用紫外光谱和圆二色谱研究不同外界条件如处理温度、金属离子(Ca2+)、变性剂(尿素)及化学修饰剂(刚果红)对胞外多糖EPS-1A构象的影响。结果表明：刚果红反应揭示胞外多糖EPS-1A为无规线团链构象;外界条件均不能改变胞外多糖EPS-1A在溶液中的无规线团链构象,只是在不同程度上影响多糖分子的分子内和分子间氢键相互作用,使多糖变得松散、无序。     

西藏灵菇发酵乳胞外多糖的流变学特性

以西藏灵菇发酵乳中分离纯化所得胞外多糖为研究对象,对其流变学特性进行了系统研究。结果表明,该胞外多糖的水溶液表现为典型的非牛顿假塑性流体特性,且其流动行为受胞外多糖的质量浓度、pH值、温度、离子种类和浓度的影响,具体表现为：胞外多糖溶液的黏度随胞外多糖质量浓度的升高而增加,质量浓度越高剪切稀释现象越明显;pH 4.0和pH 10.0时胞外多糖溶液黏度明显低于pH 7.0。Na＋可使胞外多糖溶液的黏度显著增大,且Na＋浓度越高,溶液黏度越大;Ca2＋可使胞外多糖溶液的黏度明显下降,但其下降幅度与Ca2＋浓度无关;温度在10～85 ℃范围内胞外多糖溶液的黏度变化很小,有很好的耐温性。加入10 mg/mL的该胞外多糖能够明显增加脱脂乳的黏度。     

植物乳杆菌QH06清除赭曲霉素A的作用及其初步应用

经过筛选、鉴定得到清除赭曲霉素A（Ochratoxin A,OTA）的植物乳杆菌QH06,并进一步研究其清除OTA的途径及其在食品中清除OTA的效果。通过研究植物乳杆菌QH06的活菌、死菌,胞内、胞外代谢物,细胞壁等对赭曲霉素A（OTA）的清除作用探究该乳酸菌清除OTA的途径,并通过分析QH06在葡萄汁中清除OTA的效果对其应用进行评价。结果表明,植物乳杆菌QH06活细胞和死细胞分别与质量浓度为100 ng/mL的OTA共培养48 h后,OTA的清除率分别为83.61%和83.51%;QH06胞内酶和胞外代谢物分别与质量浓度为100 ng/mL的OTA共培养72 h后,OTA质量浓度均在90 ng/mL之上;QH06细胞壁与质量浓度为100 ng/mL的OTA共孵育72 h后,OTA质量浓度由80.75 ng/mL（0 h）降低至13.81 ng/mL,清除率为82.90%。QH06与含质量浓度为100 ng/mL的OTA葡萄汁共培养72 h后,葡萄汁中OTA的质量浓度降低至15.23 ng/mL;在含质量浓度为20 ng/mL OTA的葡萄汁中,QH06对OTA清除率达到100%。以上结果表明植物乳杆菌QH06通过细胞壁吸附作用清除食品中OTA污染,为其在防治食品中OTA污染方面的应用提供了理论基础。     

干酪乳杆菌KW3产胞外多糖的研究

从西藏农家开菲尔粒中筛选出1株高产胞外多糖(EPS)的乳酸菌KW3,生理生化试验和16S rDNA测序结果经鉴定其为干酪乳杆菌,在乳清培养基中的胞外多糖产量达到178mg/L。体外抗氧化试验表明:KW3胞外多糖总还原力达到(138.28±5.35)mgVC/g;当其质量浓度达到200μg/mL时,对DPPH自由基的清除率37.53%,FRAP值为(600.16±15.23)FeSO4.7H2Oμmol/L。体内抗氧化试验显示KW3胞外多糖可显著降低衰老小鼠血清、肝和脑组织中的MDA含量,提高其SOD活性和GSH-Px活性。     

乳酸菌胞外多糖发酵条件优化及抗肿瘤活性的研究

该研究以胞外多糖产量为评价指标,采用单因素试验及响应面试验对副干酪乳杆菌副干酪亚种（Lactobacillus paracasei subsp. paracasei）M5L产胞外多糖的发酵条件进行优化,并采用噻唑蓝（MTT）法及实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-FQPCR）研究胞外多糖的抗肿瘤活性。结果表明,乳酸菌M5L产胞外多糖的最优发酵条件为发酵温度37 ℃、发酵时间12.8 h、初始pH值7.7、菌体浓度108 CFU/mL,在此最优发酵条件下,胞外多糖产量达到最大,为167.2 mg/mL,是优化前的1.3倍。当质量浓度为500 μg/mL的胞外多糖对Caco-2细胞处理72 h时,抑制作用最佳,抑制率达19.5%,显著增加胞内Caspase-3、Bax基因且降低Bcl-2基因的表达量,说明该胞外多糖可通过影响凋亡相关蛋白的表达来促进Caco-2细胞凋亡。     

