葡萄糖氧化酶基因在黑曲霉中的分泌表达

通过PCR扩增从一株葡萄糖氧化酶生产菌黑曲霉中克隆得到1818bp葡萄糖氧化酶基因GOD,将GOD基因与糖化酶基因的5’同源臂、3’同源臂进行重叠延伸,构建葡萄糖氧化酶基因的表达框。将此表达框插入载体pSZH中,构建黑曲霉同源重组表达载体pSZH-GOD。将载体pSZH-GOD通过冻融法转化农杆菌AGL1,进而通过农杆菌介导法转化高产糖化酶的黑曲霉。经潮霉素筛选和PCR鉴定获得8株重组菌株。对8株重组菌株的发酵液上清液进行酶活测定,结果表明葡萄糖氧化酶基因在高产糖化酶的黑曲霉中得到了分泌表达,静置培养6d后其分泌表达的葡萄糖氧化酶酶活最高可达1.166U/mL,而在出发菌株中检测不到葡萄糖氧化酶的分泌表达。同时,重组菌株胞内表达的葡萄糖氧化酶最高酶活可达11.45U/mL,是出发菌株的266倍。此研究结果为简化葡萄糖氧化酶发酵生产工艺、提高酶产量提供了新的途径。     

绵羊IGF-Ⅰ基因剪接异构体克隆及生物信息学分析

胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor I,IGF-Ⅰ)是机体重要的生长因子,可作为培育高产、优质的毛用、肉用家畜新品种时重要的候选基因,但其在转录过程中存在着选择性剪接现象。本研究成功克隆得到了绵羊IGF-Ⅰ基因Ⅰ类Ea型和Eb型两种剪接异构体,并结合生物信息学方法对其结构与功能进行分析。研究结果表明,克隆得到的绵羊IGF-Ⅰ基因Ⅰ类Ea型与GenBank数据库信息相一致,预测编码154个氨基酸;IGF-Ⅰ基因Ⅰ类Eb型为新发现的剪接异构体,预测编码188个氨基酸。信号肽分析显示两剪接异构体均在49~50位氨基酸处存在潜在的信号肽切割位点;系统进化树分析显示两种剪接异构体在进化上均与哺乳动物更为接近,与灵长类、啮齿类和两栖类较远;蛋白理化性质分析显示,两剪接异构体在等电点及亲疏水性上存在部分差异,但总体上表明疏水性较弱,亲水性较强,为亲水性氨基酸;亚细胞定位结果表明二者均为分泌型蛋白质,主要存在于分泌途径;两剪接异构体均存在两个跨膜螺旋,但不存在明显的跨膜区,不是跨膜蛋白,二者含有不同数量的糖基化位点和磷酸化位点;蛋白质二级结构分析显示两剪接异构体均以α-螺旋为主,蛋白质三级结构分析显示为明显的弯曲状螺旋结构。     

自然发酵风干肠中葡萄球菌的筛选与鉴定

以自然发酵风干肠为研究对象,分析了风干肠中细菌总数、葡萄球菌和乳酸菌的变化情况,结果表明,发酵初期葡萄球菌受到乳酸菌的抑制,增长缓慢;发酵后期乳酸菌生长进入衰退期,葡萄球菌开始快速繁殖。通过对风干肠中葡萄球菌的分离筛选,共鉴定出5株符合生产要求的葡萄球菌,分别为模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans),木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus),腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus),表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)和克氏葡萄球菌(Staphylococcus kloosii)。     

不同花中总黄酮的提取及其抗氧化强度的比较

以80%乙醇作提取剂对20种常见饮用花中的总黄酮类物质进行提取,然后采用流动注射化学发光法对总黄酮的抗氧化性与稳定性进行研究.实验结果表明:各种花的黄酮提取物都具有一定的抗氧化作用,且有较好的稳定性,其中芍药花、金莲花、玫瑰王黄酮含量明显高于其他17种花,三者的黄酮含量分别为8.15 mg/g、7.79 mg/g,7.78 mg/g(以干重计),抑制率分别为91.0%,82.6%,82.5%.     

