甲基营养型芽孢杆菌产氨肽酶的发酵优化

氨肽酶能从多肽链的N端顺序水解并释放氨基酸,广泛应用于食品、工业、医学等领域.该研究利用单因素试验、正交试验及响应面设计试验方法,优化了甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophilus) CC发酵产氨肽酶的条件.其发酵最佳培养基组成为1％蔗糖、1.5％黄豆饼粉、0.1％氯化钠、0.05％磷酸二氢钾和0.02％硫酸镁.最适发酵条件为初始pH值为8.5,发酵温度37℃,摇床转速180r/min,接种量6％,发酵时间15h.在上述条件下,氨肽酶的产量从优化前的83.09U/mL提高为310.05U/mL,比优化前增加了2.73倍.     

解淀粉杆菌DC-12产纤溶酶发酵条件的优化

用响应面法对产纤溶酶的解淀粉芽孢杆菌D-12的发酵条件进行了优化。首先通过单因素实验考察了各因素对产酶的影响,后在此基础上采用Plackett-Burman设计得出发酵时间、糊精浓度、细菌学蛋白胨浓度三个最重要的影响因素,接着通过最陡爬坡实验逼近酶活的最高区域,然后通过中心组合设计实验对显著因素进行优化,最后响应面法进行分析,得到的最佳发酵条件为:细菌学蛋白胨浓度2.25%,糊精浓度2.65%,发酵时间45 h。在此条件下,酶活为96.340 IU/mL。验证实验所得酶活为98.947 IU/mL,因此本优化工艺结果比较可靠。     

助朋基因在Bacillus subtilisWB800中的克隆表达

对源自Bacillus subtilis168的具有纤溶活性的基因序列（WprA）进行克隆,然后将wpra基因克隆到大肠杆菌．枯草杆菌穿悛载体pBE3中,构建表达载体pBE-WprA,将重组载体转化到Bacillus subtilisWB800中,实现了WprA基因在Bacillus subtilisWB800中的表达。结果表明,WprA基因在Bacillus subtilisWB800中的对数生长期和平衡期均获得了表达,且产物被分泌到胞外。     

菌株BS-3的鉴定及其真菌抑制活性的初步研究

从土壤中分离得到一株对多种植物病原真菌具有抑制作用的菌株,将其命名为BS-3。该菌株对水稻纹枯病、稻瘟病、苦瓜枯萎病等病原真菌均有较强抑制作用。通过对菌株BS-3的16S rDNA的序列测定和同源性比对,发现它与Bacillus licheniformis、Bacillus subtilis、Bacillus amyloliquefaciens等的16S rDNA有高达100%的同源性,结合形态和生理生化鉴定指标,将其鉴定为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis。选用受其抑制作用较明显的水稻纹枯病病原真菌瓜亡革菌（Thanatephorus cucumeris）作为指示菌,牛津杯法检测BS-3菌株发酵产物的抑菌活性。结果表明BS-3菌株的发酵上清液滤液、硫酸铵处理离心沉淀对水稻纹枯病菌有较强抑菌活性。此外,该抗真菌物质具有较强热稳定性。