银合欢种子多糖微结构的原子力显微镜观察

目的：通过对银合欢种子多糖的形貌观察,研究其微结构。方法：采用热水浸提法提取银合欢种子多糖,通过改变溶液的质量浓度、云母基底表面的化学修饰等不同制样方式,用原子力显微镜(AFM)可视化不同样品制备条件形成的聚集体和非聚集体银合欢半乳甘露聚糖结构形貌。结果：样品在不同制备条件下得到膜状、颗粒状的聚集体结构和非聚集体单糖分子结构。结论：银合欢种子多糖的单个糖分子呈线形螺旋状,并具有短的分枝结构,分子链间互相缠绕,而形成网格状。     

植物乳杆菌胞外多糖的脱色及其体外抑瘤效应

研究大孔吸附树脂对植物乳杆菌胞外多糖的脱色工艺,并采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测植物乳杆菌胞外多糖EPS及单一组分EPS-1、EPS-2对大肠癌细胞株HT-29的体外抑瘤效应。结果表明,选择S-8树脂,树脂用量为4g/100mL,调节胞外多糖溶液的pH值为6,在25℃条件下,糖液质量浓度为2mg/mL,静态吸附4h后脱色率为72.58%,糖保留率为69.15%。植物乳杆菌胞外多糖EPS、EPS-1和EPS-2对大肠癌细胞HT-29的体外增殖均具有显著的抑制作用(P＜0.01),且呈现出良好的量效关系。     

桑黄菌多糖体外抗氧化作用

采用化学模拟体系测定桑黄菌胞内多糖与胞外多糖体外抗氧化能力。结果表明：清除DPPH自由基时,胞内多糖的EC50值为1.09mg/mL,胞外多糖的EC50值为1.52mg/mL;清除 ·OH时,胞外多糖的EC50值为0.23mg/mL,胞内多糖的EC50值为0.78mg/mL;清除O2－ ·时,胞外多糖的EC50值为20.31μg/mL,胞内多糖的EC50值为29.97μg/mL;螯合Fe2+时,胞内多糖的EC50值为1.36mg/mL,胞外多糖的EC50值为1.66mg/mL;实验范围内胞内多糖、胞外多糖还原能力与质量浓度呈很好的线性关系。可见桑黄菌多糖抗氧化能力有明显的量效关系,且胞外多糖与胞内多糖的抗氧化能力不同。     

乳酸菌胞外多糖对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

从15株大连工业大学大连市益生菌功能研究重点实验室保藏植物乳杆菌中筛选出对人结肠癌细胞HT-29抑制率最高的乳杆菌胞外多糖,对其进行分离纯化并研究多糖对HT-29细胞增殖的影响。通过苯酚硫酸法测定15种乳酸菌胞外多糖产量、3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,MTS]测定不同浓度的粗多糖对HT-29细胞的抑制率,最终筛选出高产胞外多糖、对HT-29细胞增殖抑制率高的菌株Lactobacillus plantarum12所产胞外多糖,其胞外多糖的糖含量为54%、蛋白含量为3.6%。对其胞外多糖进行DEAE-Sepharose Fast Flow离子柱和Sepharose CL-6B凝胶柱的分离纯化,得到中性多糖组分EPS12-1和酸性多糖组分EPS12-2,2个多糖组分的糖含量分别为31.82%和35.21%,通过MTS法测定L. plantarum12菌所产粗多糖、多糖组分EPS12-1和EPS12-2分别在50、100、250、500μg/mL浓度时对HT-29细胞的抑制率,发现多糖浓度为250μg/mL时,对HT-29细胞增殖达到了最佳抑制效果,抑制率分别为27.58%、7.11%、12.00%。当多糖浓度为250μg/mL时,HT-29细胞凋亡率、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、caspase 8活性,均处在较高水平。L. plantarum12胞外多糖通过增加ROS酶活和激活caspase 8来抑制HT-29增殖。     

