芽孢杆菌LWM1的分离鉴定及其对蜡样芽孢杆菌的抑制作用

从土壤样品中分离出10株芽孢杆菌（Bacillus spp.）,以蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）为指示菌株,采用牛津杯扩散法筛选出一株具有较强抑菌活性的菌株LWM1。综合形态学、生理生化试验、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）及16S rDNA基因序列同源性分析,菌株LWM1被初步鉴定为一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,并研究了其在马铃薯葡萄糖水（PDW）和营养肉汤培养基（NB）中发酵上清液对蜡样芽孢杆菌的抑制效果。结果表明,PDW培养基更有利于菌株LWM1生长和抑菌物质产生。因此,可利用PDW培养基为主要底物大规模发酵制备菌株LWM1的抑菌物质。     

广谱拮抗菌株的筛选诱变及抗菌物质分离鉴定

分离和鉴定产生广谱抗菌活性物质的菌株,并对抗菌物质分离鉴定。通过形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定菌株。采用紫外线-硫酸二乙酯化学复合诱变的方法,获得抗菌能力强、遗传稳定的高产菌株。分别用甲醇提取、凝胶过滤色谱（Sephadex G-10）和半制备高效液相色谱分离纯化抗菌物质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）技术对抗菌物质鉴定。本研究从土壤中分离出67 株芽孢杆菌。其中8 株表现出较强的抗菌作用,菌株XF32表现出显著广谱抑制活性,并鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。菌株XF32对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、铜绿假单胞菌7 种病原菌具有抗菌活性,对酿酒酵母、黑曲霉、深绿木霉和尖孢镰刀菌有抗真菌活性。经诱变筛选得到突变菌株XF32-22,对金黄色葡萄球菌的抑菌活性比原始菌株显著提高,分离纯化抗菌物质,得到单一的抗菌成分。MALDI-TOF-MS分析表明抗菌物质为Fengycin系脂肽化合物。采用复合诱变技术,可以有效地提高地衣芽孢杆菌脂肽的产量。成功分离得到对多种病原细菌具有较强抑制作用的Fengycin类脂肽,同时该菌株在拮抗植物病原真菌方面也有明显效果。XF32-22菌株在食品保鲜和农业生物防治方面具有很好的应用前景。     

浓香型皇台大曲可培养细菌群落结构及其产淀粉酶的研究

采用稀释平板法,从浓香型皇台大曲中分离纯化出73株细菌菌株,经PCR扩增其16S rDNA并测序,比对分析发现这些纯化的细菌菌株中有23株16S rDNA序列各异的可培养细菌,这些菌株分别为Bacillus licheniformis16株、Bacillus subtilis2株、Bacillus amyloliquefaciens1株、Bacillus cereus1株、Bacillus atrophaeus1株、Bacillus sonorensis1株和Brevibacillus sp.1株;采用透明圈法和液态发酵法对大曲中可培养细菌产淀粉酶性能进行检测,结果表明Bacilluslicheniformis、Bacillus subtilis和Bacillus cereus的一些菌株产淀粉酶的活性较高,其中,Bacillus licheniformis的数量最多,是重要的白酒酿造功能菌。     

一株拮抗储粮真菌的细菌菌株鉴定和初步研究

在粮库仓储玉米中分离到一株强烈拮抗储粮真菌的细菌,初步研究表明该菌株对储粮中的主要产毒真菌如黄曲霉菌、赭曲霉菌、三线镰刀菌等都具有强烈的拮抗作用。利用生理、生化等常规技术并结合16S rDNA分子鉴定方法,最终确定该菌株为一株解淀粉芽孢杆菌,命名为Bacillus amyloliquefaciens ASAG1。进一步确定了ASAG1菌株的摇瓶发酵最适培养基、发酵条件,并对发酵液中,活性抑菌物质的性质进行了初步研究和纯化。该研究的开展为进一步明确活性抑菌组分提供了借鉴,同时也为利用生物技术防控粮食中的产毒真菌提供了一个新思路。     