基于PDF的文献管理软件的开发

主要介绍了如何开发基于PDF的文献管理软件,并且对于在开发过程中所用到的一些关键技术给出了详细的介绍,最后分析了该软件的应用性,展望了文献管理软件未来的发展趋势。     

麦蓝菜对奶牛产奶量及乳成分的影响

选用15头体质量、胎次、产奶量均相近中国荷斯坦奶牛,随机分为A、B、C三组(n=5)∶A组(对照组)饲喂基础日粮;B组(试验组1)饲喂基础日粮+50 g麦蓝菜种子;C组(试验组2)饲喂基础日粮+150 g麦蓝菜植株.试验周期24 d,每天测定各组奶牛产奶量及乳成分,研究麦蓝菜对奶牛产奶量及乳成分的影响.结果表明:B组较A组产奶量提高了15.56％ (P＜0.01),牛奶乳蛋白和干物质分别提高了11.9％和5.1％(P＜0.01),乳脂率提高了9.4％(P＜0.05),A、B两组间乳糖含量差异不显著;C组较A组产奶量提高了3.48％(P＜0.01),牛奶乳蛋白和干物质体分别提高了6.3％和4.9％(P＜0.01),乳脂率和乳糖分别提高了9.1％和6.6％(P＜0.05).研究表明,基础日粮中添加麦蓝菜植株和种子均可以显著提高奶牛产奶量和乳品质.     

低温弱光对果菜类蔬菜作物气孔特性的影响

[目的]研究低温弱光对果菜类蔬菜作物气孔特性的影响.[方法]通过比较低温弱光处理组(温度为15℃/8℃,光照为4 000lx)与对照组(温度为25℃/18℃,光照为11 000 lx),研究番茄、辣椒、茄子、黄瓜、西葫芦、甜瓜气孔相关特性的差异.[结果]低温弱光处理后,番茄、辣椒、茄子、黄瓜、西葫芦、甜瓜叶片的气孔开张比和开张度均比CK组大,且差异极显著;气孔导度(Gs)比CK组小,其中处理组茄子、西葫芦、甜瓜叶片的气孔导度与CK组差异显著;胞间CO<,2>浓度(Ci)比CK组大,其中处理组番茄、甜瓜叶片的胞间CO<,2>浓度与CK组差异显著.[结论]该研究为果菜类蔬菜作物的高产抗逆栽培提供了理论依据.     

离子液体在Knoevenagel缩合反应工艺中的研究与应用进展

Knoevenagel缩合反应被广泛应用于合成香料、化工原料及药物中间体。离子液体作为反应溶剂,能促使一系列醛、酮与活泼亚甲基化合物的Knoevenagel缩合反应顺利进行。功能化离子液体作为催化剂成功催化Knoevenagel缩合反应,避免了使用额外催化剂。离子液体被认为是环境友好的"绿色"溶剂和"可设计"溶剂,为Knoevenagel缩合反应提供了高效、环保的制备途径。该文综述了离子液体在Knoevenagel缩合反应中的应用进展。     

冬小麦膨胀素基因EXPB7工程菌构建及纤维素水解作用分析

为了寻找促进纤维素降解的有效方法来提高纤维素酶的降解效率。本研究以东农冬麦1号膨胀素基因EXPB7为供体,构建黑曲霉表达载体,以黑曲霉CICC2462为受体,采用农杆菌介导法遗传转化黑曲霉,构建膨胀素基因黑曲霉工程菌pSZHGS-EXPB7,并对该工程菌发酵液的纤维素水解促进作用进行分析。结果表明,黑曲霉重组膨胀素蛋白在对滤纸处理2 d后崩解效果明显,与出发菌株的分泌蛋白相比,具有一定的促进作用;重组菌株发酵液上清处理滤纸产生的还原糖含量显著高于出发菌株(P<0.05),与仅用酶液处理滤纸相比,能够将纤维素酶的水解效率提高32.9%。     

中度嗜盐菌Halobacillus Y5甘氨酸甜菜碱转运蛋白opuD基因的克隆及功能分析

目的克隆中度嗜盐菌Halobacillus Y5甘氨酸甜菜碱转运蛋白(betaine-choline-carnitine transporter,BCCT)opu D基因,对其结构及蛋白功能进行分析,并通过耐盐碱特性试验明确其功能。方法将经过Sau3AⅠ部分酶切回收的Halobacillus Y5基因组总DNA,与用Bam HⅠ酶切并去磷酸化的线性p UC18载体连接,电转化法导入E.coli KNabc感受态细胞中,涂布在含0.2 mol/L Na Cl、Amp~(50)的LBK固体培养基上,筛选阳性克隆,提取质粒测序后,进行生物信息学分析及耐盐碱特性检测。结果已从中度嗜盐菌-喜盐芽孢杆菌Halobacillus Y5中成功克隆了1个新的耐盐碱基因,将其命名为HY5_opu D,该基因是1个新的甘氨酸甜菜碱转运蛋白基因,其编码的蛋白氨基酸序列和结构不同于以往报道的Opu D转运蛋白,且该基因能够使KNabc在0.2 mol/L Na Cl、5 mmol/L Li Cl及碱性p H 8.0环境下生长。结论成功克隆了1个新型的opu D转运蛋白基因,为开发利用中度嗜盐菌的耐盐碱基因奠定了理论基础。