苯酚-硫酸法与蒽酮-硫酸法测定绿茶茶多糖的比较研究

对苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法在茶多糖测定中的差异进行比较,并对苯酚-硫酸法的检测条件进行优化,在单因素试验的基础上,选定苯酚质量分数、硫酸用量、显色时间3 个因素,利用响应面试验考察各因素变化对吸光度的影响。通过优化得到最佳测定条件为4.8%苯酚溶液1 mL、浓硫酸5 mL、显色时间29 min、检测波长488 nm。在此条件下的标准曲线在0～0.2 mg/mL范围内呈良好线性关系。该方法对3 种样品的加标回收率均不小于97.55%,重复性实验相对标准偏差为1.82%,说明此方法准确可靠、稳定性高,适合于茶多糖的测定。     

水溶性大豆多糖的分子表征和溶液流变学性质

采用核磁共振方法和凝胶渗透色谱（gel permeation chromatography,GPC）技术测定了水溶性大豆多糖（soluble soybean polysaccharides,SSPS）的酯化度和分子质量,并研究了SSPS在水溶液中的分子构象和流变学性质。结果表明,核磁共振方法可以快速准确地测定SSPS的酯化度,水溶液中SSPS呈紧密的无规线团构象,具有很低的本征黏度,SSPS水溶液表现出很强的剪切变稀行为,并具有明显的触变性。     

短枝六道木嫩叶营养成分与凝胶提取物特性及抗氧化性研究

为开发短枝六道木新资源保健食品,对短枝六道木嫩叶营养成分进行分析,通过水提取乙醇沉淀法鉴定短枝六道木嫩叶凝胶提取物并测定其半乳糖醛酸含量、酯化度、水溶性、凝胶特性及抗氧化性。结果表明：短枝六道木嫩叶富含蛋白质、多糖、果胶、钙、铁、锌、硒、β-胡萝卜素、泛酸等营养成分和7 种人体必需氨基酸,具有良好营养价值;短枝六道木嫩叶粗多糖含量5.68%,果胶含量为15.9%,凝胶提取物含量为21.69%,凝胶提取物的半乳糖醛酸含量为68.72%,酯化度为61.62%,水中溶解度为98.63%,凝胶提取物的主成分为水溶性高甲氧基果胶和粗多糖,有良好亲水性、持水性;短枝六道木嫩叶所形成凝胶硬度、内聚力、黏稠度、黏性指数均随提取水的比例升高而减小,以低于10 倍水提取所制作的凝胶具有良好黏弹性和咀嚼感;凝胶提取物质量浓度低于0.5 g/100 mL时,抗氧化能力随凝胶提取物质量浓度增加而增强,高于0.5 g/100 mL时,抗氧化能力随凝胶提取物质量浓度增加而减缓,最终达到平衡,其1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力为79.68%,亚铁还原能力（ferric reducing antioxidant power,FRAP）值为8.86 mmol/L,具有较强抗氧化能力。证明短枝六道木嫩叶具有良好营养和抗氧化功能,可作为保健功能食品开发原料。     

Fe3+对大豆种皮果胶类多糖凝胶球凝胶特性的影响

通过质构分析和热重分析等方法,探讨FeCl3浓度和大豆种皮果胶类多糖（soy hull pectic polysaccharide,SHPP）质量浓度对其所形成凝胶球的凝胶强度、溶胀性及水分解吸行为的影响。结果表明：适宜的FeCl3浓度和较高的SHPP质量浓度有利于凝胶体系形成凝胶强度大、溶胀率大、网状结构致密的凝胶球。其中,0.3 mol/L FeCl3与6.0 g/100 mL SHPP所形成凝胶球的强度和溶胀率均最大,分别为116.33 g、366%;在实验条件下,0.3 mol/L FeCl3与6.0 g/100 mL SHPP形成的凝胶球进行水分解吸时,指前因子和活化能均最大,表明其凝胶网状结构较致密。     

芽孢杆菌活性多糖的分离纯化及合成基因研究

选用自行选育的1 株活性多糖高产菌株（Bacillus amyloliquefaciens LPL061）,经醇沉、除蛋白、透析、冷冻干燥从其发酵上清中分离得到活性多糖粗品,并采用色谱纯化技术进一步纯化,得到1 个中性糖组分（EPS1）和1 个酸性糖组分（EPS2）。根据GeneBank中已报道芽孢杆菌产糖相关基因设计引物,经PCR扩增获得解淀粉芽孢杆菌LPL061的5 个EPS生物合成相关基因。对其功能预测分析表明这些基因主要参与EPS合成过程多糖聚合、糖基转移、糖链长度控制以及多糖转运和输出。     