骆驼刺源产乳酸的地衣芽孢杆菌分离鉴定和菌株特性研究

为了探讨产乳酸的芽孢杆菌对青贮发酵的作用。以青贮三个月的豆科牧草疏叶骆驼刺为材料,进行MRS培养基分离、纯化细菌,革兰氏染色,芽孢染色,细胞形态学观察,生理生化特性鉴定和16S rDNA序列分析。结果显示,菌株杆状,G+,有芽孢,产乳酸;16S rDNA测序结果显示该菌株与模式菌株ATCC 14580的相似性为99.3%。结果表明,该菌为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。     

桃果实褐腐病拮抗菌的筛选、鉴定及其拮抗活性

以桃褐腐菌(Monilinia fructicola)为靶菌,采用稀释分离法和平板对峙法从桃园土壤中筛选出对病原菌有较强拮抗作用的菌株12a和14b。通过离体和活体实验对拮抗菌抑菌活性进行研究,经菌株形态、生理生化特性及16S rRNA基因序列分析进行菌株鉴定。结果表明:菌株12a和14b分别鉴定为死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)和高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis),其无菌发酵滤液和挥发性代谢产物对桃褐腐菌的生长有显著的抑制作用,其中12a挥发性代谢产物对其菌丝生长的抑菌效果更为显著(p0.05)。两株拮抗菌的菌液浸泡和熏蒸桃果实,延缓了桃褐腐病发病时间,有效地控制了病斑的扩展。     

人参根腐病拮抗菌的筛选、鉴定及其抑菌活性

目的：从人参根际土壤中筛选出拮抗人参根腐病的菌株,初步研究其抑菌作用。方法：采用平板稀释法从人参根际土壤中分离获得菌株,以人参根腐病菌为靶标菌采用平板对峙法筛选出拮抗菌;通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对筛选出的拮抗菌进行鉴定;检测拮抗菌无菌发酵液对根腐病菌菌丝生长、孢子萌发的影响,同时测定拮抗菌的抑菌谱。结果：分离获得一株对人参根腐病原菌拮抗作用较强的菌株HB-3,经鉴定菌株HB-3为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。菌株无菌发酵液对人参根腐病菌菌丝生长和孢子萌发均有显著抑制作用;菌株HB-3的抑菌谱较广,对根腐病菌、疫霉病菌、锈腐病菌、菌核病菌、灰霉病菌均有一定的抑菌活性。结论：筛选得到一株解淀粉芽孢杆菌HB-3,能显著抑制人参根腐病菌的生长,对人参根腐病有较强的生物防治效果。     

罗布麻内生细菌的分离鉴定及抑菌活性

目的:研究罗布麻内生细菌及其抑菌活性,旨在深入开发新资源。方法:以红花罗布麻为研究对象,采用平板分离法从中分离内生细菌,利用牛津杯法对其发酵物进行抑菌活性研究,对有抑菌活性的菌株进行形态特征观察和16S rRNA序列同源性分析。结果:筛选出的D1菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌四株供试指示菌均有明显的抑制作用,D3菌株对藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌有一定的抑菌作用。结合菌株的形态学特征和16S rRNA序列同源性分析,将D1鉴定为假单胞菌,D3鉴定为菠萝泛菌。结论:罗布麻中蕴含着具有抑菌活性的内生细菌资源,可进一步的开发利用。     

高产蛋白酶细菌的分离筛选及其种类鉴定

从广东、河北、辽宁、湖南、江苏等省份采集土壤样品9个,采用稀释涂布的方法共分离到细菌菌株44株,利用平板透明圈法对44株细菌菌株产蛋白酶能力进行初步筛选,16株菌株出现了明显的透明圈,菌株G1-b、GD-2-2、HX-B-1的蛋白酶活性最强,透明圈/菌落直径比(HC)在3.5以上;比色法测定产酶活性强的3株菌株的蛋白酶酶活力,GD-2-2菌株的产酶能力最强,酶活力达到447.6U/mL。通过对细菌GD-2-2菌株形态学观察、生理生化实验,结合相关文献,初步鉴定菌株GD-2-2属于芽孢杆菌属。对菌株GD-2-2的 16S rDNA序列分析表明,该菌株序列与细菌Bacillus licheniformis strain YB915 (GQ996726.1)的16S rDNA序列同源性达100%,综合形态学观察和生理生化实验结果,鉴定GD-2-2菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。     

