牛奶蛋白改性纤维免疫层析快速鉴定方法

建立了一种快速、简单、准确的牛奶蛋白改性纤维鉴定方法。使用ESI(Electron Spray Ionization)/TOF(Time of Flight)质谱对牛奶蛋白改性纤维胰蛋白酶解肽进行分析,确定了牛奶蛋白改性纤维特征肽段,使用该特征肽段制备得到特异性单克隆抗体;将酪蛋白包被于T线,建立了针对牛奶蛋白改性纤维的免疫层析快速鉴定方法。该方法以7M尿素为提取剂,检出限为氨基酸质量分数为1.00%的牛奶蛋白改性纤维(相当于混纺4.00%牛奶蛋白改性纤维的纱线),检测时间不超过20 min(含前处理)。该方法无需使用分析仪器,对常见的纤维没有非特异性识别,纤维的染色不会对检测结果造成干扰。     

基于酶联免疫分析的大豆蛋白复合纤维鉴定方法

不同蛋白来源的改性纤维成本差异较大,为区分纤维的蛋白来源,建立了一种简单、准确的大豆蛋白复合纤维鉴定方法。根据大豆蛋白现有的氨基酸序列和蛋白交联的位点设计一段特征肽半抗原,将该特征肽段偶联载体蛋白,免疫实验动物,并制备得到特异性单克隆抗体。将优化浓度的抗原包被于酶标版,抗体偶联辣根过氧化物酶,建立针对大豆蛋白复合纤维的酶联免疫吸附实验(ELISA)。该方法采用7M尿素作为提取剂,检出限为1. 8%氨基酸含量的大豆蛋白复合纤维,检测时间不超过70 min(含前处理)。该方法对常见的纤维无非特异性识别,纤维染色不会对检测结果造成干扰。     

肉眼读取-荧光微球竞争免疫层析法半定量快速检测保健食品中的西布曲明

建立一种新型的西布曲明半定量检测方法。通过在检测试纸条上设置4?条包被有抗原的检测线,和被测抗原反应后的剩余标记抗体与包被抗原的反应浓度可梯度降低,实现在单一试纸条构建多级灵敏度的免疫反应,从而建立基于波长470?nm手电筒作为激发光源、肉眼读取结果的西布曲明荧光微球竞争免疫层析半定量检测方法。对吐温-20表面活性剂含量、标记抗体量、包被抗原质量浓度、硝酸纤维膜类型和层析反应时间等参数进行优化,通过试纸条上显色条带的数量对西布曲明进行半定量。结果显示,在优化的实验条件下,该检测方法检出限为0.05?μg/mL,检测范围为0～9.00?μg/mL。该方法无需使用专门的检测仪器,可在15?min内完成检测,其结果与液相色谱-串联质谱法检测结果一致。该方法操作简便、灵敏度高、结果可靠,可用于保健食品中西布曲明非法添加物的定性和半定量筛查分析。     

基于衍生化3-氨基-2-恶唑烷酮的夹心酶联免疫分析

建立一种3-氨基-2-恶唑烷酮（3-amino-2-oxazolidinone,AOZ）夹心免疫检测方法。通过1,6-己二醇连接2-硝基-4-羧基苯甲醛和生物素合成针对AOZ的新型衍生试剂。在样品前处理时加入衍生试剂可对AOZ进行衍生,衍生产率为89%。在酶标板上包被抗AOZ单克隆抗体并以辣根过氧化物酶标记的亲和素或抗生物素抗体作为第二结合物可实现AOZ的夹心酶联免疫吸附检测（enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA）。从实际应用的角度,得到双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下两个表位的极限距离,分别为12?和13?,理想距离分别为16?和17?。在双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下的检出限分别达到1.8 pg/mL和0.8 pg/mL（以AOZ质量浓度计）,相对于竞争ELISA,其灵敏度最高提高了25倍。平均回收率为73%～85%,平均相对标准偏差为9.0%。     

牛肉真伪鉴别荧光RPA现场快检方法建立

目的:为实现现场快速检测牛肉及其制品中牛DNA成分,建立基于荧光RPA技术的快速检测方法。方法:在细胞色素C氧化酶亚型Ⅰ中的黄牛、水牛、牦牛特异性DNA序列上设计RPA引物以及exo探针,对引物对进行组合筛选,结合核酸快速提取方法,建立荧光RPA快速检测方法,并对其特异性、灵敏度测试,通过方法比对实验验证其检测准确性。结果:所建立的检测方法具有很好的特异性,检测灵敏度低至1%(w/w),并且与标准方法检测结果一致。结论:研究成功建立了牛肉真伪鉴别荧光RPA现场快速检测方法。     

燕窝唾液酸糖蛋白间接竞争酶联免疫检测方法的建立

目的 建立间接竞争酶联免疫（indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay，IC-ELISA）检测燕窝中唾液酸糖蛋白的分析方法。方法 以唾液酸糖蛋白为抗原，制备单克隆抗体，对IC-ELISA步骤中相关参数进行优化，确定最佳反应条件。结果 最佳包被抗原为1∶2000，抗体稀释倍数为1∶5000；封闭液浓度为1%牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA），封闭时间为150 min；竞争时间30 min；酶标二抗浓度稀释倍数为1∶1000，孵育时间30 min；显色时间为10 min。建立的IC-ELISA检测方法半抑制浓度(50% inhibition concentration，IC50)为8.61 μg/mL，线性范围为2.23~33.25 μg/mL，回收率为82.7%~92.0%，相对标准偏差(relative standard deviation，RSD)为1.7%~8.9%。结论 该方法灵敏度较高、特异性强，可以有效地鉴别假冒伪劣燕窝产品，具有较好的实际应用价值。     

胶体金免疫层析法快速检测配方羊奶粉中的牛β-乳球蛋白

建立了一种可快速检测配方羊奶粉中牛β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-lg)的胶体金免疫层析检测方法。通过杂交瘤技术制备β-lg单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),半抑制浓度(50% inhibiting concentration,IC₅₀)为5.87 μg/mL。将胶体金标记的β-lg mAb包被于金标垫,β-lg和山羊抗小鼠IgG标记于硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane,NC膜)分别作为检测线(T线)和质控线(C线),开发了可检测β-lg的免疫层析试纸条。该试纸条对β-lg的检测限(limit of detection,LOD)值为50 μg/mL,与其他基质成分均未产生有效交叉反应,对全脂山羊乳粉中掺杂脱脂牛奶粉(nonfat skim milk,NFSM)、脱盐乳清粉(desalted whey powder,DWP)和乳清蛋白粉(whey protein powder,WPP)的LOD值分别为5%、5%和0.1%。运用该方法对9个市售配方羊奶粉进行分析,检测结果与商品化酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒一致。该方法前处理快速简单,5 min即可裸眼判定结果,可用于配方羊奶粉商品的现场快速检测。