总状蕨藻多糖体外抗肿瘤作用

以总状蕨藻为原料,采用热水与蛋白酶酶解相结合浸提得到总状蕨藻多糖提取液,经Sevag法和透析法等步骤纯化后得到总状蕨藻粗多糖（Caulerpa racemosa polysaccharide,CRP）。紫外扫描结果表明CRP中含有少量蛋白质。红外光谱分析CRP有一般糖类物质的特征吸收峰,含硫酸基团,是一种酸性多糖。采用噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT）法研究了CRP对HeLa、K562、CNE-2z细胞的抑制作用,结果表明CRP对3 种肿瘤细胞都有一定的抑制作用,在24～72 h内,随着时间的延长,抑制率逐渐增强,在0.062 5～4 mg/mL质量浓度范围内,随着质量浓度的增加,抑制率逐渐增强,对HeLa、K562和CNE-2z细胞的抑制率最大分别达到61.7%、85.9%和90.3%。     

绞股蓝内生真菌多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的:探究绞股蓝内生真菌JY25多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,为绞股蓝内生真菌多糖的应用提供基础数据。方法:确定4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(4-N-trophenyl-α-D-glu-copyranoside,PNPG)比色法检测α-葡萄糖苷酶活力的最佳条件,以阿卡波糖为阳性对照,采用优化后的最佳条件测定JY25多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并确定抑制类型、计算抑制常数;以Caco-2细胞作为体外产α-葡萄糖苷酶模型,测定JY25多糖的抑制效果。结果:反应时间30 min、反应温度44℃、pH 6.8、底物(PNPG)浓度5 mmol/L为PNPG比色法的最佳反应条件。以此优化条件进行比色,当JY25多糖质量浓度为6.15 mg/mL时,对α-葡萄糖苷酶抑制率达到最大(68.21%);JY25多糖的半数抑制浓度(IC_(50))为(2.46±0.42)mg/mL,抑制常数Ki为1.15 mg/mL,JY25多糖为竞争性抑制剂。在JY25多糖质量浓度为10.00 mg/mL时,对培养16 d的Caco-2细胞所产α-葡萄糖苷酶的抑制率达到16.48%。结论:体外实验证实JY25多糖具有竞争性抑制α-葡萄糖苷酶的作用。     

基于石墨烯/离子液体构建免疫传感器快速测定食品中黄曲霉毒素B1

采用壳聚糖、石墨烯和1-丁基-3-甲基咪唑基四氟硼酸盐复合膜修饰玻碳电极,包埋固定黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）抗体,构建了一种免疫传感器,用于快速测定食品中的AFB1。在pH值为7.0含1 mmol/LK3[Fe(CN)6]和0.1 mmol/L KCl的磷酸盐缓冲溶液中,基于AFB1抗体与抗原之间的特异性免疫反应,以K3[Fe(CN)6]为探针,运用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究免疫反应对传感器响应电流的影响。在优化实验条件下,免疫传感器峰电流的降低值随溶液中AFB1质量浓度对数的增大而增大,且二者在0.1～8.1 ng/mL范围内呈线性关系,其检出限为0.04 ng/mL（RSN=3）。该免疫传感器的稳定性和重复性较好,利用该法对花生和玉米油样品中AFB1进行检测,回收率为94.73%～104.41%,检测结果与高效液相色谱法基本一致,用于食品中AFB1的快速检测是可行的。     

一株西藏灵菇嗜热链球菌产胞外多糖的流变学特性

以一株西藏灵菇嗜热链球菌为研究对象,系统地研究质量浓度、剪切速率、热处理、pH及盐离子对其所产胞外多糖流变学特性的影响。结果表明,该胞外多糖溶液具有良好的增稠性,质量浓度为8.6 mg/mL时其黏度可达到85.63mPa.s;多糖溶液呈高度假塑性,剪切稀释现象明显;热稳定性差,当温度由20℃升至100℃时,其黏度下降了74.4%,分别于60,80℃热处理150min,对多糖溶液黏度有不同程度的影响;多糖溶液黏度在酸性条件下相对稳定,但在中性和碱性条件下明显升高;并且随Ca2+浓度升高,多糖溶液黏度显著下降。