发酵面团中抗单增李斯特氏菌乳酸菌的筛选及鉴定

以单增李斯特氏菌为指示菌,通过牛津杯双层平板法对从发酵面团样品中分离出的54株乳酸菌进行抑菌试验。在排除有机酸,过氧化氢的干扰后,其中1株乳酸菌的发酵上清液对单增李斯特氏菌仍然表现出明显的抑制作用。其抑菌活性在酸性条件下较强,在加入蛋白酶K和胰蛋白酶以及100℃以上热处理时明显下降甚至消失,说明其代谢产物中含有蛋白质类抑菌物质,是一类细菌素。经Trcine-SDS-PAGE试验分析该细菌素分子质量为25 kDa;经过生理生化试验及16S rDNA序列同源性分析,该菌被鉴定为Lactobacillus curvatus。     

牛栏山二锅头酒醅中芽孢杆菌分离鉴定及发酵风味分析

从牛栏山二锅头酒醅中分离筛选出5株产风味物质能力较好的芽孢杆菌,通过16SrDNA序列分析和构建系统发育树,5株细菌分别为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。分别对它们进行发酵风味分析,其发酵液经固相微萃取和GC-MS分析,并除去空白培养基中物质,地衣芽孢杆菌BL-1发酵液共检测得到14种风味物质,蜡样芽孢杆菌BC-1和短小芽孢杆菌BP-1发酵都得到12种风味物质,枯草芽孢杆菌BS-1好氧发酵共得到16种风味物质,枯草芽孢杆菌BS-2厌氧发酵共得到19种风味物质。除短小芽孢杆菌外,其他4株芽孢杆菌都含有较多数量的酯类化合物,且主要代谢风味物质都是3-羟基-2-丁酮,而短小芽孢杆菌BP-1则含有数量较多的烃类化合物,其主要风味物质是苯乙醇。     

一株生防菌LX-07的鉴定及其拮抗物的理化特性

LX-07菌株是从玉米根系土壤中分离筛选获得的一株具有抗真菌活性的细菌,通过菌落、菌体形态及16SrDNA序列分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。抑菌谱测定结果表明,该菌产生的拮抗物对常见植物病原真菌具有不同程度的拮抗作用,表现广谱抗真菌活性。以链格孢霉作为指示菌,对拮抗物的理化特性进行了研究,结果表明:拮抗物在pH8.0下,在40～100℃范围内,抑菌活性不发生变化,121℃处理30min后抑菌活性略有下降,但仍为对照的90%以上;在室温下,pH2.0～12.0范围内拮抗物保持稳定,抑菌活性不受影响;拮抗物对胰蛋白酶不敏感,对胃蛋白酶、蛋白酶K敏感。     

麦麸阿魏酸糖酯微生物发酵工艺优化及体外抗氧化和益生活性评价

以麦麸为原料,对固态发酵制备麦麸阿魏酸糖酯（Feruloylated glycosides,FGs）的工艺进行优化,并对其体外抗氧化及益生活性进行评价。以植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酿酒酵母为发酵菌种,采取单菌发酵和混菌发酵筛选最优菌种组合,考察接种量、发酵温度、发酵时间、料水比对麦麸FGs产量的影响,通过响应面试验设计优化发酵工艺。结果表明:以枯草芽孢杆菌:地衣芽孢杆菌:酿酒酵母=1:1:1发酵麦麸时,FGs产量最高;最佳固态发酵工艺条件为发酵温度42.5℃,发酵时间58.5 h,接种量10.7%,料水比1:1.16（g/mL）,在此条件下FGs产量为1273.18 nmol/g;抗氧化实验结果表明,DPPH自由基清除率高达87.42%（1 mg/mL）,羟基自由基清除率为33.68%（4 mg/mL）,还原力为1.078（4 mg/mL）。发酵麦麸FGs可有效促进嗜热链球菌和植物乳杆菌的增殖。综上所述,以枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和酿酒酵母混菌发酵制备的麦麸FGs有一定的抗氧化和益生活性。     

三种海藻内生真菌的分离及其抑菌活性研究

从烟台浅海处采集到的鼠尾藻、裙带菜、海带三种海藻表面消毒后用PDA培养基将内生真菌进行分离纯化,将纯化的内生真菌进行液体培养7d后离心,菌丝体烘干研磨后用无水乙醇提取,分别测定发酵液和菌丝体乙醇提取物对七种植物病原真菌的抑菌活性。结果表明:三种发酵液都至少对三种病原菌有大于50%的抑菌活性,裙带菜发酵液对六种病原菌都有大于50%的抑菌率,最高为78.8%,说明它们能产生广谱高效的胞外代谢产物;而菌丝体提取物的抑菌活性并不明显,说明三种海藻内生真菌产生的胞内代谢产物无明显的抑菌活性。     

中高温大曲中芽孢杆菌多样性及代谢特征研究

为探究大曲中芽孢杆菌的代谢特征和功能性,首先采用传统培养法结合分子生物学技术从中高温大曲中分离、鉴定芽孢杆菌,对其微生物多样性进行分析;然后通过耐受性分析从中筛选优势菌,最后利用代谢组学方法分析其代谢特性。结果表明,共分离、鉴定得到49株芽孢杆菌,其中3株芽孢杆菌耐受性较好,分别为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）BA-5、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BS-7和贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）BV-10。从单菌株及混合菌株发酵后的发酵液中共检测到23种挥发性代谢物和52种非挥发性代谢物,其中,愈创木酚以菌株BS-7单独培养时含量最高,为8.56 mg/L。同时芽孢杆菌混合发酵会增加4-乙烯基愈创木酚的生成量,在菌株BV-10和BA-5混合培养后,达到104.47 mg/L,说明芽孢杆菌单菌株及种间协同作用对白酒酿造中的特征物质形成具有重要影响。     

一株地衣芽孢杆菌的分离及在大豆肽发酵中的应用

从土壤中分离得到1株蛋白酶高产菌株,经鉴定为地衣芽孢杆菌。以大豆分离蛋白为原料,用地衣芽孢杆菌来发酵生产大豆多肽,通过对发酵液中大豆蛋白起始浓度、发酵液初始pH值、发酵温度、摇瓶转速、发酵时间等因素进行研究,以多肽得率为指标初步探索了发酵工艺条件,并以大豆多肽含量为指标,采用响应面分析法,对发酵法制备大豆多肽的生产工艺进行了优化。结果表明,在大豆蛋白起始浓度为3%,初始pH值为6.5,发酵培养温度34.0℃,摇瓶转速180r/min,发酵时间为18h～21h的条件下,发酵大豆蛋白所得多肽的含量可达19.2mg/mL,多肽得率达到70%,且所得到的大豆多肽发酵液具有良好的口感。     

高产红曲色素红曲霉菌株的筛选及抑菌试验的研究

用麦芽汁分离培养基从红曲中分离到1株产红曲色素较高的红曲霉S8.研究了S8发酵培养时间对红曲色素及干重的影响,结果表明,当培养时间为72h时,红曲色素及干重均达到最大,分别为158U/mL、0.6657g/L.同时还研究了发酵上清液的抑菌性,结果表明其上清液对指示菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、短小杆菌、枯草芽孢杆菌)均有较强的抑菌活性.     

Inhibition of phytopathogenic fungi by essential oil, hydrosol, ground material and extract of summer savory (Satureja hortensis L.) growing wild in Turkey

The antifungal activities of the essential oil, hydrosol, ground material and extract of summer savory (Satureja hortensis L.) on mycelial growth of Alternaria mali Roberts and Botrytis cinerea Pers. were determined. All doses of extract inhibited 100% the mycelial growth of both fungi, and exhibited a fungicidal effect. The 15% level of hydrosol and the 1.0% level of ground material had a 100% effect on B. cinerea. The other doses showed weak inhibition on mycelial growth of the fungi, and antifungal activity of the essential oil varied depending on concentrations. While the levels of essential oil show fungistatic effect, the increasing doses of hydrosol and ground material showed a fungicidal effect against B. cinerea and A. mali. While the ground material had not showed any fungicidal activity against mycelial growth of A. mali, the 1% and 1.5% levels of the ground material exhibited a fungicidal effect on B. cinerea. The results obtained from this study may contribute to the development of environmentally safer alternatives to protect the spoilage of food products from pathogenic and saprophytic fungi.